Спосіб визначення концентрації захищеного гексапептидного n-кінцевого фрагмента аргінін-вазопресину у водному розчині

Використання способу визначення вмісту рибоксину як способу визначення концентрації захищеного гексапептидного N-кшцевого фрагмента арпнін-вазопресину у водному розчині Винахід відноситься до досліджень або аналізу матеріалів, здебільшого шляхом розділення їх на складові частини, та може бути використаним в дослідженнях біохімічних і контрольно-аналітичних лабораторій фармацевтичних підприємств Відомий спосіб визначення складу лікарської форми, що включає розділення суміші хроматографічним шляхом, наприклад високоефективною рідинною хроматографією, при кімнатній температурі в градієнтному режимі, з використанням метанолу у фосфатному буфері при рН7, у наступних співвідношеннях 3% метанол - ЮООмкл, з яких 20мкл застосовують на регенерацію колонки, 10,30 й 40% по 400мкл з наступним визначенням водорозчинних вітамінів при 260нм і кальцію пантотенату при 210нм, щонайменше 3 рази [1] Особливою рисою відомого способу є використання метанолу, що сприяє розділенню фракцій суміші на складові частини Проте використання відомого способу дещо викривляє кінцеві результати, особливо при визначенні концентрацій важко ідентифікуємих фракцій, наприклад захищеного гексапептидного Nкінцевого фрагмента арпнін-вазопресину Необхідність використання метанолу, як зайвої домішки, зумовлює низькі рівні поляризації, екстракції та експозиції розділених фракцій, а від того, погіршує чутливість засобів їх ідентифікації, що викривляє значення дійсної концентрації препарату в розчині З рівня техніки, який встановлений заявником, витікає, що більш ефективним шляхом розділення речовин у розчинах є капілярний електрофорез [2] При цьому, не зважаючи на високу об'єктивність отримання кінцевих результатів, специфічність більшості відомих речовин стримує межі його використання в лабораторній практиці В основу винаходу поставлено задачу розробити такий спосіб визначення концентрації захищеного гексапептидного N-кшцевого фрагмента арпнін-вазоп-ресину у водному розчині, який шляхом капілярного електрофорезу підвищує КІЛЬКІСНИЙ вихід фракції та поширює номенклатуру досліджуваних препаратів при використанні Вищезазначена задача досягається використанням способу визначення вмісту рибоксину вперше як способа визначення концентрації захищеного гексапептидного N-кшцевого фрагмента арпнін-вазопресину у водному розчині, що відповідає критеріям «новизна» та «винахідницький рівень» На фігурі зображена крива, що доводить можливість виділення та визначення концентрації захищеного гексапептидного N-кшцевого фрагмента арпнін-вазопресину у водному розчині шляхом капілярного електрофорезу Визначення вмісту N-кшцевого фрагмента арпнін-вазопресину у водному розчині здійснюється за умовами Пат №45280 України Спосіб визначення вмісту рибоксину, при його використанні як способу визначення концентрації захищеного гексапептидного N-кшцевого фрагмента арп-ншвазопресину (IOS-2703) у водному розчині, характеризується поляризацією проби буферною сумішшю, дегазацією, детектуванням и оптичної ЩІЛЬНОСТІ під час міграції в порожнині капіляру до аноду, отриманням електрофореграми, обчисленням площини піку останньої та перетворенням кінцевого результату в показник КІЛЬКІСНОГО вмісту (21)2002054170 (22) 2 2 0 5 2 0 0 2 ( 2 4 ) 1 6 09 2002 СО Ю 49753 Буферна суміш являє форетичне середовище, в якому іонізуються частки IOS-2703 Поляризація розчину активує нейтральні молекули проби за наявності зв'язків ІЗ зарядженими частками буферу, що сприяє виділенню шуканої складової та и ідентифікації Дегазація забезпечує безперешкодливе потрапляння проби в порожнину капіляру та впливає на зменшення викривлення результатів при визначенні дійсної концентрації аналізату