Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Спосіб активування офіцинальних форм пробіотиків, який полягає у підрощуванні мікроорганізмів на поживному середовищі, який відрізняється тим, що як середовище використовується 5% відвар сушених яблук, а інкубація відбувається у двох режимах: при температурі 37°С протягом 3 год 30хв. або при кімнатній температурі протягом 5 год.

Текст

Спосіб активування офіцинальних форм пробютиків, який полягає у підрощуванні мікроорганізмів на поживному середовищі, який відрізняється тим, що як середовище використовується 5% відвар сушених яблук, а інкубація відбувається у двох режимах при температурі 37°С протягом 3 год ЗОхв або при кімнатній температурі протягом 5 год Для профілактики і лікування дисбактеріозу при гострих кишкових інфекціях широко застосовуються різноманітні пробютики ( Ніколаєва Л Г , 1999, Бабак О Я , Кушнір І Е , І999 ) Вони використовуються в основному в трьох лікарських формах люфілізованих порошках, які безпосередньо ЯЛЬНОСТІ (вітаміни, ферменти, органічні кислоти тощо) Прототипами методу є різні способи активації мікроорганізмів шляхом внесення і пророщування їх в поживних середовищах Такими способами користуються насамперед в хлібопекарному виробництві і у виробництві кисломолочний продуктів кефірів, йогуртів, сирів В технології виготовлення сиру "Костромський" використовують бактеріальний концентрат, який перед внесенням в молочну суміш для сквашування вноситься в невелику КІЛЬКІСТЬ стерильного молока і витримується там 4 години при кімнатній температурі Таким способом отримують закваску із активованих бактеріальних клітин, які розмножуються і ферментують [ Патент UA, 10134, А 93007239, кл C12N 1/20, А23С 9/12, опубл 30 09 96 Бюл №3] Для активації дріжджів існує метод витримування їх в розчині поживного середовища, який складається із концентрату квасного сусла і солі калія фосфорнокислого на протязі 45 - бОхв в аеробних умовах [Дерканосов Н И , Пащенко Л П Интенсификация биотехнологических процессов в хлебопечении - Издательство Воронежского университета, 1991 - с 24 -ЗО], або внесення їх в середовище, яке складається із сиропу-сорго цукрового, води і муки на 50 - бОхв при t 29 - 31 °С [Патент UA 12515 А, № 93005609, кл A21D 2/36, опубл 28 02 97 Бюл №1] Інший спосіб передбачає витримування пресованих дріжджів в полісолодовому екстракті протягом ЗО - 45хв при t 28 32°С та впливу на нього електромагнітного поля протягом 10 - 15хв після внесення у середовище перед вживанням розводяться ВІДПОВІДНОЮ КІЛЬКІС ТЮ перекип'яченої води (лактобактерин, колібактерин, біфідобактерин, бюспорин тощо), у капсульованих формах із добавленням деяких амінокислот як стимуляторів росту (йогурт, лінекс, бактісубтіл, біфіформ тощо), у вигляді концентрованого розчину продуктів ЖИТТЄДІЯЛЬНОСТІ різноманітних мікроорганізмів (хілак) Недоліком застосування люфілізованих бактерій є те, що вони розводяться перекип'яченою водою і через 1 5 - 2 0 хвилин вживаються всередину Ці ослаблені бактерії, не встигнувши адаптуватися до середовища, одразу потрапляють в кисле середовище шлунку і масово гинуть Недоліком люфілізованих бактерійних препаратів у флаконах і в кишечнорозчинних капсулах є те, що в кишечник потрапляють бактерії в неактивній формі і до 24 -х годин, а при частих проносах ще швидше, виходять із кишечника, не встигаючи повноцінно колонізувати його слизову Недолік хілаку в тому, що в препараті немає живих бактерій, він тільки сприяє поступовому відновленню власної нормальної