Морфоліній 2-(5-(4-піридил)-4-(2-метоксифеніл)-1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетат, що проявляє антиоксидантну і детоксикуючу активності

Морфоліній 2-(5-(4-піридил)-4-(2метоксифеніл)-1,2,4-триазол-3-ілтіо)ацетат формули: O N N + H Корисна модель стосується фармацевтичної хімії і медицини, та може бути використана у створенні нових біологічно активних сполук, а також оригінальних лікарських засобів у ряді похідних 1,2,4-тріазолу і застосованим для фармакокорекції станів, що викликані наявністю вільних радикалів які приводять до росту пухлин, таких хвороб цивілізації, як ішемічна хвороба серця, цукровий діабет, ожиріння. А також для зниження процесів ендогенної інтоксикації на фоні травматичних ушкоджень. Найактивнішими антиоксидантами є вітаміни А, С, Е, селен, рутин, кверцетин. Але застосування вітамінів може призвести до їх кумуляції в тканинах організму (вітаміни А і Е), що викликає діарею. Слід зазначити, що для отримання вираженого фармакологічного антиоксидантного ефекту необхідне довготривале застосування вищевказаних засобів в кількостях, що перевищують середні терапевтичні дози, що приводить до гіпервітамінозу, а також викликає алергічні реакції. Для зниження інтоксикацій в лікарській практиці застосовують препарати на основі декстрану (поліглюкін, реополіглюкін), полівінілпіролідону (гемодез, ентеродез), желатину (желатиноль), а також сольові розчини (розчин натрій хлориду ізо тонічний, розчин Рінгера), недоліком яких є те, що дані лікарські засоби можуть викликати алергічні реакції і їх необхідно вводити капельно. Найбільш близьким структурним аналогом речовини, що заявляється, є морфоліній 3,4дифеніл-1,2,4-тріазоліл-3-тіоацетат, що виявляє антиоксидантну і жовчогінну активності [А.с. СССР №4037726 от 18.03.86р., М.Кл.4 C07D249/14, А61К31/41]. Але дана речовина набагато токсичніша і менш технологічна в отриманні. Прототипом для речовини, що заявляється, є морфоліній 3-метил-1,2,4-триазоліл-5-тіоацетат, що виявляє гепатопротекторну, ранозагоючу і противірусн у активність [п. України №1988 від 22.12.86р., опубл.20.12.94р., М.Кл.4 C07D413/12, А61К31/41, А61К31/535]. Торгове найменування морфолінію 3-метил-1,2,4-триазоліл-5-тіоацетатутіотриазолін. Для даного препарату встановлено також антиоксидантні властивості [Книш Е.Г. Синтез, физико-химические и биологические свойства N- и S- замещенных 1,2,4-триазола: Автореф. дис. ... д-ра. фарм. наук - Харьков, 1988. - 46с.] і досліджено детоксикаційні властивості [Болгов Д.М. Лікувально-профілактична ефективність тіотріазоліну при синдромі тривалого роздавлювання: Автореф. дис. ... канд. мед. наук - Київ, 2003. - 20с.] N N S 2 C C OCH3 O H2N O (19) UA (11) 37927 (13) U , що проявляє антиоксидантну і детоксикуючу активності. 3 37927 4 Тіотріазолін хоча і має антиоксидантні і детокровують і висушують на повітрі. Вихід складає сикуючі властивості, однак їх величина недостат347,5г (81% в розрахунку на 2-(5-(4-піридил)-4-(2ньо висока. Крім того, збільшення дози тіотриазометоксифеніл)-1,2,4-тріазол-3-ілтіо)ацетатну кисліну приводить до зниження детоксикуючої лоту). Жовта кристалічна речовина з Тпл. 118активності. 120°С (із суміші етанол : ацетон 1:2) розчинна у Суттєві ознаки прототипу і корисної моделі, що воді, мало розчинна в органічних розчинниках. збігаються є такі: Знайдено, % С 55,87, Н 5,41, N 16,29, S 7,51. - наявність в структурі 1,2,4-тріазолового фраC20H23N5 O4S 1. гменту; Вирахувано, % С 55,93, Н 5,40, N 16,31, S 7,47. - молекули даних речовин містять двовалентВ ІЧ-спектрах сполуки, що заявляється наявні ний атом сірки, а також карбоксильну груп у, що смуги поглинання -C=N-груп при 1600см -1, C-Sзв'язана іонним зв'язком з молекулою морфоліну. групи при 700см-1, -С-О-С-групи при 1250см -1, Прототип у порівнянні з корисною моделлю О=С-групи при 1690см -1, а також наявна смуга менш активно пригнічує процеси вільнорадикальпоглинання, характерна для солей карбонових ного окиснення, а також у меншому обсязі зменкислот, що містять СОO- груп у при 1410см -1. шує рівень молекул середньої маси у сироватці Дослідження на гостру токсичність проводили крові, що впливає на зниження процесів ендогенпо експрес-методу В.