Буферізація проби має зв'язок з оптимізацією чутливості детектора та запобігає виснаження електроліту, бо погіршення як інтенсивності поляризації фракцій IOS-2703, так і заряду форетичного середовища, призводить до викривлення значень дійсної концентрації Реєстрація оптичної ЩІЛЬНОСТІ проби під час міграції и активованих молекул крізь капіляр сприяє ідентифікації та визначенню КІЛЬКІСНОГО вмісту, без залучення зайвих домішок Побудова електрофореграми, що зображена на фігурі, надає змогу провести цифровий облік площини піку та визначити концентрацію IOS-2703 у водному розчині Тож, при капілярному електрофорезі за рахунок виключення зайвої хімічної домішки зростає рівень поляризації важко ідентифікуємих фракцій IOS-2703, оптимізується ступень екстракції, підвищується час експозиції між періодами їх утримання та чутливість детектора, більш за все, на 20-30% збільшується КІЛЬКІСНИЙ вихід аналізату, поширюється номенклатура досліджуваних препаратів ВІДПОВІДНО З винаходом, додатково знижується викривлення результатів, підвищується вірогідність кінцевих результатів, виключаються систематичні й раптові помилки результатів вимірів при використанні Приклад Спосіб визначення концентрації IOS2703 у водному розчині виконували у наступній ПОСЛІДОВНОСТІ До експериментального водного розчину IOS2703 у співвідношенні 1 1 додавали буфер Під час капілярного електрофорезу нейтральні молекули IOS-2703 мігрували до аноду крізь капіляр завдяки взаємодій із зарядженими молекулами форетичного середовища За допомогою детектора ідентифікували та реєстрували оптичну ЩІЛЬНІСТЬ IOS2703, а шляхом перетворення отриманих даних в аналоговий сигнал визначали вміст аналізату в пробі Детектування оптичної ЩІЛЬНОСТІ фракцій IOS-2703 здійснювали при довжині хвилі аналізатора 254нм Протягом експерименту контролювали масштаб електрофореграми, що забезпечило виявлення замалих концентрацій IOS-2703 в пробі Програмне забезпечення «Мультіхром» забезпечувало обробку сигналів, побудову електрофореграми, що відбита на фігурі, обчислення площини піку виділених фракцій IOS-2703 і перетворення підсумкового результату у показник їх КІЛЬКІСНОГО вмісту Час виходу та значення площини піку IOS2703 (див Табл №1), незалежно від концентрації останнього в пробі, дозволяють відзначити прийнятність технологічних можливостей способу визначення вмісту рибоксину для відтворення способу визначення концентрації захищеного гексапептидного N-кшцевого фрагмента арпнінвазопресину у водному розчині на установці «Капель-103 Р» Тож, прикладом конкретного використання доведена можливість застосування капілярного електрофорезу для визначення концентрації захищеного гексапептидного N-кшцевого фрагмента арпнш-вазопресину у водному розчині Використання відомого способу для досліджень цього препарату, наприклад в біохімічних і контрольно-аналітичних лабораторіях фармацевтичних підприємств, у порівнянні з рідинною хроматографією, збільшує КІЛЬКІСНИЙ вихід IOS-2703 більше ніж на 20%, поширює номенклатуру досліджуваних препаратів і межі використання прототипу Отже, запропоноване рішення задачі відповідає умові «промислова придатність» Таблиця №1 Концентрація IOS2703, мкг/кг 1 50,00 25,00 6,25 1,50 Час виходу IOS-2703, сек 2 332 351 350 351 Джерела інформації 1 Способ определения состава лекарственной формы Заяв 97106926 РФ, МПК G01 N33/52/ Т С Малолеткина (РФ) - №97106926/14, Заявл 25 04 97, Опубл 20 04 99 Площа вихідного піку, Ступінь екстракції IOSмАи сек 2703, % 3 2,504 1,800 100 0,236 0,111 2 Спосіб визначення вмісту рибоксину у водному розчині Пат №45280 України, МПК G01N 30/00 / О Л Дроздов, Г В Дзяк, OK Вяткін, В П Маматов, В Г Варченко, А М Рудько (Україна) №2001107281, Заявл 25 10 01, Опубл 15 03 02 49753 ФІГ. ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71