Спосіб визначення рівня загальних глікопротеїнів у сироватці крові

Спосіб визначення рівня загальних глікопротеїнів у сироватці крові за допомогою методу Штейнберга-Доценко, який відрізняється тим, що після приготування гемолізат центрифугують, оптичну густину аналітів вимірюють при довжині хвилі 690 нм, а розрахунок проводять за концентрацією глюкози в ммоль/л. (19) (21) u201003004 (22) 16.03.2010 (24) 25.08.2010 (46) 25.08.2010, Бюл.№ 16, 2010 р. (72) КОЗАР ВАЛЕНТИНА ВІКТОРІВНА, КУДРЯ МАРІЯ ЯКІВНА, УСТЕНКО НОННА ВАСИЛІВНА, ІВАННИКОВА СВІТЛАНА ВАЛЕНТИНІВНА (73) ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "ІНСТИТУТ ПРОБЛЕМ ЕНДОКРИННОЇ ПАТОЛОГІЇ ІМ. В.Я. ДАНИ 3 чна густина розчинів вимірюється на фотоколориметрі з використанням червоного світлофільтра. До недоліків цього способу можна віднести необхідність фільтрації гідролізату та недостатню чутливість, яка спричинена вимірюванням оптичної густини при довжині хвили, що не відповідає максимальному поглинанню розчину. Розрахунок проводиться за концентрацією глюкози у відсотках, що не відповідає стандартним одиницям вимірювань рівня глюкози. Задача корисної моделі - розробка оптимізованого способу визначення рівня загальних глікопротеїнів у сироватці крові. Поставлена задача вирішується тим, що для визначення рівня загальних глікопротеїнів в сироватці крові після приготування гемолізат центрифугують, оптичну густину аналітів вимірюють при довжині хвилі 690нм, а розрахунок проводять за концентрацією глюкози в ммоль/л. Технічний результат - спрощення технології та підвищення чутливості методу визначення рівня загальних глікопротеїнів. У розробленому способі замість фільтрації гемолізату застосовують центрифугування, що зменшує час проведення реакції та мінімізує контакт з досліджуваною сироваткою та хімічними реагентами, оптичну густину розчинів вимірюють при довжині хвилі, при якій, згідно знятого спектру розчину, спостерігали максимальне поглинання; після визначення оптичної густини проб концентрацію аналіту розраховують по стандартним розчинам, використовуючи коефіцієнт регресії. Запропонований спосіб здійснюється таким чином. До 2мл води дистильованої додають 0,1мл досліджуваної сироватки, перемішують ретельно, потім додають 0,5мл ТХО, знову ретельно перемішують, ставлять на киплячу водяну баню на 20 хвилин. Охолоджують під проточною водою протягом 10 хвилин, потім центрифугують 15 хвилин при 3000об/хв. Після цього відбирають у чисту пробірку 1мл центрифугату (гідролізату), додають до нього 3,5мл молібденовокислого реактиву (3мл сірчаної кислоти, х. ч, 87мл води дистильованої, 15мл 10% розчину молібденовокислого амонію на дистильованій воді). Пробу знову ставлять на водяну баню на 20 хвилин. Охолоджують. Вимірюють оптичну густину розчину при довжині хвилі 690нм. Паралельно вимірюють за тих же умов оптичну густину градуювального розчину, утвореного додаванням молібденовокислого реактиву до розчинів глюкози в концентрації від 0 до 111ммоль/л. Розраховують параметри рівняння регресії: Y=A+B X, де Y - оптична густина градуювальних розчинів, Х - концентрація градуювальних розчинів, ммоль/л, А - вільний член, В - коефіцієнт регресії. Рівень загальних глікопротеїнів у пробі, що досліджують, розраховують за рівнянням: X1=(Y1-A)/В де X1 - концентрація досліджуваного розчину, ммоль/л 52500 4 Y1 - оптична густина досліджуваної проби, В - коефіцієнт регресії, розрахований за результатами градуювальних розчинів, А - вільний член, розрахований за результатами градуювальних розчинів. Суть корисної моделі ілюструється прикладом її конкретного застосування. Рівень загальних глікопротеїнів визначали у сироватці крові інтактних щурів. Значення показників знаходилися у межах від 0,440 до 0,547 од. оптичної густини, що відповідало концентрації глюкози 89,8±3,8ммоль/л. За методом Штейнберга-Доценко значення показників оптичної густини знаходилися в межах від 0,412 до 0,588, середній рівень загальних глікопротеїнів відповідав 92,7±3,2ммоль/л. Вірогідна різниця між показниками відсутня. Нормальними показниками рівня загальних глікопротеїнів у людини вважають 55,583,3ммоль/л, що відповідає 0,300-0,400 од. оптичної густини. Використання запропонованого способу для кількісної оцінки рівня загальних глікопротеїнів у сироватці крові є адекватним біохімічним тестом. Джерела інформації: 1. Уайт А., Лендлер Ф., Смит Э, Р. Хилл, И. Леман. Основы биохимии. - М.: Мир,1981. - Т.1-3. 1879с. 2. Luo S.-Z., Mo X., Lopez J. A. , Li R. Role of the transmembrane domain of glycoprotein IX in assembly of the glycoprotein Ib-IX complex // J. Thromb. Haemost. - 2007. - Vol.5, N.12. - P.24942502. 3. Dvorin E. L., Jacobson J., Roth S. J., Bischoff J. Human Pulmonary Valve Endothelial Cells Express Functional Adhesion Molecules for Leukocytes // Heart. Valve. Dis. - 2003. - Vol.12, N.5. - P.617-624. 4. Hosokawa N., Kamiya Y., Kamiya D., Kato K., Nagata K. Human OS-9, a lectin required for glycoprotein endoplasmic reticulum-associated degradation, recognizes mannose-trimmed N-glycans // J. Biol. Chem. - 2009. - Vol.284. - N.25. - P.1706117068. 5. Banerjee S., Vishwanath P., Cui J., Kelleher D. J., Gilmore R., Robbins P. W., Samuelson J. The evolution of N-glycan-dependent endoplasmic reticulum quality control factors for glycoprotein folding and degradation // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 2007. - Vol.104. - N.28. - P.11676-11681. 6. Yuan К., Kucik D., Singh R. K., Listinsky C. M., Listinsky J. J, Siegal G. P.Alterations in human breast cancer adhesion-motility in response to changes in cell surface glycoproteins displaying alpha-L-fucose moieties //Int. J. Oncol. - 2008. - Vol.32. - N.4. P.797-807. 7. Volcik K.A., Ballantyne С.M., Coresh J., Folsom A.R., Boerwinkle E. Specific P-Selectin and P-Selectin Glycoprotein Ligand-1 Genotypes/Haplotypes are Associated with Risk of Incident CHD and Ischemic Stroke: The Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study // Atherosclerosis. - 2007. - Vol. 195. - N.1. - P.e76-e82 8. Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник / Под ред. В. В. Меньшикова. M.: Медицина, 1987. - 368с. 5 52500 9. Камышников В.С. Справочник по клиникобиохимическим исследованиям и лабораторной диагностики - M.: "МЕДпресс-информ", 2004. 920с. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська 6 10. Штейнберг С.Я., Доценко Я.Н. Новый метод определения гликопротеидов в сыворотке и плазме крови // Врачебное дело. - 1962. - №12. С.43-45. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601