Спосіб одержання препарату трипсин-подібних протеолітичних ферментів для внутрішньосудинного введення

Спосіб одержання препарату трипсин-подібних протеолітичних ферментів для внутрішньосудинного введення, що включає послідовну екстра 38270 рахунок попередньої часткової протеолітичної деградації [9-11]. Отримуваний у запропонований спосіб препарат за умов внутрішньосудинного введення не виявляє помітної імунної реакції та надмірної активації білків крові, чим усуваються побічні негативні ефекти та зумовлюється можливість застосування препарату як внутрішньосудинного лікарського засобу. Мала імуногенність отримуваного у запропонований спосіб препарату дозволяє проводити їх клінічне застосування в широкому діапазоні умов щодо концентрацій, доз, часу введення, тощо. В порівнянні зі способом-аналогом запропонований підхід дозволяє досягти необхідного терапевтичного ефекту, завдяки значно меншим кількостям ферментного препарату, чим запобігаються можливі побічні ефекти та істотно зменшується вартість лікарського курсу. Тим самим розроблено спосіб одержання придатного до внутрішньосудинного введення малоімуногенного, малотоксичного та недорогого препарату протеолітичних ферментів трипсинового ряду, що може бути використаний для підвищення ефективності терапії обумовлених дисбалансом тканинного та судинного протеолізу патологічних процесів. Спосіб одержання препарату та дослідження його дії визначається відповідно до наведених прикладів. Приклад 1. Одержання частково деградованої форми трипсину. Одержання полягає в попередній інкубації розчину серинових та тіолових протеолітичних ферментів з групи трипсин, хімотрипсин, папаїн та бромелаїн за рН 6,7±2,3 при 37°С протягом 30-180 хвилин з подальшою ліофільною сушкою отриманого препарату. Отриманий препарат являє собою білий аморфний порошок, придатний до тривалого зберігання за температури 0-5°С протягом шести місяців. Приклад 2. Дослідження токсичності отриманого препарату. Оцінку гострої токсичності отриманого у захищений спосіб препарату трипсин-подібних серинових протеїназ проводили згідно до ГОСТ 12.1.00776 [12]. Розрахунок значень токсичності проводили з використанням методу Лігфільда-Уілкінсона [13]. В дослідах на мишах ЛД50 становила 277 мг/кг, на кролях - 47 мг/кг в порівнянні до 11 мг/кг та 2.8 мг/кг для отриманого у спосіб-прототип недеградованого β-трипсину [14]. За умов разового введення дози, що дорівнює 10 відсоткам віл ЛД50, будь-яких побічних негативних ефектів не спостерігали. Наведені результати свідчать про малу токсичність отримуваного у запропонований спосіб препарату та його придатність до внутрішньосудинного введення. Одержаний у запропонований спосіб препарат має низьку імуногенність, що дозволяє досягти пролонгованої дії препарату, дає змогу обмежити кількість введень та зумовлює збереження ефективності дії препарату протягом всього курсу. Таким чином, запропонований винахід дає змогу одержати ефективний терапевтичний засіб для лікування та профілактика захворювань, пов'язаних з дисбалансом в регуляції активності протеолітичних ферментів. Запропонований спосіб дає змогу різко знизити імуногенність та токсичність кінцевого препарату. На відміну від способу-аналогу завдяки можливості внутрішньосудинного введення отримуваний у запропонований спосіб препарат дозволяє отримувати бажаного терапевтичного ефекту за допомогою істотно менших кількостей препарату, що веде до зниження вартості курсу. Застосування частково деградованих форм протеолітичних ферментів знижує ймовірність побічних ефектів, збільшує час перебування препарату в кровоносному руслі та дає змогу різко зменшити разові та курсову дози препарату. Посилання: 1. Reiser Н., Roettig L., Curtis G. Tryptic debridement of necrotic tissue // Arch. Surg. - 1951. - 63. - P. 568. 2. Корхов С.И., Рубецкая В.П. Энзимотерапия при ожоговой болезни / в кн.: Проблемы медицинской энзимологии. – Москва: Медицина, 1970. - С. 312315. 3. Innerfield I., Angrist A., Sohwartz A. Parenteral administration of trypsin. Clinical effect in 538 patients // JAMA. - 1953. - 152. - P. 597. 4. Протеиназы и их активаторы как тромболитические средства / в кн.: К.Н.Веремеенко, О.П.Голобородько и А.И.Кизим. Протеолиз в норме и при патологии. – Киев: Здоровье, 1988. - С. 152-163. 5. Фармакологические свойства протеиназ / в кн.: К.Н.Веремеенко. Ферменты протеолиза и их ингибиторы в медицинской практике. – Киев: Здоровье, 1971. - С. 25-28. 6. Теоретические основы системной энзимотерапии / в кн.: Системная энзимотерапия. Теоретические основы, опыт клинического применения, под ред. К.Н.Веремеенко, К.Н.Коваленко. – Киев: Морион, 2000. - С. 7-115. 7. Опыт клинического применения системной энзимотерапии / там же, - С. 116-290. 8. НортропД., Кунитц М., Херриот Р. Кристаллические ферменты. - М., 1950. - 346 с. 9. Maroux S., Desnuelle P. On Some Autolyzed Derivatives of Bovine Trypsin // Biochim.Biophys. Acta. - 1969. - 181, № 1. - P. 59-72. 10. Schroeder D., Shaw E. Chromatography of Trypsin and its Deriva-tives // J.Biol.Chem. - 1968. 243, N 11. - P. 2943-2949. 11. Smith R. L., Shaw E. Pseudotrypsin // J. Biol. Chem. - 1988. - 244, № 17. - P. 4704-4712. 12. ГОСТ 12.1.007-76. Вредные вещества, классификация и общие требования безопасности. – М, 1990. - С. 5. 13. Беленький М. Д. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. - Л.: Медицина, 1963. - 152 с. 14. Hendley С., Robbims К., Dertinger В., Clements G., Ercoli N. // Arch. int. Pharmacodyn. - 1956. - 106. - P. 164. 2 38270 __________________________________________________________ ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Україна, 01133, Київ-133, бульв. Лесі Українки, 26 (044) 295-81-42, 295-61-97 __________________________________________________________ Підписано до друку ________ 2001 р. Формат 60х84 1/8. Обсяг ______ обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам._______ ____________________________________________________________ УкрІНТЕІ, 03680, Київ-39 МСП, вул. Горького, 180. (044) 268-25-22 ___________________________________________________________ 3