Спосіб блокування синаптичного гальмування в експерименті

Спосіб блокування синаптичного гальмування в експерименті, що включає внесення в 3 29532 блокатор кальцій-залежних калієвих каналів великої провідності тетраетиламоній (2·10-3М). Для попередження холінергічних впливів розчин Кребса містить блокатор М-холінорецепторів атропін (1·10-6М). Проте навіть одночасне застосування зазначених блокаторів не дозволяє повністю заблокувати синаптичне пуринергічне гальмування. При сумісній дії зазначених агентів у відповідь на інтрамуральне подразнення виникає невелика залишкова гіперполяризація невідомої природи. Блокатори цієї гіперполяризації невідомі. Таким чином, повністю заблокувати синаптичне гальмування із застосуванням апаміну та тетраетиламонію не вдається. Задача, яку вирішує корисна модель, що пропонується, цілеспрямоване блокування синаптичного гальмування в гладеньких м'язах кишечнику. Технічний результат, що досягається полягає в блокуванні залишкової гіперполяризації, отриманні можливості більш досконало вивчати нехолінергічне збудження та розробляти раціональні методи корекції порушень моторики кишечнику. Поставлену задачу досягають тим, що у відомому способі блокування синаптичного гальмування шляхом внесення в середовище інкубації (розчин Кребса) блокаторів кальційзалежних калієвих каналів малої провідності апаміну (5·10-7М) та великої провідності тетраетиламонію (2·10-3М), згідно корисної моделі додатково через 30хв. в середовище інкубації вносять нейролептик галоперидол в концентрації 1·10-5М, при цьому тривалість інкубації складає не менше 10 хвилин. Перевагою способу, що пропонується є блокування калієвої провідності нечутливої до дії блокаторів кальцій-залежних калієвих каналів малої та великої провідності та залишкової гіперполяризації. Сутність способу, що пропонується, пояснюється графічно, де на Фіг. представлена ілюстрація блокувальної дії галоперидолу на синаптичне гальмування в кишечнику морської свинки: 1 - контроль; 2 - пригнічення амплітуди гальмівних синоптичних потенціалів гладеньких м'язів дистальної ділянки товстої кишки морської свинки в середовищі інкубації, що являє собою розчин Кребса, в яке вносять блокатор кальцій-залежних калієвих каналів малої провідності апамін (5·10-7М) і блокатор кальцій-залежних калієвих каналів великої провідності тетраетиламоній (2·10-3М) на протязі 30 хвилин; 3 - пригнічення амплітуди гальмівних синоптичних потенціалів гладеньких м'язів дистальної ділянки товстої кишки морської свинки в середовищі інкубації, що являє собою розчин Кребса, в яке вносять блокатор кальцій-залежних калієвих каналів малої провідності апамін (5·107 М), блокатор кальцій-залежних калієвих каналів великої провідності тетраетиламоній (2·10-3М) та нейролептик галоперидол в концентрації 1·10-5М на протязі 10 хвилин; 4 4 - пригнічення амплітуди гальмівних синоптичних потенціалів гладеньких м'язів дистальної ділянки товстої кишки морської свинки в середовищі інкубації, що являє собою розчин Кребса, в яке вносять блокатор кальцій-залежних калієвих каналів малої провідності апамін (5·107 М), блокатор кальцій-залежних калієвих каналів великої провідності тетраетиламоній (2·10-3М) та нейролептик галоперидол в концентрації 1·10-5М на протязі 38 хвилин. Спосіб здійснюють таким чином: В гострому експерименті отримують фрагмент дистального відділу товстої кишки морської свинки. Ізольовані повношарові ділянки товстої кишки морської свинки промивають розчином Кребса кімнатної температури, що має такий склад: (ммоль/л): NaCl - 120,4, KCl - 5,9, NаНСО3 - 15,5, NaH2PO4 - 1,2, CaCl2 - 2,5, MgCl2 - 1,2, глюкоза 11,5. З повношарових ділянок товстої кишки морської свинки під бінокулярним мікроскопом вирізають смужки гладенько-м'язових клітин кільцевого шару гладеньких м'язів. Досліджувані м'язові смужки мають довжину біля 10мм і ширину близько 1мм. Перед початком експерименту здійснюють інкубацію м'я зових смужок морської свинки у розчині Кребса (35-36°С), не менше ніж 2 години. Усі розчини, у яких проводять інкубацію ізольованих смужок ГМ, містять для попередження холінергічних впливів блокатор Мхолінорецепторів атропін (1·10-6М) (контроль 1). Для блокування синаптичного гальмування в середовище інкубації (розчин Кребса) вносять блокатори кальцій-залежних калієвих каналів малої та великої провідності, відповідно апамін (5·10-7М) та тетраетиламоній (2·10-3М). Інкубацію м'язових смужок в такому розчині Кребса проводять на протязі 30 хвилин. В результаті інкубації смужок гладенько-м'язових клітин у вказаному розчині у відповідь на інтрамуральне подразнення м'язовий препарат генерує замість ГСП тільки залишкову гіперполяризацію (2). Через зазначений час в середовище інкубації вносять нейролептик галоперидол (1·10-5М). Додавання цього фармакологічного агенту призводить до блокування залишкової гіперполяризації при його присутності не менше 10 хвилин (3, 4). Галоперидол (1·10-5М) усуває залишкову гіперполяризацію гладенько-м'язових клітин, що виникає у відповідь на інтрамуральне подразнення м'язових смужок в умовах присутності в інкубаційному середовищі апаміну та тетраетиламонію. Таким чином, запропонований спосіб дозволяє найбільш ефективно блокувати синаптичне гальмування в гладеньких м'язах кишечнику в умовах експерименту, що дозволить більш досконало вивчати нехолінергічне збудження та розробляти раціональні методи корекції порушень моторики кишечнику. Література: 1. Tack. J. Receptors of the enteric nervous 5 29532 system: potential targets for drug therapy // Gut. 2000 - 47 (Suppl. IV). - P.i v20-iv22. 2. R.K. Goyal, "Targets of enteric motor neurons: smooth muscle cells". Gut. 2000 - 47 (Suppl. IV). P.iv38-iv39. 3. Шуба М.Ф., Владимирова І.А., Єрмакова Т.О., Юркевич Н., Юркевич А. Ме ханізми неадренергічної синаптичної передачі в гладеньком'язових клітинах шлунково-кишкового тракту // Нейрофизиология / Neurophysiology. 1998. - 30, №4/5. - С.265-270. 4. И.А. Владимирова, В.П. Загороднюк, И.В. Островский, З.А. Сорокина, И.В. Чижмаков, М.Ф. Шуба, "Специфика изменений синаптических процессов различной медиаторной природы в гладких мышцах под влиянием ультразвука". Нейрофизиология / Neurophysiology, 1, №4, 297302 (1993). 5. Xue L., Farruia G., Sarr M.G., Szurszewski J.H. ATP is a mediator of the fast inhibitory junction potential in human jejunal circular smooth muscle // Am. J. Physiol. 276 (Gastrointest. Liver Physiol. 38): G1373-G1379, 1999. 6. M.F. Shuba, I.A. Vladimirova, I.B. Philipov, "Mechanisms of the inhibitory action of neurotransmitters on smooth muscles", Нейрофизиология / Neurophysiology, 35, №3/4, 252-261 (2003). 6