Комбіноване середовище “к і т” для накопичення мікобактерій туберкульозу m.avium та атипових мікобактерій

Комбіноване середовище для накопичення мікобактерій туберкульозу M.avium та атипових мікобактерій, що містить цитратну кров, яке відрізняється тим, що додатково містить індикатор бромтимоловий синій, 10% розчин Твіну-80, воду дистильовану при наступному співвідношенні компонентів, г/л: цитратна кров 11,0-12,0 індикатор бромтимоловий синій 0,8-1,5 10% розчин Твіну-80 0,03-0,07 вода дистильована решта. (19) (21) u200902697 (22) 24.03.2009 (24) 12.10.2009 (46) 12.10.2009, Бюл.№ 19, 2009 р. (72) СЕЛІЩЕВА НАДІЯ ВАСИЛІВНА, АНДРІЄНКО ЮЛІЯ ВАЛЕРІЇВНА, БОГАЧ МИКОЛА ВОЛОДИМИРОВИЧ, СТЕГНІЙ БОРИС ТИМОФІЙОВИЧ (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ НАУКОВИЙ ЦЕНТР "ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ І КЛІНІЧНОЇ ВЕТЕРИНАРНОЇ МЕДИЦИНИ" 3 щоб забезпечити ефективність способу. Запропоноване комбіноване живильне середовище "КІТ" містить розчин неіоногенної поверхнево-активної речовини Твін - 80, який покращує ріст та розвиток мікобактерій. Середовище містить кров - своєрідну специфічну рідину тваринного організму, яка володіє потужною системою буферів, що пом'якшують різкі коливання кислотності, та є хорошим субстратом для накопичення бактерій. Індикатор бромтимоловий синій подавляє ріст банальної мікрофлори і відповідає інтервалу рН, при якому ростуть мікобактерії. Порівняльний аналіз із прототипом дозволяє зробити висновок, що рішення, яке заявляється відповідає критерію "новизна." Готують середовище таким чином: Цитратну кров розводять дистильованою водою, добавляють поверхнево-активну речовину 0,05% Твін-80 та індикатор бромтимоловий синій у концентрації 0,02%. Після чого розливають у пробірки, стерилізують в автоклаві за температури 110°С протягом 15-20 хвилин. Взяті у шприці зразки крові від реагуючої на туберкулін великої рога3 тої худоби (з вмістом 2см 10% розчину цитрату натрію) засівають на стерильне середовище "КІТ" по 2,5см3 (4 пробірки), старанно змішують і ставлять в термостат за температурного режиму 37,5°С. Після інкубації через 18-30 діб пробірки з посівами центрифугують при 2000 об/хв. протягом 30 хвилин, зливають надосадову рідину, а осад засівають на щільне яєчне середовище Гельберга чи Левенштейна. Приклад 1 Було проведено ряд дослідів і підібрано рНіндикатор, який подавляє ріст банальної мікрофлори і відповідає інтервалу рН, при якому ростуть мікобактерії (Табл. 1). 44476 4 В таблиці наведені результати росту мікобактерій на різних живильних середовищах. Слід відзначити, що всі культури мікобактерій виділені на середовищі "КІТ" давали пишний ріст (понад 50 колоній) у вигляді окремих колоній по всій поверхні середовища Гельберга, а культура мікобактерій 21/08 дала мізерний ріст на живильному середовищі Гельберга після інкубації в м'ясопептонному гліцериновому бульйоні, фізіологічному розчині хлористого натрію, м'ясопептонному гліцериновому бульйоні з бромтимоловим індикатором і на дистильованій воді у вигляді 3-4 окремих гладеньких світло-оранжевого кольору колоній. Культура мікобактерій 32/08 дала незначний ріст на середовищі Гельберга після інкубації в м'ясопептонному гліцериновому бульйоні та фізіологічному розчині хлористого натрію у вигляді сірувато-білих до 10 окремих гладеньких вологих колоній. Якщо після інкубації на середовищі "КІТ" виділили 10 культур мікобактерій, то на кров'яному середовищі виділили лише 7 культур мікобактерій, при цьому відмічався мізерний ріст (3-8 колоній) і появлявся він значно пізніше ( 7 діб) ніж на середовищі "КІТ". Приклад 2 Ріст гемокультур мікобактерій досліджували на середовищі "КІТ" при різних концентраціях стимулятора росту - Твін-80. Найбільш оптимальною концентрацією препарату Твін - 80 для виділення гемокультур мікобактерій в середовищі "КІТ" виявилась концентрація -10% (Табл. 2). Отже, комбіноване середовище "КІТ" являється найбільш елективним в порівнянні з іншими середовищами та може використовуватись в біологічній промисловості для вирощування і накопичення бактерійної маси мікобактерій. Таблиця 1 Комбіноване середовище "KIT" для накопичення мікобактерій туберкульозу М.avium та атипових мікобактерій № п/п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Живильні середовища №№ польоКартопеМПГБ (мясоМПГБ з інГліцериноСеред вих штамів льноСольовий ФізіолоКров’яне пептонний дикатором вий картоогемокультур розчин гічний середовисольове гліцериновий бром тимопель ний вище мікобактерій середогліцерину розчин ще бульон) ловим синім відвар КІТ вище 8/07 ± з х х з ± + 9/07 ± з х з ± + 15/07 ± ± х х х ± + 22/07 x х ± х х ± + 36/07 x х ± ± х х ± + 63/07 ± ± + 13/08 ± ± + 21/08 ± ± ± ± + 32/08 ± ± ± + 38/08 ± ± + Примітки: "+" - пишний ріст мікобактерій "±" - скудний ріст мікобактерій "-" - відсутній ріст мікобактерій "х" - дослідження не проводилися "з" - ріст банальної мікрофлори 5 44476 6 Таблиця 2 Номер штаму гемокультур мікобактерій 8/07 9/07 15/07 Комп’ютерна верстка А. Рябко 5% 2 4 5 Ріст колоній мікобактерій 8% 4 6 9 Підписне 10% >30 >50 >50 Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601