Наномодифіковане поживне середовище для мікроклонального розмноження винограду in vitro

1. Наномодифіковане поживне середовище для мікроклонального розмноження винограду in vitro, що містить макро- і мікроелементи, вітаміни, вуглеводи, фітогормони за прописом Мурасіге і Скуга із зменшеною кількістю макроелементів і вітамінів і з додаванням в її склад індолілоцтової кислоти, яке відрізняється тим, що містить карбоксилати макро- і мікроелементів, отримані взаємодією карбонової кислоти з наночастинками макроі мікроелементів або з наночастинками їх оксидів, або з наночастинками їх гідроксидів. 2. Наномодифіковане поживне середовище для мікроклонального розмноження винограду in vitro за п. 1, яке відрізняється тим, що має наступне співвідношення компонентів, мг/л: 2 (19) 1 3 55234 РЕКОМЕНДАЦИИ ПО КЛОНАЛЬНОМУ МИКРОРАЗМНОЖЕНИЮ ВИНОГРАДА. Ялта. - 1986г. - С. 19-20]. Недоліком даного середовища є використання великої кількості дорогого агару, який буває недостатньо чистим, що призводить до зміни рН середовища. На агаризованому середовищі досить низька приживаність експлантів і недостатньо швидкий їх розвиток. Відоме поживне середовище для мікроклонального розмноження винограду in vitro [Патент України № 47417. ПОЖИВНЕ СЕРЕДОВИЩЕ ДЛЯ ВИРОЩУВАННЯ МІКРОКЛОНІВ ВИНОГРАДУ. МПК A01G 31/00, A01G 17/00. Опубл. 15.07.2002, бюл. № 7], що містить в якості основи поживне середовище Мурасіге і Скуга, сахарозу, вітаміни за Мурасіге і Скуга, фітогормони і загусник, при цьому в якості загусника містить кукурудзяний крохмаль, а в якості фітогормонів - 6-Бензиламінопурин (6БАП). Недоліком відомого поживного середовища є те, що разом з необхідними макро- і мікроелементами в ньому містяться в значній кількості сульфат-, нітрат- і хлорид-іони, що знижує засвоюваність макро- і мікроелементів. Найбільш близьким до пропонованого є модифіковане поживне середовище Мурасіге і Скуга для мікроклонального розмноження винограду in vitro [Патент России № 2264706. СПОСОБ ОПТИМИЗАЦИИ КЛОНАЛЬНОГО МИКРОРАЗМНОЖЕНИЯ ВИНОГРАДА IN VITRO. МПК А01Н4/00, A01N25/00, C12N5/00. Опубл. 27.11.2005], що містить макро- і мікроелементи, вітаміни, вуглеводи, фітогормони за прописом Мурасіге і Скуга із зменшеною кількістю макроелементів і вітамінів і з додаванням в її склад індолілоцтової кислоти і що має наступний склад, мг/л: амоній азотнокислий - NH4NO3 138; калій азотнокислий - KNO3 950; магній сірчанокислий 7-водний MgSO4∙7Н2О 185; калій фосфорнокислий однозаміщений - КН2РО4 68; кальцій хлористий 2-водний – СаСl2∙2Н2О 296; борна кислота - Н3ВО3 6,2; марганець сірчанокислий 4-водний MnSO4∙4H2O 22,3; мідь сірчанокисла 5-водна CuSO4∙5H2O 0,025; кобальт хлористий 6-водний – СоСl2∙6Н2О 0,025; цинк сірчанокислий 4-водний ZnSO4∙4H2О 8,6; натрій молібденовокислий 2-водний Nа2MоО4∙2Н2О 0,25; калій йодистий - KJ 0,86; залізо сірчанокисле 7-водне FeSO4∙7H2O 27,8; трилон-Б - Nа2ЕДТА 37,3; мезоінозит 50; тіамін НСl 0,2; індолілоцтова кислота (ІОК) 0,1-3; вода до 1л. 4 Недоліком відомого поживного середовища є те, що разом з необхідними макро- і мікроелементами в ньому містяться в значній кількості сульфат-, нітрат- і хлорид-іони, що знижує засвоюваність макро- і мікроелементів. В основу корисної моделі поставлена задача підвищення ефективності поживного середовища. Запропоноване, як і відоме поживне середовище для мікроклонального розмноження винограду in vitro містить макро- і мікроелементи, вітаміни, вуглеводи, фітогормони за прописом Мурасіге і Скуга із зменшеною кількістю макроелементів і вітамінів і з додаванням в її склад індолілоцтової кислоти і, відповідно до цієї пропозиції, містить карбоксилати макро- і мікроелементів, отримані взаємодією карбонової кислоти з наночастинками макро- і мікроелементів, або з наночастинками їх оксидів, або з наночастинками їх гідроксидів. При цьому має наступне співвідношення компонентів, мг/л: Амоній азотнокислий 820 Калій азотнокислий 950 Калій фосфорнокислый однозаміщений 68 Борна кислота 6,0-10 Калій йодистий 0,83 Індолілоцтова кислота 0,1-3 6-Бензиламінопурин (6-БАП) 0,8-1,0 Мезоїнозіт 50-120 Тіамін хлорид 0,2-5 