Спосіб активації проростання спор вищого базидіального гриба hericium erinaceus

Спосіб активації проростання спор вищого базидіального гриба Hericium erinaceus оснований на впливі лазерного випромінювання на базидіоспори, який відрізняє ться тим, що обробку ведуть в червоній частині спектра в дозах від 45 до 230 мДж/см 2. (19) (21) 99105730 (22) 20.10.1999 (24) 16.04.2001 (33) UA (46) 16.04.2001, Бюл. № 3, 2001 р. (72) Поєдинок Наталія Леонідівна, Бухало Ася Сергіївна, Потьомкіна Жанна В'ячеславівна 36013 mycelia nf vynosi hlivy ustricne, Pest. Zamh., 1975, 13, № 1, р. 85-86.) Недоліком цього способу маємо вважати наступне. УФ-випромінювання є одним із видів електромагнітних випромінювань по довжині хвилі, що розташоване між видимим світлом і рентгенівськими променями. Збудження атомів в макромолекулах при УФ-випромінюванні робить їх високореакційноздатними і викликає різноманітні фотохімічні реакції. Найважливішою з них є димеризація пиримідінів. Це супроводжується розірванням водневих зв'язків між ланками ДНК навпроти димера та локальною денатурацією дволанкової молекули ДНК, що приводить до зміни її конфігурації. Іонізація атомів, що входять до складу макромолекули ДНК, під впливом у променів дає поштовх до проходження різноманітних радіаційно-хімічних реакцій, що ведуть до змін їх макромолекул. Як наслідок цих процесів - виникнення небажаних мутацій і зникнення корисних ознак та поява небажаних (див.: За харов І.А., Ковальцова С.В., Кожина Т.Н. і ін. Мутаційний процес у грибів. - Наука, 1980). Відомі способи стимулювання зростання дріж джів і Е. coli шляхом впливу низькоінтенсивного лазерного випромінювання у видимій ділянці спектру (He-Ne лазер 632,8 нм). Величина ефекту стимуляції залежить також і від інтенсивності світла даної довжини хвилі (див.: Кару Т.І. Про молекулярний механізм терапевтичної дії випромінювання низькоінтенсивного лазерного світла: Доп. Акад. Наук. - 1986. - Т. 291. - № 5. - С. 1245-49). Однак до теперішнього часу не вивчена дія випромінювання низькоінтенсивного лазерного світла на зростання і розвиток базидіомицетів. В основу винаходу способу стимуляції проростання базидіоспор при отриманні чистих міцеліальних моноспорових культур із спорового порошку Hericium erinaceus поставлена задача активації проростання спор впливом лазерного випромінювання (He-Ne лазер) в червоній частині спектру в дозах від 45 до 230 мДж/см 2, в результаті чого забезпечується збільшення кількості пророслих спор у 10-106 разів у різних штамів, скорочуються терміни проростання, збільшується швидкість зростання моноспорових культур, що значно спрощує їх виділення в чисту культур у і подальшу селекційну роботу з ними. Поставлена задача вирішується шляхом впливу лазерного випромінювання на споровий порошок штамів He-2, He-6 і He-13, які поміщені в стерильні, без кришок чашки Петрі, в дозах 45, 230 і 650 мДж/см 2. Шляхом серії розведень готували водні спорові суспензії однакової концентрації для всіх штамів і висівали їх на сусло-агар рівномірно розподіляючи шпателем по всій поверхні середовища. Інкубували в темряві при температурі 26°С. Кількість пророслих спор визначали мікроскопіюванням. Окремо пророслі спори, що лежать разом з кусочком агару, ізолювали на пробірки з суслоагаром. Вирослі міцеліальні культури аналізували на наявність пряжок і каріотичність міцелію. Забарвлення ядер проводилося за методикою Гимза (див.: Дудка І.А., Вассер С.П., Элланская І.