Б. Прозоровського на білих ної інтоксикації, таким чином прототип відповідно щурах лінії Вістар. Використовувались 5 груп твамає більш низькі показники антиоксидантної і дерин по 2 спостереження в кожній з додатковим токсикуючої активностей. використанням однієї попередньої та наступної В основу корисної моделі поставлено задачу дози. Досліджувану сполуку розчиняли в 1,5мл створення нової біологічно активної сполуки, що дистильованої води і вводили, з додержанням може знайти своє застосування як оригінальний правил асептики та антисептики, за допомогою лікарський засіб у ряду 1,2,4-тріазолу і у комплексі шприца внутрішньочеревно. Спостереження пропроявляє антиоксидантну і детоксикуючу активноводили через 24, 48, 72 та 96 годин. Виявлено, що сті. LD50 морфоліній 2-(5-(4-піридил)-4-(2Поставлена задача вирішується тим, що морметоксифеніл)-1,2,4-тріазол-3-ілтіо)ацетату дорівфоліній 2-(5-(4-піридил)-4-(2-метоксифеніл)-1,2,4нює 2780 (2730-2920)мг/кг. тріазол-3-ілтіо)ацетат містить при N4-aтомi ядра Дослідження антиоксидантної активності спо1,2,4-тріазолу 2-метоксифенільний замісник, в полуки, що заявляється проводили in vitro методом ложенні 5 ядра 1,2,4-тріазолу 4-піридиновий радинеферментативного ініціювання вільнорадикалькал, а також має в своєму складі двовалентний ного окислення, яку оцінювали за концентрацією атом сірки, карбоксильну гр упу, з'єднану іонним ТБК-реактантів (ТБК - тіобарбітурова кислота). зв'язком з молекулою морфоліну і має формулу: Реактиви та їх приготування: а). суспензія яєчних ліпопротеїдів – до 1 яєчO N N + H2 ного жовтка додають 1л фосфатного буферного S C C - H2N O N розчину с рН 7,4 (визначають за допомогою рНN метру); O б). 20% розчин трихлоретанової кислоти - 20г OCH3 трихлоретанової кислоти розчиняють в 80г води очищеної; в). 0,8% розчин тіобарбітурової кислоти 800мг тіобарбітурової кислоти поміщають в мірну Така структура сполуки забезпечує: доступколбу на 100мл і доводять до мітки водою очищеність реактивів для синтезу, нескладну методику ною. отримання, низьку гостр у токсичність, здатність г). 10% розчин ферум (ІІ) сульфату - 10г фепригнічувати процес вільнорадикального окисненрум (II) суль фату розчиняють в 90мл води очищеня, а також забезпечує здатність зменшувати ріної. вень молекул середньої маси у сироватці крові, Хід проведення експерименту. що призводить до зниження ендогенної інтоксикаДо 4мл суспензії яєчних ліпопротеїдів додають ції. 0,5мл водного розчину морфолінію 2-(5-(4Сполуку, що заявляється, отримують шля хом піридил)-4-(2-метоксифеніл)-1,2,4-тріазол-3взаємодії 2-(5-(4-піридил)-4-(2-метоксифеніл)ілтіо)ацетату в концентрації 1·10-3моль/л, 1мл 10% 1,2,4-тріазлол-3-ілтіоацетатної кислоти з морфолірозчину ферум (II) сульфату. С уміш перемішують і ном в спиртовому середовищі при температурі витримують 1 годину при 37°С в термостаті. До 78°С. 1мл суміші додають 1мл 20% розчину трихлоретаПриклад нової кислоти і обертають в центрифузі 15хв при В трилітрову колбу, обладнану змішувачем, 3000об/хв. Надосадну рідину змішують з 1мл 0,8% холодильником, термометром завантажують 342г розчину тіобарбітурової кислоти і поміщають на 1 (1М) 2-(5-(4-піридил)-4-(2-метоксифеніл)-1,2,4годину