Спосіб визначення концентрації пентапептидного аналога вазопресину у водному розчині

Використання способу визначення вмісту рибоксину як способу визначення концентрації пентапептидного аналога вазопресину у водному розчині Винахід відноситься до досліджень або аналізу матеріалів, здебільшого шляхом розділення їх на складові частини, і може бути використаним в дослідженнях біохімічних і контрольно-аналітичних лабораторій фармацевтичних підприємств Пентапептидний аналог вазопресину являє нейроростовий фактор ПОСЛІДОВНОСТІ 52-57, що позбавлений феніланшу у 54 положенні Відомий спосіб визначення складу лікарської форми, що включає розділення суміші хроматографічним шляхом, наприклад високоефективною рідинною хроматографією, при кімнатній температурі в градієнтному режимі, з використанням метанолу у фосфатному буфері для регенерації колонки та наступного визначення водорозчинних вітамінів і кальцію пантотенату при довжинах хвиль аналізатора 260 та 210нм, ВІДПОВІДНО, принаймні тричі [1] Особливою характеристикою відомого способу є використання метанолу для визначення концентрації досліджуваних агентів, що сприяє їх розділенню на складові частини Але використання відомого способу дещо викривляє кінцеві результати, особливо при визначенні концентрацій важко ідентифікуємих фракцій, наприклад пентапептидного аналога вазопресину Це зумовлене використанням метанолу, як зайвої домішки, а від того, низькими рівнями екстракції, поляризації, експозиції між періодами утримання виділених фракцій, які погіршують чутливість засобу детектування З рівня техніки, який встановлений заявником, витікає, що капілярний електрофорез [2] є найбільш ефективним шляхом розділення фракцій Але в лабораторній практиці, з-поза специфічності ХІМІЧНИХ сполук, особливо такої, як пентапептидний аналог вазопресину він не застосовувався В основу винаходу поставлено задачу розробити такий спосіб визначення концентрації пентапептидного аналога вазопресину у водному розчині, який шляхом капілярного електрофорезу підвищує чутливість засобу детектування та розширює номенклатуру досліджуваних препаратів при використанні Вищезазначена задача досягається використанням способу визначення вмісту рибоксину вперше як способа визначення концентрації пентапептидного аналога вазопресину у водному розчині, що відповідає критеріям «новизна» та «винахідницький рівень» На фігурі зображена крива, що доводить можливість виділення та визначення концентрації концентрації пентапептидного аналога вазопресину у водному розчині шляхом капілярного електрофорезу Визначення КІЛЬКОСТІ пентапептидного аналога вазопресину у водному розчині здійснюється за умовами Пат №45280 України Спосіб визначення вмісту рибоксину, при його використанні як способа визначення концентрації пентапептидного аналога вазопресину у водному розчині, включає поляризацію проби буферною сумішшю, дегазацію, детектування оптичної ЩІЛЬНОСТІ на заданій хвилі аналізатора, під час міграції ІОНІВ в капілярі, обчислення площини піку на електрофореграмі та аналогово-цифрове перетворення результату в показник КІЛЬКІСНОГО вмісту ю 49752 Буферна суміш утворює форетичне середовище, в якому іонізуються частки пентапептидного аналога вазопресину Поляризація проби активує нейтральні молекули аналізату, сприяє розділенню його складових частин та наступній ідентифікації Дегазація забезпечує безперешкодливе потрапляння часток виділеного агенту до порожнини капіляру Буферизація оптимізує чутливість детектора та запобігає виснаження електроліту При збільшенні присутності буфера в пробі спостерігається зниження чутливості детектора, а при зменшенні - виснаження електроліту, погіршуються заряд форетичного середовища, інтенсивність поляризації часток пентапептидного аналога вазопресину Детектування оптичної ЩІЛЬНОСТІ задається довжиною хвилі аналізатора та має зв'язок із чутливістю ідентифікації проби Реєстрація