А. и др. Методы экспериментальной микологии. – К.: Наук. думка, 1982. – 550 с.) У монокаріотичних культур вивчалася динаміка зростання. Як контрольні, брали моноспорові культури, отримані аналогічним способом із спор, що не були піддані впливу лазерного випромінювання. На фігурі показана динаміка росту моноспорових к ультур Hericium erinaceus. Суть винаходу пояснюється прикладами. Приклади застосування лазерного випромінювання для поліпшення проростання спор Лазерним випромінюванням в дозах 45, 230, 650 мДж/см 2 впливали на споровий порошок штамів іїе-2, Не-6 і He-13, як сказано вище. Відсоток проростання спор визначали як відношення пророслих спор до загального числа посіяних спор. Мікроскопіювання і підрахунок пророслих спор здійснювали кожні 24 години. Подані в табл. 1 результати показують, що лазерне випромінювання в дозах від 45 до 230 мДж/см 2 здатне активізувати процес проростання базидіоспор в 10 раз у штама He-13, в 100 раз у Не-6 і в 10 у Не-2, причому лазерна обробка тим ефективніша, чим нижчі вхідний відсоток проростання спор. Приклади застосування лазерного випромінювання для скорочення термінів проростання базидіоспор Дослідження проводили вищезазначеним способом. Проростання спор контролювали кожні 12 годин. Отримані результати (табл. 2) дозволяють стверджувати, що лазерне випромінювання скорочує терміни проростання спор з 7 до 3-х діб. Приклади виділення чистих моноспорових культур і застосування лазерного випромінювання для стимуляції їхнього зростання. Обробку базидіоспор лазерним випромінюванням проводили вищезазначеним в прикладі 1 способом. Готували водну суспензію спор із розрахунку 100 спор на 1 мл і розподіляли її рівномірно на поверхні агаризованного середовища в чашках Петрі (100 спор на чашку). Інкубували в темряві при 26°С 14 діб. Пророслі спори ізолювали на окремі пробірки із сусло-агаром. У вирослих міцеліальних культур контролювали каріотичність міцелію вищезазначеними способами. Динаміку зростання моноспорових ізолятів вивчали на суслоагарі. В центр чашки Петрі із середовищем поміщали диск агаризованого середовища (діаметр 3 мм) з міцелієм культури, що досліджується. Діаметр вирослих колоній-вимірювали кожні 2 доби. Як можна побачити з наведених на фігурі даних, лазерне випромінювання стимулювало зростання моноспорових культур майже в 3 рази. Наведені в прикладах показники застосування лазерного випромінювання для активації базидіоспор Hericium erinaceus при виділенні моноспоровых ізолятів, показують, що лазерне випромінювання в червоному спектрі в .дозах 45-230 мДж/см 2 скорочує терміни проростання спор базидіоспор, значно збільшує відсоток їх проростання і стимулює зростання моноспорових культур. 2 36013 Таблиця 1 Вплив лазерного випромінювання (червоний спектр) на проростання базидіоспор Hericium erinaceus % проростання базидіоспор Штам Не2 Не6 Не13 Через 72 години Без опромінення 0 0 9,6 45 мДж/см 2 1,6 1,3×10 13 -6 Через 96 години 230 мДж/см 2 8,6 6,6×10 36 -6 650 мДж/см 2 0 0 0 Без опромінення 0,9×10-6 0,6×10-4 13,6 45 мДж/см 1 2,75 230 мДж/см 2 11,42 1,0×10-3 82 0,8×10-2 98 650 мДж/см 2 0 0 0 Таблиця 2 Влив лазерного випромінювання на терміни проростання базидіоспор Hericium erinaceus Доба Доза поромінення, мДж/см 2 3 5 Контроль 0 45 230 650 0 1,6 8,3 0 0 2,8 13,0 0 7 9 відсотки 1,4×10-6 4,5 13,3 0 3,6×10-6 4,8 13,3 0 12 14 4,0×10-6 Поява повітряного міцелію (доба) 4,0×10-6 7 7 0 0 Фіг. __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3 10