Поживне середовище для вирощування мікроклонів винограду

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к виноградарству, и может быть использовано при выращивании безвирусного посадочного материала винограда. Наиболее близкой к предлагаемой среде является питательная среда Мурасиге и Скуга (MC), состоящая из микро: и макроэлементов, фитогормона 6-Бензиладенин 1мг/л , с добавлением агара 6000 14000мг/л, сахарозы 30000мг/л,др.веществ и комплекса витаминов по MC ./П.Я.Голодрига и др. Методические рекомендации по клональному микроразмножению винограда. Ялта, 1986 г., с. 19-20, вариант МЗ). Недостатком данной среды является использование большого количества дорогостоящего агара, который бывает недостаточно чистым, что приводит к изменению pH среды. На агаризованной среде довольно низкая приживаемость эксплантов и недостаточно быстрое их развитие. В основу изобретения поставлена задача усовершенствования питательной среды для выращивания микроклонов винограда, в которой путем замены агара на кукурузный крахмал обеспечивается увеличение приживаемости инициальных эксплантов, сокращение периодов распускания пазушных почек и укоренения инициальных эксплантов и за счет этого сокращается период выращивания сертифицированных саженцев. Поставленная задача решается тем, что в питательной среде для выращивания микроклонов винограда, содержащей в качестве основы питательную среду Мурасиге и Скуга, сахарозу, витамины по Мурасиге и Скугу, фитогормоны и загуститель, согласно изобретению в качестве загустителя используется кукурузный крахмал, а в качестве и фитогормонов - 6-Бензиламинопурин (6-БАП) при следующем соотношении компонентов: макроэлементы: микроэлементы: NH4 NO3 1650мг/л Н3ВО3 6,2мг/л KNO3 1900мг/л MnSO4 5H2O 24,1мг/л MgSO4 7Н2О 370мг/л ZnSO4 7H2O 8,6мг/л КН2РО4 170мг/л KI 0,83мг/л СаСl2 331мг/л Na2 MoO4 2H2O 0,25мг/л FeSO4 7H2O 27,8мг/л CuSO4 5H2О 0,025мг/л Nа2-ЭДТА 37,3мг/л СоСl2 6Н2О 0,025мг/л фитогормон 6-Бензиламинопурин ( 6-БАП) -0,8 - 1,0мг/л. витамины : мезо-инозит 100мг/л тиамин НСl 1мг/л пиродоксин НСl 1мг/л никотиновая кислота 1мг/л кукурузный крахмал 65 - 75г/л сахароза 15 - 17г/л Агар применяется в питательных средах для желирования и на процессы роста и развития растений влияния не оказывает. В крахмале, полученном из кукурузных зерен, содержится ряд питательных (углеводов и др.) и физиологически активных веществ, способствующих ускорению роста и развития эксплантов, а также увеличению их приживаемости. Концентрация сахарозы 15 - 17г/л и фитогормона 6-Бензиламинопурин-( 6-БАП) - 0,8 - 1,0мг/л в предлагаемой среде является оптимальной, так как превышение концентрации этих веществ приводит к образованию каллуса на базальном конце эксплантов и, соответственно, замедляет их рост и развитие. Для стимулирования приживаемости и развития инициальных эксплантов на среде, желированной кукурузным крахмалом используют витамины следующей концентрации: мезо-инозит - 100мг/л тиамин НСl - 1мг/л пиродоксин НСl - 1мг/л никотиновая кислота - 1мг/л, Размножение методом культуры in vitro осуществляется апикальными верхушками 0,5 - 0,8мм, а также одноглазковыми узлами размером 80 - 100мм, полученными при проращивании одревесневшей лозы. Инициальные экспланты стерилизуют по принятой методике и высаживают на разработанную питательную среду. Для приготовления питательной среды готовят маточные растворы макро: и микроэлементов, отбирают необходимое их количество, смешивают и добавляют витамины, фитогормон 6Бензиламинопурин ( 6-БАП) - 0,8 -1,0мг/л и сахарозу 15 - 17г/л. После этого производят желирование кукурузным крахмалом - 65 - 75г/л: pH среды составляет 5,6 - 5,8. Среду стерилизуют автоклавированием при давлении 1 атм. 15 - 20мин. Полученную среду используют для введения винограда в стерильную культуру, а также для микроразмножения и выращивания микроклонов. Пример 1. 