Спосіб експресного тест-визначення аскорбінової кислоти

Спосіб експресного тест-визначення аскорбінової кислоти, який включає виготовлення тест 3 55028 кількості знаходяться в соках та інших напоях, заважають визначенню АК цим реагентом. Задачею корисної моделі є розробка експресного, селективного, дешевого способу тествизначення АК у широкому інтервалі концентрацій. Задача вирішується способом експресного тест-визначення аскорбінової кислоти, який включає виготовлення тест-смужок іммобілізацією реагенту на целюлозі, і відрізняється тим, що в якості реагенту використовують амонійну сіль 18молібдодифосфату, який закріплюють на папері імпрегнуванням тетраетиламонію бромідом, тестсмужку занурюють у розчин з невідомою концентрацією АК і рН 4-5 на 10-15 сек., витримують 7-10 хв. та порівнюють зі сканованою тестшкалою. Спосіб одержання забарвленої шкали включає імпрегнування паперових смужок в 0,01 М розчині гетерополікомплексу протягом 30-60 хв., а потім у 1 М розчині TEA броміду. 18-МФК є більш сильним окисником, ніж 12-МФК, тому відновлення його АК перебігає швидко при кімнатній температурі. Залежно від концентрації відновника, утворюється два синіх продукти - ГПС-2 при співвідношенні 18МФК : АК = 1 : 1 та ГПС-4 при співвідношенні 1 : 2. Тобто на першій стадії 18-МФК приєднує два електрони, на другій - чотири. Електронні спектри цих комплексів мають інтенсивні смуги поглинання у видимій ділянці спектра. Реакція залежить від рН розчину, оптимальний вихід продуктів реакції спостерігається при рН 4,0, який підтримується додаванням буферного розчину. 4 Виявлено, що на визначення АК не впливають такі відновники, як гідразинсульфат, натрію сульфіт, тіомочевина, Сu2+, парацетамол, нікотинамід; оксикислоти - цитратна, тартратна, оксалатна. Приклад 1. Приготування розчину реагенту. Зважують 0,7855 г (NН4)6Р2Мо18O62.14Н2O, розчиняють у вимірювальній колбі на 25 мл. Одержаний розчин має насичений жовтий колір. Приклад 2. Іммобілізація (NН4)6Р2Мо18O62 на папір. У прямокутній посудині розміщують аркуші щільного фільтрувального паперу (синя стрічка), заливають розчином реагенту і витримують протягом 30-60 хв., висушують на повітрі, занурюють у розчин тетраетиламонію броміду на 10 хв., промивають дистильованою водою та сушать на повітрі протягом доби. Нарізають папір на смужки 0,5 на 4 см. Зберігають тест-смужки в щільно закритій тарі в приміщенні, повітря якого не містить відновників. Приклад 3. Одержання тест-шкали та тествизначення АК. У розчин з певною концентрацією АК (табл.) додають ацетатний буферний розчин з рН 4занурюють на 10-15 сек. тест-смужки, які отримані за умов прикладів 1, 2. Висушують на повітрі протягом 60 хвилин. Одержані смужки запаковують у поліетилен. В таблиці наведена залежність забарвлення тест-смужок від концентрації АК. Для визначення АК тест-смужку після занурення в аналізат необхідно попередньо висушити на повітрі, після чого порівнювати зі шкалою. Час аналізу - близько 30 хвилин. Таблиця Залежність забарвлення тест смужок від концентрації АК Концентрація аскорбінової кислоти, мг/л 0 20 40 80 200 400 Приклад 4. Одержання сканованої тест-шкали для експресного тест-визначення АК. У розчин з певною концентрацією АК (табл.) додають ацетатний буферний розчин з рН 4 занурюють на 10-15 сек. тест-смужки, які отримані за умов прикладів 1, 2. Витримують 5 - 7 хв. та сканують на побутовому сканері зображення вологих смужок. Одержану тест-шкалу друкують на кольоровому принтері, підібравши відтінки за допомогою програм-редакторів зображення, які найбільше відповідають дійсним, увесь час порівнюючи отримані зображення з вологою тест-шкалою. Отримана таким чином тест-шкала може зберігатися набагато довше, ніж шкала, отримана за прикладом 3, та не потребує пакування у поліетилен. На фіг. 1 наведена шкала, одержана за допомогою запропонованої методики. Зліва на право Колір тест-смужки жовтий жовто-зелений зелений зеленувато-блакитний блакитний темно-синій розміщені паперові тест-смужки у порядку зростання концентрації АК від 0 до 400. Як видно з фіг. 1, забарвлення смужок змінюється від жовтого до темно-синього та є доволі контрастним. Для визначення АК в аналіт занурюють тестсмужку на 10-15 сек. та кладуть на рівну поверхню, бажано білого кольору (скло, пофарбоване знизу білою фарбою або покладене на білий папір; аркуш білого паперу, вкладений у канцелярський файл тощо). Витримують 5-7 хвилин та порівнюють (у вологому стані) зі шкалою. Час аналізу - 10 хвилин. Таким чином, дана корисна модель дозволяє отримати тест-смужки для простого, дешевого та експресного напівкількісного визначення аскорбінової кислоти у широкому інтервалі концентрацій. 5 55028 Джерела інформації: 1. Arya S. P., Mahajan M., Jain P. Photometric Methods for the determination of vitamin С // Anal. Sci. - 1998. - V. 14. - P. 889-895. 2. Запорожец О.А., Крушинская Е.А. Определение аскорбиновой кислоты методами молекулярной спектроскопии. // ЖАХ. - 2002. - Т. 57, №4, с. 343-354. 3. Патент США №4303409, 1981 p. Method, composition and test strip for colorimetric analysis of ascorbic acid, Yasunao Ogawa, Kaoru Ishitobi Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 6 4. Патент США №5783150, 1998 p. Test kit for determining the level of ascorbic acid in a patient's body, Alfred B. Ordman 5. Патент США №4152116, 1979 p. Composition and method for the determination of ascorbic acid, Ulfert Deneke, Gerhard Michal, Klaus Beauchamp 6. Патент України № 37588, 2008 р. «Спосіб одержання тест-смужок для візуально-тестового визначення аскорбінової кислоти» Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601