Піридоксин хлорид 1-5 Нікотинова кислота 1 Кукурудзяний крохмаль 65000-75000 Сахароза 15000-17000 Карбоксилат калію 100-1000 Карбоксилат кальцію 50-600 Карбоксилат магнію 40-500 Карбоксилат марганцю 2-100 Карбоксилат цинку 0,5-100 Карбоксилат міді 0,001-0,1 Карбоксилат заліза 3-100 Карбоксилат кобальту 0,001-0,1 Карбоксилат молібдену 0,001-1 Вода до 1л Наномодифіковане поживне середовище для мікроклонального розмноження винограду in vitro містить карбоксилати макро- і мікроелементів, отримані взаємодією карбонової кислоти з наночастинками макро- і мікроелементів, або з наночастинками їх оксидів, або з наночастинками їх гідроксидів. Це підвищує ефективність поживного середовища за рахунок зменшення кількості нітрат- сульфат- і хлорид-іонів без зниження кількості необхідних макро-і мікроелементів. Наномодифіковане поживне середовище для мікроклонального розмноження винограду in vitro має наступне співвідношення компонентів, мг/л: Амоній азотнокислий 820 Калій азотнокислий 950 Калій фосфорнокислый однозаміщений 68 Борна кислота 6,0-10 Калій йодистий 0,83 Індолілоцтова кислота 0,1-3 6-Бензиламінопурин (6-БАП) 0,8-1,0 5 55234 Мезоїнозіт 50-120 Тіамін хлорид 0,2-5 Піридоксин хлорид 1-5 Нікотинова кислота 1 Кукурудзяний крохмаль 65000-75000 Сахароза 15000-17000 Карбоксилат калію 100-1000 Карбоксилат кальцію 50-600 Карбоксилат магнію 40-500 Карбоксилат марганцю 2-100 Карбоксилат цинку 0,5-100 Карбоксилат міді 0,001-0,1 Карбоксилат заліза 3-100 Карбоксилат кобальту 0,001-0,1 Карбоксилат молібдену 0,001-1 Вода до 1л При вмісті компонентів менше нижніх меж знижується ефективність поживного середовища. Вміст компонентів більше верхніх меж призводить до його дорожчання і до перевищення кількості необхідних макро- і мікроелементів, що також знижує ефективність поживного середовища. Приклад. Наномодифіковане поживне середовище для мікроклонального розмноження винограду in vitro отримують таким чином. Спочатку отримують колоїдний розчин наночастинок макроі мікроелементів. Колоїдний розчин наночастинок отримують, наприклад, електроімпульсною абляцією металевих гранул у воді [див. патент України № 37412. СПОСІБ ОТРИМАННЯ ЕКОЛОГІЧНО ЧИСТИХ НАНОЧАСТИНОК ЕЛЕКТРОПРОВІДНИХ МАТЕРІАЛІВ «ЕЛЕКТРОІМПУЛЬСНА АБЛЯЦІЯ» МПК B01J 2/02. Опубл. 25.11.2008. Бюл. № 22]. Отримані нано- і мікрочастинки володіють високою екологічною чистотою і не містять домішок хімічних речовин. Потім отримують карбоксилати макро- і мікроелементів. Для цього у водний колоїдний розчин, Комп’ютерна верстка А. Крижанівський 6 що містить наночастинки металу, оксиду металу, гідроксиду металу додають карбонову кислоту, наприклад, лимонну кислоту. За рахунок високої хімічної активності наночастинок здійснюється утворення карбоксилатів металів. Оскільки до числа реагентів не входять ніякі інші речовини, а наночастинки практично повністю беруть участь в хімічній реакції утворення солей карбонових кислот, то утворюється продукт високої екологічної чистоти [див. патент України на корисну модель № 39397. НАДЧИСТИЙ ВОДНИЙ РОЗЧИН НАНОКАРБОКСИЛАТУ МЕТАЛУ. МПК (2006): С07С 51/41, C07F 5/00, C07F 15/00. Опубл. 25.02.2009, бюл. № 4/2009]. Потім готують поживне середовище, для чого в реактор з мішалкою вносять розчини, дотримуючи наступного порядку: - розчин солей макроелементів; - карбоксилати макроелементів; - карбоксилати мікроелементів; - розчин сахарози; - вітаміни, фітогормони; - крохмальний розчин. Для приготування середовища готують концентрат макроелементів, при цьому кожна з макросолей розчиняється послідовно в невеликій кількості води. Потім до отриманої суміші додають карбоксилати макроелементів, карбоксилати мікроелементів, сахарозу, вітаміни, фітогормони і всі ретельно перемішують. Після цього проводять желювання кукурудзяним крохмалем. Розчин доводять дистильованою водою до 1 л. Суміші ретельно перемішують протягом 5 хвилин, потім 1-2 хвилини ведуть вертикальне перемішування шляхом барботажу при включеній мішалці. Відбирають контрольні проби для визначення рН середовища. рН середовища складає 5,6-5,8. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601