кишкової мікрофлори Крім цього, одночасне вживання антибактеріальних засобів різко пригнічуює або й знищує пробютичні мікроорганізми Тому постає питання про пошук активованих форм пробютичні їх препаратів, які б містили достатню КІЛЬКІСТЬ життєздатних мікроорганізмів та корисні продукти їхньої ЖИТТЄДІ 49447 [Патент UA 13426 А, № 95073447, С12С 11/26, опубл 28 02 97, Бюл № 1] Кожен із цих методів забезпечує якісний вихід дріжджевих клітин із стану анабіозу, сприяє перебудові ЖИТТЄДІЯЛЬНОСТІ на бродильний тип, що значно покращує їх ферментативну активність, а в підсумку покращується якість тіста і готової продукції Найближчими аналогами методу є способи виготовлення і застосування кисломолочних продуктів, які містять як живі мікроорганізми (лактобацили, біфідумбактерм тощо), так і продукти їх обміну, наприклад, застосування препарату "Бюлактин" (суміш консорціумів біфідобактерій і лактобактерій ) [Патент UA, 20506 А, № 96125003, кл C12N 1/20, А23С 9/12, опубл 27 02 98 Бюл № 1 ] Методика його застосування полягає в тому, що спочатку із люфілізованого бакпрепарату "Бюлактин" приготовляють закваску t дозу його розчиняють в невеликій КІЛЬКОСТІ стерильного молока при 32 - 34°С, ретельно перемішують і залишають до утворення згустку Готову закваску використовують для виробництва кисломолочного продукту Таким чином, під час приготування закваски відбувається не тільки гідратація висушених бактерій, але їх активація і розмноження, що й призводить до сквашування закваски Готовий кисломолочний продукт містить як життєздатні бактерії так і продукти їх обміну У вказаному продукті є достатньо велика КІЛЬКІСТЬ активних бактерій - 7,2 - 7,8 х 109/см3, що може забезпечити хороший лікувальний ефект Недоліками методу є те, що, по-перше, для активації використовується дороге середовище підрощування - молоко, по-друге, приготування готового високоякісного кисломолочного продукту с технологічно складним і дороговартісним, по третє, це є харчовий продукт, характеристики якого сильно варіюють в залежності від умов і термінів зберігання, по - четверте, він не при всіх захворюваннях шлунково-кишкового тракту може застосовуватися, особливо в гострому періоді хвороби, коли потрібна спеціальна оберігаюча дієта У підґрунтя винаходу поставлена задача створення способу активування офіцинальних препаратів пробютиків, які випущені у вигляді люфілізованих порошків як у флаконах, ампулах чи кишковорозчинних капсулах, шляхом внесення і інкубації їх в поживному середовищі, що дозволить не тільки оживитися бактеріям, але й адаптуватися, розмножуватися, накопичуватися і ферментувати, що в підсумку створить нову якість препарату і забезпечить йому високу фармакологічну активність Вирішується поставлена задача тим, що спосіб активування пробіотичних бактерійних люфілізованих препаратів полягає у витримуванні їх в поживному середовищі - в 5% відварі сушених яблук ( 10,0гр на 200,0мл ) протягом 3 год ЗОхв у термостаті при температурі 37°С, в іншому варіанті витримування провадиться протягом 5 год при кімнатній температурі Зазначена 5% концентрація відвару вибрана тому, що в такому середовищі міститься достатня КІЛЬКІСТЬ ПОЖИВНИХ речовин і забезпечується максимальний ріст бактерій При підвищенні концентрації вище 10% починають проявлятися бактерицидні властивості пектинів, а якщо відвар має менше 5%, то виникає дефіцит пластичного й енергетичного матеріалу необхідного для росту мікроорганізмів Крім того, відвар саме такої концентрації є вживаним в фітотерапевтичній