50 инициальных эксплантов - одноглазковых узлов сорта Марсельский черный ранний после стерилизации высадили на разработанную питательную среду, желированную кукурузным крахмалом в количесве 70г/л, с добавлением сахарозы 16г/л и фитогормона : 6-Бензиламинопурин (6-БАП) - 1,0мг/л. На четвертый день было подсчитано количество прижившихся эксплантов - 45шт. Начало пролиферации пазушной почки отмечено на третий день у восьми эксплантов, на четвертый день у десяти и на шестой день у всех остальных. Инициале, с распустившимися пазушными почками, пересаживают на среду 11 этапа эмбриогенеза для укоренения и последующего доращивания. Начало ризогенеза отмечено на шестой день у шести эксплантов, на седьмой день еще у шести , а на девятый день у всех остальных. По данному примеру 1 приведено ряд примеров на сортах Каберне Совиньони Траминер розовый и результаты занесены в таблицу 3. В табл. 1 приведена характеристика исследования приживаемости инициальных эксплантов на экспериментальных средах. Исследования показывают, что при одинаковых остальных условиях, разработанная среда по сравнению со всеми известными и приведенными оказалась наиболее эффективной, так как приживаемость инициальных эксплантов увеличивается на 13 - 15%. В табл. 2 приведена характеристика развития инициальных эксплантов винограда. При употреблении разработанной среды на 2 - 3 дня уменьшаются периоды распускания пазушных почек и укоренения эксплантов винограда. В результате увеличивается общее количество саженцев, выращенных за вегетационный период, экономятся полезные площади культуральных и тепличных помещений. Разработанная среда в готовом виде имеет густой молочный цвет, достаточно плотную консистенцию, удобную для посадки и развития инициальных эксплантов. Экономический эффект достигается благодаря замене агара ( цена за 1кг –80 - 90$ ) кукурузным крахмалом (цена за 1кг -1грн. 60коп.) и составляет 400$ на 1000 сертифицированных саженцев винограда. Таблица 1 Приживаемость инициальных эксплантов Контроль (среда на основе агара) Сорт Среда, желированная картофельным крахмалом Предложенный способ (среда, желированная кукурузным крахмалом) Высаже- Прижи- Приживае-Высаже- Прижи- Приживае-Высаже- Прижино, шт. лось, шт. но, шт. лось, шт. мость, % но, шт. лось, шт. мость Марсельский черный ранний Каберне Совиньон Траминер розовый Приживаемость, % 50 37 74 50 22 44 50 45 90 50 40 80 50 31 62 50 47 94 50 34 86 50 15 30 50 41 82 Таблица 2 Развитие инициальных эксплантов Контроль (среда на основе агара) Сорт Среда, желированная картофельным крахмалом Предложенный способ (среда, желированная кукурузным крахмалом) Период распускания пазушной почки, дней Период образования корней, дней Период распускания пазушной почки, дней Период образования корней, дней Период распускания пазушной почки, дней Период образовани я корней, дней Марсельский черный ранний 5–6 10 – 11 6–7 10 3–4 6–8 Каберне Совиньон 5–6 9 – 10 6–7 2–4 5–7 Траминер розовый 5-6 10 - 11 6-7 11 - 12 3-4 6-7 Таблица 3 Примеры Компоненты Кукурузный крохмал, г/л Сахароза, г/л Фитогормон 6Вензиламинопурин (6-БАП), мг/л Выводы Приживаемость инициальных Пр. 1 Пр. 2 Пр. 3 Пр. 4 Пр. 5 1-3 80 94 82 64 эксплантов, % (сорт Каберне Совиньон) Период распускания пазушных почек эксплантантов и ускорения инициальных эксплантантов (сорт Каберне Совиньон), дней Замулен, образуется каллус Уменьшение на 2 дня Уменьшение на 3 дня Уменьшение на 2 дня Уменьшение на 1 – 2 дня