Спосіб діагностики різних форм сполучнотканинної дисплазії у юнаків

Спосіб діагностики різних форм дисплазм сполучної тканини у юнаків шляхом використання біохімічних показників обміну сполучної тканини, який відрізняється тим, що при значеннях активності колагенази, вищих за норму, визначають наявність тільки синдрому дисплазм сполучної тканини серця, а при підвищенні активності колагенази, активності еластази та рівня інгібіторів еластази діагностують диспластичні зміни в інших органах і системах Винахід відноситься до медицини, а саме до кардюревматолопі, і може бути використаний для діагностики дисплазм сполучної тканини у ПІДЛІТКІВ чоловічої статі та диференціальної діагностики м форм за ступенем поширеності і можливості несприятливого перебігу Відомий спосіб діагностики дасплазм сполучної тканини шляхом дослідження морфологічного матеріалу, а саме, шкіри, одержаного при опфативних втручаннях (Аналог Шехонин Б В , Семячкина А И, Маккаев X М Колаген І, III, IV, V типов и фибропектин в биотитах кожи больных с синдромом Элерса-Дашюса и cull laxa //Архив патологии 1998 - Т 50 - № 2 - С 41-48) Він дозволяє достатньо точно визначити характер патологічних змін в тканинах Однак, цей метод може використовуватися тільки в спеціалізованих клітках, потребує спеціального обладнання і досить складний у виконанні дрому або хвороби палінових мембран, аспіраційного синдрому або ураження ЦНС - була бронхолегенева дисплазія Недоліком цього способу є відсутність проведення оцінки стану інших сполучнотканинних органів, в результаті якого важливе виникнення поширеності процесу на ІНШІ органи та системи організму Задачею даного винаходу є створення такого способу діагностики, при якому використання біохімічних показників обміну сполучної тканини дало б змогу оцінити стан інших сполучнотканинних органів Ця задача вирішується шляхом визначення в сироватці крові таких показників обміну сполучної тканини, як активність колагенази, активність еластази та рівень інгібіторів еластази Спосіб діагностики, що заявляється, відрізняється від прототипу тим, що використовуючи біохімічні показники обміну сполучної тканини, оцінюють стан інших сполучнотканинних органів Спосіб виконується таким чином В центрифужну пробірку беруть венозну кров хворого в КІЛЬКОСТІ 5мл, центрифугують і відокремлюють сироватку, в якій визначають активність колагенази, активність еластази та рівень інгібіторів еластази Активність колзтенази визначають за методом Сараєва П М з співавторами [2], який являє собою ряд операцій в дослідну і контрольну пробірки вносять по Юмг колагену, 0,5мл буферного розчину кальцію В дослідну пробірку додають 0,5мл охолодженої Найбільш близьким за технічною суттю до способу, що заявляється, є спосіб діагностики синдрому дихальних розладів у немовлят і оцінки його ступеню тяжкості за допомогою дослідження стану системи еластаза-шпбітори в сироватці крові (Прототип Кушнарева М В , Дементьева Г М, Грачева Л В и др Состояние системы эластаза/ігибиторьі у новорожденных с тяжелым синдромом дыхательных расстройств //Пздиатрия 1996 -С 17-19) В даному випадку підставою тяжкого синдрому дихальних розладів у немовлят різного генезу ідюпатичного у вигляді набрякові-легеневого син ю СО Ю сироватки крові і центрифугують при 1000об/хв протягом 5 хвилин вміст пробірок перемішують і інкубують в водяному термостаті при 37 - 38°С на протязі 4-х годин, потім в контрольну пробірку додають 0,5мл охолодженої сироватки в пробірки вносять по 0,5мл трихлорцитової кислоти (ТХО) і 0,5мл хлорної кислоти, перемішують, центрифугують при 3000об/хв протягом 10 хвилин 1мл над осадової рідини переносять в мірні центрифужні пробірки та пдролізують їх в киплячій водяній бані на протязі 40 хвилин охолоджені гідролізати після додавання до них по 1 краплі розчину фенолфталеїну нейтралізують 6М їдким