оптичної ЩІЛЬНОСТІ проби під час міграції активованих молекул до аноду сприяє ідентифікації та визначенню КІЛЬКІСНОГО вмісту, без залучення зайвих домішок Побудова електрофореграми надає змогу розрахувати площину піку вихідного сигналу та визначити концентрацію пентапептидного аналога вазопресину у ваговій формі Тож, при використанні властивостей способу визначення вмісту рибоксину у способі визначення концентрації пентапептидного аналога вазопресину у водному розчині за рахунок виключення зайвих ХІМІЧНИХ домішок у 4-5 разів півищу-ється чутливість, по відношенню до рідинної хроматографії, та поширюється номенклатура досліджуваних препаратів Додатково запропоноване рішення задачі оптимізує ступень екстракції, підвищує рівень поляризації, час експозиції між періодами утримання часток пентапептидного аналога вазопресину у водному розчині, що призводить до зниження викривлення результатів вимірів Визначення вмісту пентапептидного аналога вазопресину у водному розчині здійснюється за умовами Пат №45280 України Приклад Спосіб визначення концентрації пентапептидного аналога вазопресину у водному розчині виконували у наступній ПОСЛІДОВНОСТІ До експериментального водного розчину пен тапептидного аналога вазопресину у співвідношенні 1 1 додавали буфер Під час капілярного електрофорезу нейтральні молекули пентапептидного аналога вазопресину мігрували до аноду крізь капіляр завдяки взаємодій із зарядженими молекулами форетичного середовища За допомогою детектора ідентифікували та реєстрували оптичну ЩІЛЬНІСТЬ пентапептидного аналога вазопресину, а шляхом перетворення отриманих даних в аналоговий сигнал визначали вміст аналізату в пробі Детектування оптичної ЩІЛЬНОСТІ фракцій пентапептидного аналога вазопресину здійснювали при довжині хвилі аналізатора 254нм Протягом експерименту контролювали масштаб електрофореграми, який забезпечив сприйняття замалих концентрацій пентапептидного аналога вазопресину в пробі Програмне забезпечення «Мультіхром» забезпечувало обробку сигналів, побудову електрофореграми, що відбита на фігурі, обчислення площ ПІКІВ виділених фракцій пентапептидного аналога вазопресину і перетворення підсумкового результату у показник їх КІЛЬКІСНОГО вмісту в пробі Залежність часу вихода та значення площини піка від концентрації проби пентапептидного аналога вазопресину свідчить (дивТабл№1), що технологічна чутливість засобу детектування обладнання «Капель-ЮЗР» є сприйнятливою для здійснення способу Тож, на прикладі конкретного використання способу доведена можливість використання капілярного електрофорезу вперше для визначення концентрації пентапептидного аналога вазопресину у водних розчинах із збільшенням чутливості у 4-5 разів, по відношенню до рідинної хроматографії, а в капілярному електрофорезі забезпечено поширення номенклатури досліджуваних препаратів і меж використання прототипу Застосування запропонованого способу науково-дослідними та контрольно-аналітичними лабораторіями фармацевтичних підприємств допоможе досліджувати концентрації фрагментів нейроростового фактору ПОСЛІДОВНОСТІ 52-57, що позбавлений феніланшу у 54-му положенні, з високою імовірністю Отже, запропоноване рішення задачі відповідає умові «промислова придатність» Таблиця №1 Концентрація АВП, мкг/кг 1 25,000 12,500 6,250 3,125 0,600 Час виходу АВП, сек Площа піку, мАи сек 2 337 334 336 334 323 3 1,257 0,540 0,341 0,134 0,074 Джерела інформації 1 Способ определения состава лекарственной формы Заяв 97106926 РФ, МІЖ G01 N33/52 /ТС Малолеткина (РФ) - №97106926/14, Заявл 25 04 97, Опубл 20 04 99 Чутливість визначення, нг/мл 4 20-25 2 Спосіб визначення вмісту рибоксину у водному розчині Пат № 45280 України, МІЖ GO IN 30/00 / О Л Дроздов, Г В Дзяк, О К Вяткш, В П Маматов, В Г Варченко, А М Рудько (Україна) №2001107281, Заявл 25 10 01, Опубл 15 03 02 49752 2.1 fflAU ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71