Спосіб прогнозування перебігу захворювання у хворих на рак шийки матки

Спосіб прогнозування перебігу захворювання у жінок, хворих на рак шийки матки, що включає імуногістохімічне визначення ферменту циклооксигеназа-2, який відрізняється тим, що у пацієнток з різними гістологічними типами пухлин І-IV стадій захворювання додатково визначають експресію фактора росту ендотелію судин і при рівні цих показників нижче 11 % прогнозують 5-річну безрецидивну виживаність, а при 80 % і більше - виникнення рецидивів і метастазів протягом двох років. (19) (21) u200907220 (22) 10.07.2009 (24) 11.01.2010 (46) 11.01.2010, Бюл.№ 1, 2010 р. (72) ВОРОБЙОВА ЛЮСЯ ІВАНІВНА, ГОНЧАРУК ІРИНА ВІКТОРІВНА, ЛУК'ЯНОВА НАТАЛІЯ ЮРІЇВНА, ЧЕХУН ВАСИЛЬ ФЕДОРОВИЧ (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ ІНСТИТУТ РАКУ, ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ ПАТОЛОГІЇ, ОНКОЛОГІЇ ТА РАДІОБІОЛОГІЇ ІМ. Р.Є. КАВЕЦЬКОГО НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ НАУК УКРАЇНИ 3 фінових зрізах пухлинної тканини. Депарафіновані зрізи товщиною 4-6мкм монтуються на скельця, покриті полі-L-лізином або на скельця з адгезивними властивостями Super Frost Plus (Німеччина) і залишаються на добу в термостаті при 37°С, або ж на 30 хвилин в термостаті при 56°С у разі застосування скелець (Super Frost Plus). У день проведення імуногістохімічної реакції проводиться депарафінування та обезводнювання зрізів. Для оптимального імуногістохімічного визначення експресії антигенів проводять демаскування антигенів в розчині 0,1М цитратного буферу (рН6,0), шляхом інкубування у мікрохвильовій печі протягом 2 хвилин за потужності 600Вт, або на водяній бані протягом 20 хвилин за температури 90°С з подальшим охолодженням скелець до кімнатної температури у розчині цитратного буферу. Надалі виявлення антигенів проводять у вологій камері при кімнатній температурі. Для зменшення специфічного забарвлення на зрізи наносять 1% - розчин бичачого сироваткового альбуміну (БСА). Білки, що входять до його складу, блокують усі високозаряджені неспецифічні ділянки, з якими може відбутися неспецифічне зв'язування моноклональних антитіл (МКАТ). Потім проводять інкубацію препаратів з моноклональними антитілами, специфічними до вищезазначених білків протягом однієї години. Після цього зрізи тричі відмивають у фізіологічному розчині NaCl, забуференому фосфатами (ЗФР), при рН 7,4. Всі інкубаційні цикли, що передбачені при імуногістохімічному виявленні антигенів, проводять у вологій камері при кімнатній температурі. Якщо для візуалізації застосовують систему «EnVision+» (Dako Cytomation, Данія) яку наносять після МКАТ, то гістохімічне визначення активності пероксидази проводять безпосередньо через 30 хвилин інкубації з вищевказаною системою. Після виявлення активності пероксидази або лужної фосфатази зрізи тканини пухлин дофарбовують гематоксиліном протягом 2-3 хвилин і укладають в бальзам або Faramount Aqueous Mounting Medium (DakoCytomation, Данія). Оцінку результатів фарбування проводять за допомогою світлового мікроскопу (збільшення х 400). У дослідженні застосовували наступні критерії оцінки: за кількістю забарвлених клітин: пухлину вважали негативною за експресією СОХ-2, якщо у тканині була відсутня цитоплазматична реакція з МКАТ; при позитивній реакції у цитоплазмі 0-20% клітин - низький рівень, 20-50% - середній рівень та 50-100% - високий рівень експресії СОХ-2. Нами встановлено, що коли рівень експресії СОХ-2 та VEGF становив більше 80% цитоплазми пухлинних клітин - у хворих виявляли рецидиви і 46889 4 метастази протягом 2 років, а при рівні експресії менше ніж 11% безрецидивний період був більше ніж 5 років. Прикладами конкретного виконання заявленого способу можуть бути виписки з історій хвороб двох пацієнток. 