Спосіб визначення біфентрину в біологічних об’єктах

Спосіб визначення біфентрину в біологічних об'єктах, що включає вилучення інсектициду, осаджування коекстрактивних речовин з водноацетонового розчину органічним розчинником, доочищення на хроматографічній колонці розчином гексан-бензолу двічі, який відрізняється тим, що вимивання екстракту із хроматографічної колонки проводять гексаном одноразово. (19) (21) u200714464 (22) 21.12.2007 (46) 25.07.2008, Бюл.№ 14, 2008 р. (72) МАЛІНІН ОЛЕГ ОЛЕКСІЙОВИЧ, UA, КУЦАН ОЛЕКСАНДР ТИХОНОВИЧ, UA, ДОЦЕНКО РОМАН ВАЛЕРІЙОВИЧ, UA (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ НАУКОВИЙ ЦЕНТР "ІНСТИТУТ ЕКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЇ І КЛІНІЧНОЇ ВЕТЕРИНАРНОЇ МЕДИЦИНИ" НАЦІОНАЛЬНОЇ АКА 3 SE-30. Нову колонку кондиціонували, не з'єднуючи з детектором, протягом 12-16 годин, при температурі вищій за робочу на 30-40°С. Основний стандартний зразок біфентрину з концентрацією 100мкг/мл готували розчиняючи 10мг препарату в 10мл ацетону і доводили до мітки ацетоном у мірній колбочці на 100мл. Робочі стандартні розчини в гексані з концентраціями: 10 і 1мкг/мл готували із основного стандартного зразка. Зберігали стандартні розчини в холодильнику, у щільно закупореному посуді, що виключає випарювання органічних компонентів протягом одного місяця. Приклад 2 Виділення біфентрину із об'єктів тваринного походження. Із середньої гомогенізованої проби відбирали наважку: м'язова тканина - 10-20г, внутрішні органи - 10г, жир - до 4г, жовток яйця - до 10г, білок яйця - до 20г. Відібрану наважку поміщали в конічну колбу з притертою пробкою і екстрагували 30мл ацетону протягом 1-ї години на апараті для струшування (або залишали на 16-20 годин, періодично перемішуючи). Екстракт декантували або відфільтровували через паперовий фільтр в чисту колбу. Залишок і фільтр промивали 5мл ацетону. До об'єднаного ацетонового екстракту добавляли 5мл дистильованої води і поміщали колбу на 1-2 години у випарювальну камеру холодильника (при 0-(5°С). Після чого проби вимивали і залишок відділяли фільтрацією через ватний фільтр. Після цього біфентрин реекстрагували в ділильній лійці із водно-ацетонового розчину гексаном двічі, використовуючи при цьому 15 і 10мл екстрагенту. Потім гексановий екстракт виливали у випарювальну чашку і концентрували до 0,5мл. Надосадкову рідину переносили у приготовлену хроматографічну колонку для додаткового очищення екстракту. При цьому використовували скляну хроматографічну колонку з діаметром 7-8мм. В нижню звужену частину колонки вводили ватний тампон, насипали шар безводного сірчанокислого натрію - 0,5см, оксиду алюмінію - 2см і шар безводного сірчанокислого натрію - 0,5см. Колонку перед внесенням екстракту промивали 5мл гексану. Після всмоктування аналізуємого гексанового екстракту починали вимивання біфентрину: 5мл гексану. Приклад 3 10мл молока виливали в колбу і добавляли 30мл ацетону. Суміш в колбі перемішували і пробу ставили на апарат для струшування, на одну годину. Після цього суміш охолоджували у випарювальній камері холодильника одну годину. Потім фільтрували через паперовий фільтр або центрифугували, відділяючи надосадкову рідину, яку об 33936 4 робляли далі за описаним вище способом. Приклад 4 Ідентифікація і кількісне визначення біфентрину. Очищений екстракт (гексановий) аналізували за допомогою газової хроматографії, по необхідності розбавляючи гексаном в 3-5 і більше разів. Для ідентифікації біфентрину використовували газовий хроматограф з детектором по захвату електронів. Скляну колонку довжиною один метр заповнювали хроматоном inerton-super /0,16-0,20/ з нанесеною рідинною фазою SE-30 в кількості 5%. Температура випарювача - 250°С, термостата колонок - 240°С, термостата детектора - 260°С. Газносій - азот особої чистоти (або аргон вищої категорії очищення). Швидкість подачі газа на колонку 30мл за хвилину, на продування детектора - 70100мл за хвилину. Робоча шкала електрометра від 5 до 20х10-12А. У випарювач хроматографа вводили 1-5мкл стандартного або аналізуємого розчину. Час удержування біфентрину - 5,0хв. Мінімально детектуємі кількості: біфентрину - 1,0нг. При роботі хроматографа на аргоні використовували шкалу з більш вищою чутливістю (10 або 5х10-12А). Якісну ідентифікацію біфентрину здійснювали за часом утримання. Кількісне визначення біфентрину в пробі проводять методом порівнювання висоти або площі піка стандартного і дослідного розчину. Математичні розрахунки проводять за формулою: Упр (мл) х Ст(нг ) х Нпр х 100 X= Ур - н(мкл) х Нст х М(г )К Де: X - кількість біфентрину в пробі в мг на кг; Упр(мл) - об'єм екстракту в мл; Ст(нг) - кількість пестициду в нг введена у випарювач хроматографа зі стандартним розчином; Нпр - висота піка аналізуємої проби в см; Ур-н(мкл) - кількість екстракту введеного в хроматограф в мкл; Нст - висота піка стандарту в см; М(г) - маса проби взятої для екстракції (в г або мл); 100 - коефіцієнт для внесення поправки на втрати пестициду при К екстракції і підготовки проби для дослідження, де К - визначаємість препарату в % (біфентрин - 75%). Спосіб визначення біфентрину в біологічних об'єктах є ефективним. Його використання спрощує процедуру аналізу та підвищує точність визначення біфентрину, при меншому часі екстракції та кращому очищені екстракту. 5 33936 6 Таблиця Спосіб визначення біфентрину в біологічних об'єктах Статистичні показники Межа визначення, мг/кг К-сть паралельних проб Розмах варіювання, % М±m, % Стандартне відхилення, % Медіана, % м'ясо 0,02 5 74-84 78,6±1,78 3,97 78 Комп’ютерна верстка А. Крулевський Аналізуємі об'єкти внутрішні органи молоко 0,02 0,02 5 5 60-78 59-78 69,4±2,93 65,0±4,65 6,54 10,39 69 60 Підписне жир 0,10 5 49-70 61,2±3,64 8,14 61 яйця 0,05 5 57-73 64,8±2,84 6,34 64 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601