практиці і має задовільні смакові якості Відвар сушених яблук містить глюкозу, фруктозу, сахарозу, пектинові сполуки, вітаміни В, С, РР, каротин, фолієву кислоту, органічні кислоти, помірні КІЛЬКОСТІ натрію, калію, кальцію, магнію, фосфору, заліза та інших мікроелементів (Ф І Мамчур "Овочі І фрукти в нашому харчуванні" Ужгород, "Карпати", 1988р -С 152 - 153, В И Смоляр "Рациональное питание" -Київ, Наукова Думка, 1991 -С 6 2 - 9 9 ) Завдяки доволі високому вмісту цукрів (до 15% ) й забезпечується позитивний вплив на ріст мікроорганізмів Відвар сушених яблук володіє жовчогінними і протизапальними властивостями, регулює тонус гладких м'язів кишок, покращує регенераторні процеси в слизовій оболонці, що в цілому сприяє відновленню нормального біоценозу кишок (Лікарські рослини Енциклопедичний довідник / Відп ред А М Гродзінський -К Голов, ред УРЕ, 1990 -С 1278) Бактерійний препарат, який піддягає активуванню, засівають у співвідношенні - 1 одиниця офіцинального препарату ( капсула, ампула чи флакон ) на 100,0мл вказаного стерильного середовища із дотриманням правил асептики і антисептики Засіяне середовище ставиться в термостат при температурі 37°С на 3 год ЗОхв Обрання зазначеного температурного режиму пов'язане з тим, що бактерії адаптуються до температури тіла людини, яка є також оптимальною для росту всіх пробіотичних мікроорганізмів При температурі 37°С бактерії діляться що - 20 хвилин Перші 20 ЗО хвилин після потрапляння люфілізованих бактерій у водне середовище необхідні для їх гідратації, оживлення та початку ЖИТТЄДІЯЛЬНОСТІ Надалі бактерії починають ділитися Таким чином, за З години відбувається 9 ПОДІЛІВ бактерій, а їхня загальна КІЛЬКІСТЬ зростає приблизно в 500 разів Подібний ефект можна отримати й при кімнатній температурі (20 - 22°С), витримуючи середовища із бактеріями протягом 5 год, що є актуальним в разі відсутності термостату Якщо засівається вміст капсули йогурту чи бактисубтилу ( 2 млрд мікробних тіл), ТО ПІСЛЯ інкубації загальна КІЛЬКІСТЬ бактерій в ЮОмл середовища досягає 1,0 х 10 12 Всі ЦІ бактерії є активно ферментуючими, максимально життєздатними, Збільшення часу інкубації призводить до закислення середовища і сповільнення росту мікроорганізмів, а смакові якості середовища погіршуються Зменшення цього часу зменшує клінічну ефективність препаратів В такій активованій формі препарат рекомендується до вживання один раз на добу після іди Час вживання препарату після іди обґрунтовується тим, що зменшується бактерицидна дія кислого вмісту шлунку, а також продукти ферментативного гідролізу компонентів їжі с добрим поживним середовищем для росту мікроорганізмів Винахід характеризується наступними дослідженнями У ЗО стерильних пробірок із Юмл 5% стериль 49447 них відварів ромашки, кропиви, шипшини, сушених яблук, ізюму ( серія з 5 пробірок містила відвар одного роду ) В зазначені середовища внесено по 0,01мл завису бактерій в концентрації 1млрд/мл офіцинальних препаратів Bacilus Subtuus, Biospormum, Jogurt (тобто в кожну пробірку потрапило 107 бактерій й утворилася концентрація їх 6 10 /мл ) Пробірки поміщені в термостат при температурі 37°С на Згод ЗОхв Після інкубації проведено визначення у кожній пробірці КІЛЬКОСТІ ЖИВИХ мікроорганізмів за методикою Голда Найвища КІЛЬКІСТЬ життєздатних бактерій виявилася у пробірках із фруктовими чи ягідними відварами - яб8 лук, шипшини, ізюму 5 х 10 /мл Дещо менша КІЛЬКІСТЬ бактерій виявилася в пробірках із трав'яними 8 відварами - ромашка, кропива 1 х 10 /мл Паралельно