1. Хвора Я., 31 рік. Історія хвороби № 3241. Діагноз - низько диференційований плоскоклітинний рак шийки матки. Хвора була прооперована в обсязі оп. Вертгейма 18.06.2002 р. з встановленням стадії пухлинного процесу pT1bN0M0G3 (патогістологічне заключення №13698-76/02). Після хірургічного видалення пухлини за правилами загальноприйнятої технологічної процедури обробки біологічного матеріалу вироблявся парафіновий блок. ІГХД експресії СОХ-2 та VEGF було проведено на парафінових зрізах пухлинної тканини за вищевказаною методикою. В результаті проведення ІГХД встановлено наявність у пухлині високої експресії СОХ-2 (81%) та VEGF (85%), на підставі чого можна стверджувати про несприятливий прогноз перебігу захворювання. Незважаючи на радикальне лікування, у хворої через 7 місяців від дати встановлення діагнозу розвинувся рецидив захворювання (в параметріях, у піхві), а через 14 місяців хвора померла. 2. Хвора О., 46 років. Історія хвороби № 1616. Діагноз - низькодиференційований плоскоклітинний рак шийки матки. Хвора була прооперована в обсязі оп. Вертгейма 24.03.1997 р. з встановленням стадії пухлинного процесу pT1bN0M0G3 (патогістологічне заключения № 4205-17/97). Після хірургічного видалення пухлини за правилами загальноприйнятої технологічної процедури обробки біологічного матеріалу вироблявся парафіновий блок. ІГХД експресії СОХ-2 та VEGF було проведено на парафінових зрізах пухлинної тканини за вищевказаною методикою. В результаті проведення ІГХД встановлено низький рівень експресії СОХ-2 (6%) та VEGF (10%), на підставі чого можна стверджувати про сприятливий прогноз перебігу захворювання. В результаті проведеного радикального лікування протягом 12 років рецидив захворювання не розвинувся і хвора жива, знаходиться під спостереженням. Таким чином, за заявленим способом, висока експресія зазначених вище білків корелює з розвитком рецидивів і метастазів та тривалістю періоду виживаності хворих на рак шийки матки, що свідчить про об'єктивність даного способу. Спосіб виконано у 75 хворих на рак шийки матки, які перебували на стаціонарному лікуванні в Національному інституті раку. Узагальнені результати представлені в таблиці. 5 46889 6 Таблиця Рівень експресії VEGF і СОХ-2 у пухлинах хворих на РШМ залежно від тривалості безрецидивного періоду Клініко-морфологічні параметри Безрецидивний період Без рецидиву > 5 років 3 рецидивами і метастазами Всього: Кількість паці- Рівень експресії єнток СОХ-2 (%) 45 30 75 Джерела інформації 1. Плоскоклеточный рак шейки матки IB стадии: комбинированное лечение, факторы прогноза / К.П. Лактионов, А.И. Зотиков, Л.А Марьина, и др. // Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина. - 2001. - № 3. С. 38-43. 2. Мамедова Л.Т. Факторы прогноза и отдаленные результаты лечения рака шейки матки // Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина. - 2002. - № 3. - С. 47-52. 3. Predictive factor of distant recurrence in locally advanced squamous cell carcinoma of the cervix treated with concurrent chemoradiotherapy / M. Hirakawa, Y. Nagai, M. Inamine, et al // Gynecol Oncol. - 2008. - Vol.108, № 1. - P. 126-129. 4. Singh N., Arif S. Histopathologic parameters of prognosis in cervical cancer- a reviw // Int J Gynecol Cancer. - 2004. - № 14. - P. 741- 750. Комп’ютерна верстка А. Крулевський 11,0% 81,0% Р Рівень експресії VEGF (%) Р