Спосіб кристалізації мікроорганізмів

Спосіб кристалізації мікроорганізмів, що включає відтворення фазових переходів на рівні мікробних тіл за умов їх дегідратації у силіконовому середовищі, який відрізняється тим, що силіконовий компаунд герметично нашаровують у вигляді тонкої плівки на попередньо нанесену на предметне скло мікробну колонію, витримують у захищеному від прямих променів світла до моменту кристалізації мікроорганізмів і реєструють світлооптичним методом на принципових засадах поляризованої флуоресценції. (19) (21) u201005314 (22) 30.04.2010 (24) 25.10.2010 (46) 25.10.2010, Бюл.№ 20, 2010 р. (72) ДЕМ'ЯНЕНКО ВАСИЛЬ ВАСИЛЬОВИЧ, ПОКРИШКО ОЛЕНА ВОЛОДИМИРІВНА, САВЧИШИН ВАСИЛЬ ВОЛОДИМИРОВИЧ, СКРАБУТ ВІКТОР БОГДАНОВИЧ (73) ТЕРНОПІЛЬСЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ІМЕНІ І.Я. ГОРБАЧЕВСЬКОГО 3 тивних властивостей живого мікрооб'єкту. Відома прозорість силікону щодо світлових променів, особливо з огляду на планарну конфігурацію мікропрепарату, забезпечує оптимальні умови для світлооптичної мікроскопії препарату. Нарешті власна висока оптична активність силікону, його хвилепровідні властивості як структури з діелектричними рідкокристалічними властивостями [3, 4] складають підґрунтя для розроблення за його участю принципово нових методів подальшого дослідження властивостей кристалізованих мікроорганізмів. З огляду на це, у відомому способі кристалізації мікроорганізмів, що включає відтворення фазових переходів на рівні мікробних тіл за умов їх дегідратації у силіконовому середовищі, відповідно до корисної моделі силіконовий компаунд герметично нашаровують у вигляді тонкої плівки на попередньо нанесену на предметне скло мікробну колонію, витримують у захищеному від прямих променів світла до моменту кристалізації мікроорганізмів, і реєструють світлооптичнм методом на принципових засадах поляризованої флуоресценції. Перелік фігур. Фіг. 1. Поляризована флуоресценція кристалів Escherichia coli (штам К 12) у колонії. МС 200: об.х4; ок.х20 Фіг. 2. Спектральний склад флуоресценції кристалів Escherichia coli. Спосіб здійснюють наступним чином. На чисте знежирене предметне скло в стерильних умовах переносять із твердого живильного середовища мікробну колонію, на яку зверху нашаровують силіконовий компаунд таким чином, щоб він у вигляді плівки герметично закривав колонію грамнегативного мікроорганізму, наприклад Escherichia coli (штам К-12). Мікропрепарат витримують у захищеному від прямих променів світла до моменту кристалізації мікроорганізмів під плівкою, настання якого, зазвичай, упродовж 2-4 міс, реєструють у ході мікроскопічного дослідження за методикою поляризованої флуоресценції. Приклад 1 У стерильних умовах на чисте знежирене предметне скло перенесли з твердого живильного середовища мікробну колонію Escherichia coli, на яку зверху нашарували силіконовий компаунд таким чином, що при розтіканні останній герметично накрив у вигляді полімерної світлопрозорої плівки. Мікропрепарат витримували у захищеному від прямих променів світла упродовж 2 міс - до моменту кристалізації мікроорганізмів, після чого досліджували їх у поляризованому світлі. При цьому реєстрували геометричні форми утворених мікрокристалів, колір і яскравість їх світіння (фіг. 1). Приклад 2. Отримані кристали мікроорганізму в колонії досліджували за методом поляризованої 54095 4 флуоресценції з визначенням спектрального складу випромінювання. З наведеного графіку (фіг. 2) видно три сплески флуоресценції, а саме в ділянці спектру 500-510 нм - найменший за інтенсивністю, та приблизно однакові за інтенсивністю у ділянці спектру 565-590 нм і 620-630 нм. При інтерпретації наведеного спектрального розподілу явно знижену інтенсивність світіння кристалізованої мікробної колонії в близькій до спектру випромінювання ДНК ділянці (500-510 нм), очевидно, слід поставити у зв'язок із гальмуванням вітальних процесів у кристалізованому мікроорганізмі. Двохпіковий характер кривої в області 565-590 нм, очевидно, є відображенням процесу реплікації ДНК внаслідок розрив водневих зв'язків у процесі розплітання подвійної спіралі ДНК з посиленням жовтої і оранжевої складових за рахунок пари аденозин-тимін, а потім гуанін-цитизин — відповідно. Значний за інтенсивністю cплеск кривої в притаманній РНК області (630 нм) можна розглядати як прояв загальної тенденції до зсуву спектру світіння нуклеїнових кислот мікроорганізму в бік з більшою довжиною хвилі відповідно до правила Стокса. З біологічної точки зору наведений зсув є відображенням адаптації мікроорганізму до несприятливо впливу зневоднення внаслідок дегідратації під силіконовою плівкою. Отже, запропонований спосіб забезпечує досягнення вищого, порівняно із способомпрототипом, рівня технологічності процесу кристалізації мікроорганізмів у колонії, і може бути використаний в науково-експериментальній практиці, зокрема при розробці принципово нових біотехнологій. Джерела інформації: 1. Valerio R. F. Matias, Ashraf Al-Amoudi, Jacques Dubochet, and Terry J. Beveridge. CryoTransmission Electron Microscopy of FrozenHydrated Sections of Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa //J Bacteriol. 2003 October; 185(20): 6112-6118. 2. Dewal W., Borschel C, Stichtenoth D., Niermann T. and Ronning С Phase diagram of Si nanowire growth by disproportionation of SiO //Journal of Crystal Growth Volume 312. Issue 10. 1 May 2010, Pages 1751-1754 3. Пат. 42790 UA. Спосіб лабораторної діагностики жирової емболії /Кулянда І. С., Дем'яненко В. В., Савчишин В. В. - № u 2008 15284 від 30.12.2008; опубл. 27.07.2009; Бюл. № 14. 4. Пат.42808 UA. Спосіб моделювання електромагнітної взаємодії в системах міжклітинного взаємозв'язку /Дем'яненко В. В., Покришко О. В., Бігуняк А. В. - № u 2009 00455 від 22.01.2009; опубл. 27.07.2009; Бюл. № 14. 5 Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 54095 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП ―Український інститут промислової власності‖, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601