поставлений аналогічний дослід із тими самими середовищами і бактерійними препаратами, але з іншими умовами інкубації - при кімнатній температурі протягом 5 годин Результат повністю відповідав даним у попередньому ДОСЛІДІ у фруктовому чи ягідних відварах КІЛЬКІСТЬ ЖИВИХ бактерій на півпорядка перевищувала ту КІЛЬКІСТЬ, яка спостерігалася в трав'яному середовищі 5 х 10 8 /мл проти 10 8 /мл Причина цього явища цілком зрозуміла - в перших відварах є більше цукрів ( фруктози, глюкози, сахарози), що й забезпечує кращий ріст бактерій Однак трав'яні відвари також можуть служити добрим середовищем для короткочасного підрощування бактерій, оскільки містять деяку КІЛЬКІСТЬ цукристих сполук, а також різноманітні стимулятори росту, так звані пребютики Для активації препаратів пробютиків ми в подальшому застосовували 5% відвар сушених яблук, що пояснюється його доступністю і задовільним смаковим якостям Для визначення антагоністичних властивостей активованих і неактивованих офіцинальних препаратів пробютиків поставлений наступний дослід В серіях пробірок (всього 24) із цукровим бульйоном вносилися по 0,01мл завису бактерій в концентрації 1млрд/мл (тобто в кожну пробірку потрапило 7 10 бактерій одного роду) офіцинальних препаратів Bactius Subtuus, Biospormum, Jogurt, активованих вищезазначеним способом і в ІНШІ пробірки цих же неактивованих бактерій У ці ж пробірки внесено таку ж КІЛЬКІСТЬ бактерій Salmonella Thyphimunum, Stafiloccocus aureus, Proteus vulgans, Pseudomonas aerugmoza у кожну з пробірок по одному роду бактерій Після доби інкубації в термостаті при температурі 37°С визначалась КІЛЬКІСТЬ патогенних бактерій в 1мл середовища за методикою Голда Встановлено, що через добу в пробірках, де внесені були активовані пробютики КІЛЬКІСТЬ патогенних мікроорганізмів була 0 -10 2 /мл , а там де були внесені неактивовані бактерії патогенних було 10 5 - 10 6 /мл Необхідно зазначити, що найбільші антагоністичні властивості виявлено в бюспорину у відношенні до стафілококу (в пробірці, де був одночасно внесений бюспорин і Stafiloccocus aureus, через добу ріст останнього в пробірці відсутній) Аналогічні дані були отримані на щільних живильних середовищах, де одночасно були ЛІНІЙНО ПОСІЯНІ зазначені активовані і неактивовані пробютики та навхрест до них патогенні бактерії Встановлено, що зони просвітлення (відсутній ріст патогенних мікроорганізмів) були тільки на перетині із ЛІНІЄЮ росту активованих пробютиків і не було на перетині з ЛІНІЯМИ росту неактивованих Треба відзначити, що найвищі антагоністичні властивості виявилися в активованого бюспорину - зона просвітлення становила 9 - 10мм, а в препаратів бактисубтилу і йогурту - всього 0,5 - 0,6мм ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71

Дивитися

Додаткова інформація

Назва патенту англійською

Method for activating officinal forms of probiotics

Автори англійською

Hryzhak Ihor Hnatovych, Dykyi Bohdan Mykolaiovych, Voronova Viktoriia Yuriivna, Ostiak Roman Stepanovych

Назва патенту російською

Способ активации официнальных форм пробиотиков

Автори російською

Грыжак Игорь Игнатьевич, Дикий Богдан Николаевич, Воронова Виктория Юрьевна, Остяк Роман Степанович

МПК / Мітки

МПК: A61K 35/74

Мітки: форм, активування, офіцинальних, пробіотиків, спосіб

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/3-49447-sposib-aktivuvannya-oficinalnikh-form-probiotikiv.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб активування офіцинальних форм пробіотиків</a>

Подібні патенти