натром до слабо пурпурного окрасу (рН8,0 - 8,4), об'єм гідролізатів доводять до 4мл до проб додають 0,5мл хлораміну, через 4 4,5 хвилини 0,5мл хлорної кислоти, центрифугують при 3000об/хв протягом, 10 хвилин надосадову рідину після додавання до неї реактиву Еріха нагрівають в киплячій водяній бані протягом 120с і через 1 0 - 1 5 хвилин пропускають через фотометр при довжині хвилі 560нм Активність еластази визначають за методом Вереєменко KM [1], який вміщує в собі такі етапи в дослідну та контрольну проби вносять 0,1мл сироватки, 2,7мл 0,1 М трисбуферу (рН8,0) і 0,1 мл хромогенного субстрату сукцинил (аланін)з -пнітроаніліду (САПНА) та інкубують протягом 4-х годин при температурі 37°С, після чого додають 0,1мл льодяної оцтової кислоти (в контрольну - до інкубації") і центрифугують за ЗО хвилин при 5000об/хв в надсодовій рідині визначають оптичну ЩІЛЬНІСТЬ при довжині хвилі 410нм Рівень інгібіторів еластази визначають за методом Веремеєнко KM [1], для чого в ДОСЛІДНІ та контрольні проби вносять 0,10 2мл розведеної в 200 разів сироватки крові, 0,2мл еластази, 2,5 - 2,4мл 0,1 М трис-буфера (рН8,0), витримують 1 0 - 1 5 хвилин при температурі 20 - 22°С, після чого додають 0,1 мл САПНА) і інкубують 15 хвилин при 37°С реакцію зупиняють 0,1 мл льодяної оцтової кислоти (в контрольну пробу льодяну оцтову кислоту додають до САПНА) і визначають оптичну ЩІЛЬНІСТЬ проб при довжині хвилі 410нм При підвищенні активності колагенази у порівнянні з нормою - діагностують тільки синдром дисплазм сполучної тканини серця При підвищенні активності колагенази, активності еластази та рівня інгібіторів еавстазидіагаостують диспластичні зміни в інших органах і системах Приклад 1 Хворий Б-р , 16 років, історія хвороби № 3550/1998р Надійшов зі скаргами на кардіалгм колючого характеру, які підсилювалися при емоціональному та фізичному навантаженні Хворіє близько 2 - 3 років Ранній анамнез без особливостей У матері ішемічна хвороба серця, батько помер у ВІЦІ 50 років від гострого порушення мозкового кровообігу Об'єктивно середнього зросту, астенічної статури Шкіряні покрови звичайного кольору Зів блідий 3 боку кістково-м'язової та бронхолегеневої 51352 систем без особливостей Передсерцева ділянка візуально без змін Межі серцевої тупості у межах вікової норми Тони серця помірно приглушені, на верхівці систолічний клік ЧОС 76 ударів на хвилину AT 110/65мм рт ст Живіт М'ЯКИЙ, безболісний Паренхіматозні органи не пальпуються ФІЗІОЛОГІЧНІ відправлення без особливостей При додатковому обстеженні КЛІНІЧНІ аналізи крові, сечі, показники гострої фази запалення - без патологічних відхилень, ЕКГ - синусова брадикардія (48 ударів в хвилину), неповна блокада правої ніжки п Псу, порушення процесів реполяризацм с явищами гапоксм у зоні верхівки, холшерпчна реакція міокарду, ФКС - тони серця за співвідношенням не змінені, II тон підсилений на легеневій артерії, без чіткої зони оптимуму реєструється полічастотний систолічний шум, Ехо-КЗС - порожнини серця не розширені, міокард лівого шлуночка декілька потовщений Визначаються пролапси 1 ступеню атрювентрикулярних клапанів -протомезосисголичний морального та протосистолічний трикуспідального, в порожнинах шлуночків множинні аберантні хорди (2-у порожнині лівого та 2-у порожнині правого) Скорочувальна здібність задовільна За даними Ro-скопм органів грудної клітини легені без особливостей Декілька збільшений лівий шлуночок, рухомий контур на рівні лівого передсердя За даними біохімічного дослідження активність колагенази 15,9мкмоль/г/л (у порівнянні з нормою 6,9 ± 1,0мкмоль/г/л), еластази 15мкмоль/г/л (у порівнянні з 31,1 ± 2,7мкмоль/г/л), рівень інгібіторів еластази 0,18г/л (у порівнянні з 0,29 ± 0,04г/л) Таким чином, можна припустити наявність у підлітка синдрому диотлазм сполучної тканини серця При проведенні ехосонографм органів