Динатрієва сіль n-сукциноїл-s-(6-етокси-2-метилхінолін-4-іл)-l-цистеїну, що має гепатопротективну активність

Динатрієва сіль N-сукциноїл-S-(6-етокси-2метилхінолін-4-іл)-L-цистеїну формули: O Корисна модель відноситься до галузі синтезу біологічно активних хімічних речовин, а саме, до синтезу 6-функціонально заміщених N-ацил-S-(2метилхінолін-4-іл)-L-цистеїнів. Відомий структурний аналог заявленого рішення - L-ацетилцистеїн, що проявляє детоксикаційну активність [Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2-х томах. - М.: Медицина, 1988. - Т. 2П-е узд. стер. - 576 с]. Спільною з заявленим рішенням ознакою є наявність залишку L-ацетилцистеїну (3-меркапто-2 ацетиламінопропанової кислоти). Причиною, що перешкоджає підвищенню гепатопротективної активності, є наявність атому водню в меркаптогрупі L-ацетилцистеїну та гідрофільність сполуки. Запропонована сполука відрізняється від структурного аналога наявністю 4-хінольного радикалу та заміною гідрогену в ацетильному залишку на залишок ацетатної кислоти. Це призводить до підвищення гепатопротективної дії сполуки. Найближчим аналогом рішення, що заявляється, є натрієва сіль b-(6-етокси-2-метилхінолін-4ілтіо)-a-оксипропіонової кислоти, що проявляє антиоксидантну та гепатопротекторну активність [Пат. № 71883 А, Україна, МПК7С07 Д215/02. Натрієва сіль b-(6-етокси-2-метилхінолін-4-ілтіо)-aоксипропіонової кислоти, що має антиоксидантну та гепатопротекторну активність / Омельянчик Л.О., Бражко О.А., Бєлєнічев І.Ф., Завгородній М. П.; заявник та патентовласник ЗДУ. - № 20031213394; заявл. 31.12.2003; надр. 15.12.2004, Бюл. № 12]. Спільними ознаками з рішенням, що заявляється, є: наявність хінолільного радикалу та залишку 3-меркапто-2-амінопропанової кислоти (Lцистеїну). Причиною, що перешкоджає підвищенню гепатопротективної активності, є наявність гідроксигрупи в a-положенні. В основу корисної моделі поставлено задачу синтезувати динатрієву сіль N-сукциноїл-S-(6етокси-2-метилхінолін-4-іл)-L-цистеїну, що має виражену гепатопротективну активність шляхом поєднання 4-хінольного радикалу із залишком 3меркапто-2-амінопропанової кислоти та блокування аміногрупи в α-положенні залишком бурштинової кислоти, що дозволяє значно підвищити гепатопротективну активність сполуки та розширити арсенал біологічно активних речовин. Суттєвими ознаками рішення, що заявляється, є наявність: - 4-хінольного радикалу; - залишку 3-меркапто-2-амінопропанової кислоти; - натрієвої солі сукциноїламіду в a-положенні. Відмінною від найближчого аналогу ознакою є наявність натрієвої солі сукциноїламіду в aположенні. Це призводить до підвищення гепатопротективної властивості сполуки. На Фіг.1 зображено структурну формулу динатрієвої солі N-сукциноїл-S-(6-етокси-2 S C2H5 ONa O HN O N ONa O , (19) UA (11) 44791 (13) U що має гепатопротективну активність. 3 метилхінолін-4-іл)-L-цистеїну, що має виражену гепатопротективну активність. Процес одержання сполуки складається з: - приготування розчину 6-етокси-4-хлор-2метилхіноліну в діоксані; - приготування водного розчину L-цистеїну в присутності соляної кислоти; - одержання реакційної суміші і подальше її нагрівання; - охолодження реакційної суміші і збирання осаду; - промивання осаду ацетоном, сушки, кристалізації з метанолу; приготування розчину 6-етокси-S-(2метилхінолін-4-іл)-цистеїну в 5% розчині NaOH, значення рН 8,5; - приготування розчину бурштинового ангідриду в ацетоні; - додавання по краплях розчину бурштинового ангідриду при підтриманні рН середовища 8,0; - одержання реакційної суміші, фільтрування осаду, промивання його водою, сушки та кристалізації з метанолу; - приготування розчину N-сукциноїл-S-(6етокси-2-метилхінолін-4-іл)-L-цистеїну в суміші метанол:вода (10:1); - додавання водного розчину NaOH з 5% надлишком; - випаровування розчинника; - кристалізації речовини з