Динатрієва сіль n-(9-флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти, яка виявляє протитуберкульозну дію

Динатрієва сіль N-(9-флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти формули (І) Винахід стосується нової хімічної сполуки, а саме динатрійної солі N-(9-флуореніліден)гідразиду о-оксибензоатної кислоти формули 1, Пошук нових ефективних речовин протитуберкульозної дії серед різних класів органічних сполук є надзвичайно актуальним. До найефективніших нових речовин належать аналоги Ізоніазиду, Рифампіцину, а також фторхінолони [3]. На основі флуорену створені нові оригінальні речовини, які за специфічною дією у дослідах in vitro та in vivo перевершують активність Ізоніазиду. Нові флуореніліденгідразиди менш токсичні, пригнічують ріст полірезистентних штамів мікобактерій туберкульозу, виявляють синергідну дію з Рифампіцином [1, 5, 6]. Технічне завдання полягає у розширенні асортименту ефективних субстанцій протитуберкульозної дії з низькою токсичністю для організму. Поставлену задачу вирішують таким чином, що одержують динатрійну сіль N-(9флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти, яка високоактивна до чутливого й стійкого штамів мікобактерій туберкульозу і має низьку токсичність. Сполука формули 1 в літературі не описана. Спосіб синтезу сполуки формули 1 полягає у взаємодії еквімолярних кількостей N-(9 O Na N N O Na O Na яка виявляє протитуберкульозну дію. З 1993 p. туберкульоз став Глобальною проблемою людства. У всіх країнах світу зростає захворюваність серед дорослих, дітей і підлітків. За показниками смертності від туберкульозу очевидний вкрай несприятливий розвиток епідемічної ситуації, невпинне прогресування хвороби без будь-якої стабілізації [4]. (11) N UA N (19) O Na 87367 (13) C2 , (І) яка виявляє протитуберкульозну дію. 3 87367 4 флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислореакційного середовища виділяється дрібнокристи і металічного натрію у диметилформаміді. талічний продукт червонувато-оранжевого кольоПриклад. 3,14ґ (0,1 моль) N-(9-флуореніліден)ру. Суміш кип'ятять ще 15хв, після чого осад відгідразиду о-оксибензоатної кислоти (ТУ 6-09-14фільтровують, промивають толуолом і ефіром, 2160-84) у вигляді тонких голок ясно-жовтого ковисушують. Одержують 3,54ґ (98,7%) динатрійної солі Nльору розчиняють при 90°С у 0,15л диметилфор(9-флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кисмаміду. До гарячого розчину додають 4,60ґ (0,2ґлоти у вигляді дрібних кристаликів жовтого кольоатом) дрібно нарізаного натрію металічного і кип'яру, т.пл. >300°С тять протягом 2 год. Після чого до гарячого розчину додають при перемішуванні 0,06л толуолу. Із Знайдено, %: Вирахувано, %: C20H12N2O2Na2 С 67,37 С 67,04 М.м. 358,31 УФ-спектри в етанолі 96%, l макс., нм (Abs): 202,2 (0,498), 252,3 (0,492), 262,3 (0,466). Найближчим структурним аналогом заявленої нової сполуки є N-(9-флуореніліден)-гідразид ооксибензоатної кислоти формули 2: OH N NH O , формула 2 Структурний аналог описаний серед флуореніліденгідразидів заміщеної бензоатної кислоти (3метокси-, 3-нітро-, 4-нітро-), які виявляють in vitro протитуберкульозну дію щодо Мус. tuberculosis hominis H37Rn. Досліджені флуореніліденгідразиди характеризуються дуже цінною здатністю трансформувати мікобактерії туберкульозу в зернисті форми (конгломерати). Цієї здатності не виявляють відомі туберкулостатики Ізоніазид (син. ГІНК) і препарати ряду ГІНК [1]. Ефективність заявленої динатрійної солі N-(9флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти вивчено in vitro із зависсю культури Мус. tuber Н 3,51 Н 3,38 N 8,06 N 7,82 Na 12,98 Na 12,83 culosis hominis H37Rn та мікобактерій, виділених від хворих на туберкульоз легень. Використано метод серійних розведень на густому середовищі Льовенштейна-Єнсена. У кожну дослідну і контрольні пробірки засівали по 0,2мл суспензії мікобактерій за стандартом оптичної мутності. Через 14 днів інкубації з осаду готували мазки для бактеріоскопічного дослідження. Забарвлення за Ціль-Нільсеном. За результатом бактеріологічних досліджень спостерігали через 15, 30, 60 та 90 діб від моменту посіву матеріалу. Відлік починався з часу, коли в контрольних пробірках (без починався з часу, коли в контрольних пробірках (без антибактерійних препаратів) спостерігався ріст колоній мікобактерій туберкульозу. За еталон порівняння специфічної протитуберкульозної дії взято найактивніший лікарський засіб - туберкулостатик Ізоніазид. Встановлено, що заявлена динатрійна сіль N(9-флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти перевищує активність Ізоніазиду. Мінімальна інгібувальна концентрація заявленої нової сполуки щодо Мус. tuberculosis hominis H37Rn становить 0,078мкґ/мл. На 90-й день експерименту росту колоній не було у пробірках із такими досліджуваними сполуками в концентраціях: динатрійна