в парову баню, після чого додають 4мл тріазол-3-тіо)ацетатної кислоти, 1500мл 96% етабутанолу-1 і обертають в центрифузі 15хв при нолу. Суміш при постійному перемішуванні нагрі3000об/хв. Відбирають 2мл верхнього бутанольновають до кипіння протягом 5 хвилин, додають го шару і вимірюють його оптичну густин у при до87,1г морфоліну, нагрівають 30 хвилин (до повного вжині хвилі 532нм. розчинення), охолоджують, випаровують на % Контрольну пробу готували аналогічно, але об'єму, охолоджують до 25°С, додають 200мл без додавання досліджуваних сполук. В якості ацетону і залишають на 24 години. Осад відфільт 5 37927 6 препаратів порівняння використовували аскорбіде АОА- антиоксидантна активність, % нову кислоту і тіотріазолін 1% розчин для ін'єкцій Еконтроль - оптична густина контрольного розчивиробництва ВАТ «Галичфарм», що вводили в ну; аналогічних дозах. Едослід - оптична густина розчину, що містив Антиоксидантну активність розраховували за досліджувану сполуку (аскорбінову кислоту чи тіоформулою: тріазолін). Результати антиоксидантної активності навеEконтроль - Едослід AOA = × 100% дені в табл.1. Eконтроль , Таблиця 1 №з/п 1 2 3 4 Речовина Контроль Морфоліній 2-(5-(4-піридил)-4-(2-метоксифеніл)-1,2,4-тріазол-З-ілтіо)ацетат Аскорбінова кислота (вітамін С) Тіотриазолін Детоксикуючу активність сполуки, що заявляється вивчали на експериментальній моделі ендотоксикозу. Експериментальною моделлю ендотоксикозу посттравматичного ґенезу слугував патологічний процес, який розвивався у тварин у результаті розчалювання м'яких тканин задніх кінцівок протягом 5 годин у спеціальному приладі з манометричним контролем тиску (15кг/см 2). Сполуку, що заявляється вводили групі з 8ми безпородних щурів обох статей масою 190210г в дозі 200мг/кг (0,07 від LD50) у вигляді 2%-го водного розчину внутрішньоочеревинно через 4г, 30хв після початку компресії. Контрольній групі тварин вводили еквівалентний об'єм фізіологічного розчину натрій хлориду через аналогічний проміжок часу. Як препарат порівняння, використано тіотріазолін 1% розчин для ін'єкцій виробництва ВАТ «Галичфарм», що вводили в раніш встановленій оптимальній дозі 150мг/кг через 4г, 30хв після початку компресії. Кількісними критеріями детоксикаційної ефективності сполуки, що заявляється в умовах ендотоксикозу на фоні синдрому тривалого розчавлювання слугував рівень молекул середньої маси Е АОА, % 0,11 0,028 74,5 0,033 70,0 0,030 72,7 (МС М) у сироватці крові щурів – загальновідомий універсальний маркер ендогенної інтоксикації. Рівень МСМ визначали через 5 годин після компресії (раніше встановлений пік концентрації МСМ у контрольних тварин). Для цього використовували сироватку крові піддослідних тварин, 1мл якої змішували з 0,5мл 15% водного розчину трихлорацетатної кислоти. Отриману суміш центрифугували 30хв при 3000об/хв. До 0,5мл центрифугату додавали 4,5мл води очищеної і вимірювали оптичну густину при 254нм. Результати наведено в табл. 2. Для оцінки детоксикуючої активності вираховували показник зменшення рівня МСМ порівняно з контролем. Розрахунки проводили за формулою: Eконтроль - Едослід AOA = × 100% Eконтроль де МС М - рівень МС М порівняно з контролем. Еконтроль - оптична густина контрольного розчину; Едослід - оптична густина розчину, що містив сполуку, що заявляється або тіотріазолін. Таблиця 2 № Сполука з/п 1 Контроль 2 Інтактні 3 Тіотріазолін 4 Морфоліній 2-(5-(4-піридил)-4-(2-метоксифеніл)1,2,4-тріазол-3-ілтіо)ацетат Комп’ютерна в ерстка В. Мацело Оптична гус- Зменшення рівня МСМ порівняно тина з онтролем, % 0,235±0,09 0,108±0,06 54,04 0,159±0,08 33,34 0,151±0,07 Підписне 35,74 Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601