Спосіб скринінгового визначення наявності репараційно-регенеративних властивостей у засобах біогенного синтезу

Спосіб скринінгового визначення наявності репараційно-регенеративних властивостей у засо бах біогенного синтезу шляхом дослідження культури клітин, який відрізняється тим, що як культуру клітин використовують культуру мієлобластів, яку культивують у гомогенній плазмі з додаванням речовин, що досліджуються, протягом 48 годин при температурі 36-37°С, після чого проводять цитологічне дослідження забарвленого мазка і при наявності омолодження культури /"зсув ліворуч"/ констатують у досліджуваних речовинах присутність репараційно-регенеративних властивостей, а при наявності старіння культури /"зсув праворуч"/ констатують відсутність таких властивостей Спосіб стосується біологи й медицини й може бути використаний при масовому визначенні репараційно-регенеративних властивостей у біологічно активних речовинах біогенного синтезу Репараційно-регенеративні засоби посідають чільне місце у випадках терапії травматичнотрофічних ушкоджень шкіри та глибше розташованих тканин Здебільшого традиційні методи визначення цих властивостей пов'язані з моделюванням автологій на експериментальних тваринах з наступним патоморфолопчним та ГІСТОХІМІЧНИМ спостереженням за перебігом репараційнорегенераційного процесу Всі способи моделювання травматично-трофічних ушкоджень мають свої переваги та недоліки, вимагають утримання великої КІЛЬКОСТІ тварин, великих матеріальних витрат, тривалого проведення досліджень /2,5-3 МІСЯЦІ/ Й тому мало застосовуються при масовому скринінговому пошуку /Р Dustm, Les paisons Caruoclasiques, moyen dianalyse cytophsiologi que // Arch Anat Vicrose, 1929, 25 (spes Number) - P32-48/ з цією метою спостерігав за станом клітин лімфоідної системи, вилочкової залози in vivo, AM Brues (The effect of colchi cine on regeneration Lever//) Phisiol 1936, 86, - P63-64) використовував регенеруючі клітини печінки in vivo , Ю О Кірпенко, Л Я, Сіренко, Н І Кірпенко /Влияние метаболитов некоторых водорослей на культуры клеток человека и животных // Альгология 1995| №6,-С 102-105/ використовували культури клітин in vitro з метою пошуку цитостатичних речовин Аналогів заявляемому "Способу " не існує Задачею винаходу є виявлення репаративнорегенератавних властивостей у досліджуваних речовинах швітровими методами без необхідності моделювання травматично-трофічних ушкоджень на експериментальних тваринах Задача досягається тим, що активність речовин біоорганічного синтезу випробовується на культурі клітин МІЄЛОЦИТІВ кісткового мозку цуценят 3 цією метою кістковий мозок цуценят з стегнової кістки нарізають невеликими кубиками /1x1 мм/ й накладають на покрівне скло, занурюють у гомогенну плазму, яка попередньо наливається у В зв'язку з цим пошук швітрових метолів швидкого визначення наявності репарацшнорегенеративних властивостей, особливо при серійних дослідженнях, залишається актуальним і нині Ідея спостереження за процесами поділу окремих клітин при пошуку подібних препаратів здавна ВИКОПИСТОВУЄТЬСЯ дослідниками Так, О ю 00 49859 лунку предметного скла и завойовується по крайкам, щоб запобігти висиханню препарату Підготовлений таким чином препарат вміщують, у термостат, який налагоджено на 37°С, й роблять через 48 годин мазки кісткового мозку і які забарвлюють за Паппенгеймом, Досліджувані речовини вводять безпосередньо у плазму у КІЛЬКОСТІ 1-2 крапель Речовини можна розводити фізіологічним розчином повареної солі до необхідної концентрації, З кісткового мозку однієї стегнової кістки дожне одержати до 500 препаратів Препарати оцінюють у світловому мікроскопі, використовуючи імерсійну систему При цьому, якщо у мазках констатується збільшення КІЛЬКОСТІ ретикулоцитів /міелобластів, проміелоцитів/, тобто "зсув ліворуч", то цей факт свідчить про стимуляцію утворення ретикулоцитів як поліпотентних клітин, з яких утворюються ІНШІ диференційовані клі тини периферийної крові Це, у свою чергу, є свідоцтвом наявності репараційно-регенеративних властивостей у досліджуваних речовинах Це явище пояснюється прикладами виконання у порівнянні з моделюванням ран різного походження Травматичних і трофічних/ на експериментальних тваринах Таким чином, використання культури МІЄЛОЦИТІВ показало повне співпадання результатів стану репараційно-регенеративних властивостей з моделюванням ВІДПОВІДНИХ патолопй Приклад 1 Дія декількох речовин, які мають здатність підсилювати репараційно-регенераційні процеси, на міелограми кісткового мозку цуценят у стані культури Таблиця 1 Клітина кісткового мозку М і ел области М ±м р Проміелоцити М ±м р Мієлоцити -нейтрофільні М ±м Р -еозинофільні м ±м р -базофільні М ±м р Полінуклеари метаміелоцити М ±м р -нейтрофіли м ±м р Еозинофіли М ±м р -базофіли М ±м Р Досліджувані речовини Spirulma platGinseng ensis spirulma 1 1 Ung Algophynum Контроль Ginseng 55,68 7,29 78,53 21,18