метанолу. Приклад одержання сполуки: готують розчин 6-етокси-4-хлор-2метилхіноліну додаючи 2,20г (0,01мол) в 20мл діоксану; - розчинюють 1,21г (0,01мол) L-цистеїну в 2,0мл води, додаючи 1 еквівалент (1,2мл) 30% соляної кислоти; - отримують реакційну суміш і нагрівають на киплячому водяному нагрівнику протягом 90-120 хвилин; - реакційну суміш виливають у чашку для упарювання і наполовину випарюють розчинник при 40-50°С; - осад збирають, промивають на фільтрі ацетоном, сушать, перекристалізують з метанолу; - готують розчин 6-етокси-S-(2-метилхінолін-4іл)-L-цистеїну (0,01мол в 30мл 5% NaOH); - готують розчин 0,01мол бурштинового ангідриду в 5,0мл ацетону; - додають його по краплях, для підтримання рН середовища 8,0 вносять 10%-й розчин лугу; - одержують реакційну суміш; - перемішують одержану реакційну суміш протягом 30±10хв.; - фільтрують осад, промивають його водою, сушать та кристалізують з метанолу; - готують розчин N-сукциноїл-S-(6-етокси-2метилхінолін-4-іл)-L-цистеїну в суміші метанол:вода (10:1); 44791 4 - додають водний розчин NaOH з 5% надлишком; - випаровують розчинник; - кристалізують речовину з метанолу. Вихід динатрієвої солі N-сукциноїл-S-(6етокси-2-метилхінолін-4-іл)-L-цистеїну 412,34г (92%). Знайдено: С 49,12; Н 4,26; N 6,17; О 21,29; S 7,20; Вирахувано: С 50,66; Н 4,48; N 6,22; Na 10,21; О 21,31; S 7,12. Індивідуальність сполуки контролювалась і підтверджена методом тонкошарової хроматографії на пластинках "Silufol" у системі розчинників: оцтова кислота-вода (1:1). Значення Rf-100=70. Хімічну структуру динатрієвої солі Nсукциноїл-S-(6-етокси-2-метилхінолін-4-іл)-Lцистеїну доведено за допомогою хромато-мас- та спектроскопії парамагнітного резонансу (ПМР). У ПМР-спектрі динатрієвої солі N-сукциноїл-S(6-етокси-2-метилхінолін-4-іл)-L-цистеїну спостерігають складний мультиплет протонів ароматичного ядра (d=7,20-8,20м.д.), сигнали протону групи (=NCH), який проявляється у вигляді квартету d=4,45-4,70м.д. Метилентіогрупа (SCH2) проявляє себе триплетом або мультиплетом при d=3,353,75м.д. Синглет протонів метальної групи в положенні 2 хінолінового циклу виявляє себе трьохпротонним синглетом (d=2,55-2,80м.д.). Сигнали протону ациламідної групи спостерігають у вигляді дуплету при δ=8,45-9,00 м.д. В ПМР- спектрі визначають квартет в області 4,1 м.ч., що характерно значенням хімічних зсувів протонів етоксигрупи (ОС2Н5) в 6-му положенні хінолінового циклу. У хромато-мас-спектрах динатрієвої солі Nсукциноїл-S-(6-етокси-2-метилхінолін-4-іл)-Lцистеїну під дією хімічної іонізації спостерігають сигнали М+1, що підтверджує розрахункову молекулярну вагу. Динатрієва сіль N-сукциноїл-S-(6-етокси-2метилхінолін-4-іл)-L-цистеїну є безбарвною кристалічною речовиною з температурою розкладання 177°С, розчинною у воді, важко розчинною в нижчих спиртах, погано розчинною в диметилформаміді, нерозчинною в ацетоні, ефірі. Летальна доза (ЛД50) визначалася на білих безпородних мишах вагою 18-25г експресметодом Прозоровського при внутришньочеревинному введенні досліджуваної сполуки. ЛД50 для динатрієвої солі N-сукциноїл-S-(6-етокси-2метилхінолін-4-іл)-L-цистеїну становить >2000мг/кг. Вивчення гепатопротекторної активності сполуки в дослідах in vivo було проведено на моделі гострої поразки печінки тетрахлорметаном [Доклінічні дослідження лікарських засобів (метод, рекоменд) / За ред. О.В. Стефанова. - К, 2001. - с. 334351]. 5 44791 6 Таблиця 1 Показники стану гепатоцитів щурів на моделі гострого ураження печінки тетрахлорметаном № п/п 1 2 3 4 Показник АлАТ, Од/л % змін Інтакт 54±7,2 Контроль 347±56 Натрієва сіль b-(6-етокси-2-метилхінолін-4-ілтіо)-a1 178±14,6 51,3 оксипропіонової кислоти (найближчий аналог) Динатрієва сіль N-сукциноїл-S-(6-етокси-270,1 102±17,21,2 метилхінолін-4-іл)-L-цистеїну АсАт, Од/л 70±5,7 289±84 % змін 167±12,21 46,8 115±261,2 60,2 Примітки: (р