черевневої порожнини та огляді ортопеда диоіласшчних змін з боку інших внутрішніх органів та опорно-рухального апарату не встановлено Прикгеут 2 Хворий Б-о, 14 років, історія хвороби №2532/1999 рік Надійшов зі скаргами на кардіалгм стисуючого характеру, цефалгм, підвищену втому, біль та хруст у суглобах верхніх та нижніх КІНЦІВОК Хворіє на протязі декількох років Ранній анамнез не обтяжений, родичі здорові Об'єктивно середнього зросту, правильної статури Шкіряні покрови кистей та стоп бліди, гипотермія та пперпдроз Зів спокійний Суглоби візуально без змін, об'єм рухів збережений у всіх групах, при рухах біль у ДІЛЯНЦІ КОЛІННИХ суглобів, підвищена рухомість надколінків У легенях дихання везикулярне Передсерцева ділянка візуально без змін, межі серцевої тупості в нормі Тони серця помірної звучності ЧОС 68 ударів на хвилину AT 110/бОмм рт ст Живіт М'ЯКИЙ, безболісний Паренхіматозні органи не пальпуються ФІЗІОЛОГІЧНІ відправлення без особливостей При додатковому обстеженні КЛІНІЧНІ аналізи крові, сечі, протешограма, показники гострої фази запалення - без патологічних змін, ЕКГ - синсувий ритм Неповна блокада правої 51352 ніжки п Псу, зниження функціональної здібності При ехосонографм органів черевневої порожміокарду, нини встановлений гіллястий типбудови чашковомисочного комплексу, справа - підозра на подвоФКС - на верхівці знижена амплітуда та розєння нирки, перегиб жовчного міхура щеплений 1 тон Відзначається низькоамплтудний III тон, систолічний екстратон, на верхівці низькоТаким чином, у підлітка мають місце прояви амплітуании полічастотний систолічний шум, системної дисплазм сполучної тканини с ураженням серцево-судинної, гепато-біліарної, сечовидіЕхо-КС - порожнини серця не розширені Відльної систем, опорно-рухального апарату та пезначаються пролапси 1 ступеню атрювентрикуляриферичної судинної системи рних клапанів, на трикуспідальному клапані швидкоскоростна регурптація П ступеню Таким чином, запропонований метод дозволяє проводити діагностику сполучнотканинної дисплаПри біохімічному дослідженні зм у ПІДЛІТКІВ та диференціальну діагностику и активність колагенази 10,6мкмоль/г/л, еластаформ зи 71мкмоль/г/л, рівень інгібіторів еластази 0,53г/л Таким чином, у підлітка з малими структурниСуттєвими ознаками способу є його точність ми аномаліями серця прогнозуються диспластичні та простота виконання Спосіб не потребує спецізміни з боку других органів та систем ального оснащення та апаратури та може застосовуватися в умовах біохімічної лабораторії КЛІНІПри огляді ортопедом встановлена хонромаКИ ляція надколінків, при огляді отоларинголога - покривлення носової перетинки Таблиця Показники активності колагенази, еластази та рівень інгібіторів еластази у юнаків з диоілазією сполучної тканини № 1 2 3 4 5 Групи хворих Контроль С-мДСГС СДСГ-усього СДСТ-1 гр СДСГ-2гр Калагеназа, мкмоль/г/л Еластаза, мкмоль/г/л 6,9 ±1,0 14,3 ±2,5* 13,7 ±1,5*** 15,7 ±3,2* 12,5 ±1,7** 31,1 ±2,7 29,7 ±4,1 58,4 ± 4,7*** 58,1 ±7,4** 58,6 ± 6,4*** Література 1 ІІІехонин Б В , Семячкина А И , Маккаев X М и др Коллаген І, III, IV, V типов и фибронектин в биоптатах кожи больных с синдромом Элерса-Данлосаи cull Іаха //Архив патологии -1988 - Т 50, №12 -С 41-48 2 Кушнарев М В , Дементьева Г М , Грачева ЛВ и др Состояние системы эластаза/ингибиторы у новорожденных с тяжелым синдромом дыхательных расстройств //Пздиатрия Інгібітори еластази, г/л 0,29 ± 0,04 0,23 ± 0,04 0,33 ± 0,03* 0,24 ± 0,04 0,38 ± 0,05** 1996 - № 1 -С 17-19 3 Шараев П Н Определение коллагенолитической активности плазмы крови //Лаб дело 1987 - № 1 -С 60-62 4 Верееменко К Н , Кизим А Н , Терентьев А Г Определение активности эластазы и ее ингибиторов в сыворотке крови с помощью хромогенных субстратов //Клиническая лабораторная диагностика-1992 -№5-6 -С 58-62 ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71