сіль N-(9флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти - 0,625мкґ/мл, Ізоніазид - 5мкґ/мл (таблиця 1). Таблиця 1 Бактеріостатична дія динатрійної солі N-(9-флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти та Ізоніазиду на Мус. tuberculosis hominis H37Rn (90-ий день після посівів) Сполуки Активність щодо Мус. tuberculosis hominis H37Rn (розведення речовин / мкґ/мл) 5,0 2,50 1,25 0,625 0,313 0,156 0,078 Контроль культури +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ Контроль ПЕҐ-400 +++ +++ +++ +++ +++ +++ +++ Ізоніазид + + + + + + динатрійна сіль N-(9-флуореніліден)" + + + гідразиду о-оксибензоатної кислоти Примітка: (-) немає росту мікобактерій; (+) наявність поодиноких колоній, (+++) ріст культури. 5 87367 6 Вивчено чутливість штамів мікобактерій, видідинатрійної солі N-(9-флуореніліден)-гідразиду олених від вперше виявлених хворих на туберкуокси-бензоатної кислоти на штам МБТ, стійкий до льоз легень, до динатрійної солі N-(9Ізоніазиду. При цьому, у разі штаму, стійкого до флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоІзоніазиду, мінімальна інгібувальна концентрація ти. динатрійної солі N-(9-флуореніліден)-гідразиду оВикористано чутливий до Ізоніазиду та стійкий оксибензоатної кислоти становить 0,078мкґ/мл до Ізоніазиду штами мікобактерій, які свіжовиділені (таблиця 2). від хворих. Встановлено ефективну дію заявленої Таблиця 2 Протитуберкульозна дія динатрійної солі N-(9-флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти на штами мікобактерій туберкульозу, виділені від хворих Мінімальна інгібувальна концентрація (мкґ/мл) штам МБТ, чутливий до штам МБТ, стійкий до Ізоніазиду Ізоніазиду Досліджувані речовини динатрійна сіль N-(9-флуореніліден)-гідразиду оксибензоатної кислоти Ізоніазид Динатрійна сіль N-(9-флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти високоефективна до мікобактерій туберкульозу, резистентних до протитуберкульозного препарату Ізоніазиду, що має важливе практичне й наукове значення. Гостру токсичність нової сполуки визначено за «Вимогами до вивчення загальнотоксичної дії но о 0,078 0,078 0,078 вих фармакологічних речовин» Державного фармакологічного центру МОЗ України. ЛД50 динатрійної солі N-(9-флуореніліден)гідразиду для білих безпородних мишей при внутрішньоочеревинному введенні дорівнює 6000мґ/кґ маси (таблиця 3). Таблиця 3 Порівняльні дози ЛД5о для калію N-(9-флуореніліден)-N'-анісогідразонату і відомих протитуберкульозних препаратів Препарати спосіб введення динатрійна сіль N-(9-флуореніліден)-гідразиду овнутрішньо-очеревинний оксибензоатної кислоти Ізоніазид внутрішньо-очеревинний Динатрійна сіль N-(9-флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти належить до фармакологічних субстанцій високої специфічної дії на мікобактерії туберкульозу і є безпечною для організму. Динатрійну сіль N-(9-флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти легко отримувати в умовах фармацевтичного виробництва, - синтез простий, сировина доступна. У разі впровадження у виробництво, заявлена нова субстанція динатрійної солі N-(9флуореніліден)-гідразиду о-оксибензоатної кислоти сприятиме розв'язанню складних проблем фтизіатрії, удосконаленню схем лікування і профілактики осіб з групи ризику захворювання на туберкульоз, стабілізації епідемічної ситуації в Україні [2]. Джерела інформації: 1. А.с. SU 1469805 Al C07 109/10, 109/16, A61K 31/175 Флуоренилиденгидразиды замещенной бензойной кислоты, обладающие противотуберкулезным действием / Маслова Л.И., Калмыкова Г.Н., Змияк Н.В., Саядова З.С. - Заявка № 4230091/31-04 от 14.04.87 (непубликуемое). ЛД50 для білих безпородних мишей, мґ/кґ 6000 195 2. Закон України № 648-V від 08.03.2007. Загальнодержавна програма протидії захворюванню на туберкульоз у 2007-2011рр. 3. Каюкова Л.А., Пралиев К.Д. Основные направления поиска нових противотуберкулезных средств (обзор) / Химико-фармацевтический журнал. – 2000. – Т. 34. - № 1. – С. 12-19. 4. Мельник В.М., Новожилова 1.0. Особливості змін показників смертності та причин смерті від туберкульозу як складова його сучасного патоморфозу./ Сучасні проблеми епідеміології, мікробіології та гігієни. 36. матеріалів конф. - 2007. - Вип.5. - С. 10-15. 5. Петрух Л.І. Актуальність створення і впровадження у промислове виробництво нових лікарських засобів. 36. описів винаходів / За ред. Л.І. Петрух, В.М. Петрух - Львів, ЛвЦНТЕЇ, 2003. - 198 с. 6. Петрух Л.І. Вклад у розвиток української фармацевтичної та медичної науки й практики кафедри фармацевтичної хемії факультету післядипломної освіти ЛНМУ імені Данила Галицького. Історичний нарис. До 50-річчя ФПДО ЛНМУ імені Данила Галицького / За ред. докт. фарм. наук, проф. Петрух Л.І. - Львів, 2005. - 156 с. 7 Комп’ютерна верстка А. Крижанівський 87367 8 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601