Спосіб одержання препарату природного сурфактанта легенів із легенів тварин

1 Спосіб одержання препаратів природного сурфаісганта легенів із легенів тварин, який включає обробляння тканин легенів фізіологічним розчином із подальшим його поетапним центрифугуванням, на першому етапі - при прискоренні 1000-1200 g протягом 0,5-1 години, на другому, після суспендування осаду в 20% розчині хлористого натрію густиною 1,15 г/мл, - при прискоренні 1400-1500 g протягом 20 хв, розфасування одержаного препарату в лікарські форми та його стерилізацію в ультрафіолетовому СВІТЛІ, який відрізняється тим, що вихідний матеріал перед оброблянням фізрозчином подрібнюють, його обробляння фізрозчином здійснюють шляхом витримування протягом 2-4 годин із розрахунку 3-5 мл розчину на 1 г тканини подрібненого матеріалу, а після його обробляння фізрозчином - фільтрують без тиску, після чого фільтрат, який містить фосфоліпіди, заливають сумішшю хлороформ-метанолу, у співвідношенні 1,8-2,2 1 із розрахунку 1,6-2,4 мл суміші на 1 г осаду, та видержують протягом доби, після чого верхню частину розчину, що містить метанол, вилучають, а нижню, хлороформову частину заливають 0,62-0,66 % розчином хлористого калію на 22-26 годин, потім верхню частину розчину вилучають, а нижню - висушують у парах рідкого азоту у вакуумі - 0,9-1,1 атм, і одержану таким чином речовину фосфоліпідів шляхом ультразвукової кавітації розчиняють у фізрозчині, після чого одержаний продукт розфасовують і стерилізують в ультрафіолетовому СВІТЛІ 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що розчинення речовини фосфоліпідів у фізрозчині здійснюють у пропорції 20-30 мг на 1 мл розчину і одержану емульсію, після розфасування і перед стерилізацією, піддають леофілізацм до утворення порошкоподібної речовини 3 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що розчинення речовини фосфоліпідів у фізрозчині здійснюють у пропорції 60-80 мг на 1 мл розчину (О Винахід відноситься до медицини і може бути застосованим у фармації, акушерстві, неонаталогм, пульмонології Найбільш близьким до запропонованого за сукупністю ознак є спосіб одержання препарату природного сурфактанта легенів із легенів тварин за [1] Згідно З ЦИМ способом на початковій стадії здійснюють лаваж вихідних легень шляхом їх (3 4) разового промивання фізіологічним розчином Потім лаважну рідину послідовно центрифугують, спочатку при прискоренні (1000 - 1200)д протягом (0,5 -1) години, потім, після суспендування осаду у фізіологічному розчині, при прискоренні (1400 1500)д протягом 20 хвилин Потім препарат природного сурфактанта відокремлюють і добавляють до нього фізіологічний розчин у співвідношенні 1 (3 - 5), після проводять його очищення шляхом діалізу з дистильованою водою Після ЦЬОГО ЗДІЙСНЮЮТЬ леофілізацію діалізату у вакуумі при температурі не менш - 50°С до одержання абсолютно сухого порошкоподібного препарату білого кольору, котрий після розфасовки піддають стерилізації в ультрафіолетовому СВІТЛІ протягом не менш 6 годин Препарат, який одержують за цим способом, має високий ступінь чистоти Але відомий спосіб має недолік, зв'язаний з тією обставиною, що контакт лаважної рідини з необхідними тканинами легень може бути досягнутим тільки з невеликою КІЛЬКІСТЮ внутрішньолегеньового сурфактанта через те, що в альвеолах легень знаходиться повітря, яке заважає цьому контакту Крім того, лаважна техніка не дозволяє витягнути ю 56122 сурфактант, що знаходиться усередині клітин, повнішої екстракції корисних речовин, оскільки оскільки лаважна рідина не може проникнути поверхня контакту між подрібненими частинками усередину клітин без їх розруйновування вихідного матеріалу та рідиною, що з ним Наслідком цього є низький ступінь виходу контактує, збільшується на порядок, тому що препарату - від 3,6 до 3,8мг сурфактанта на 1кг здійснюється повною мірою як на міжклітинному, вихідних легень так і внутрішньоклітинному рівні Тим самим вихід препарату збільшується з 3,6 - 3,8мг на 1 кг Задачею винаходу є запропонування способу вихідного матеріалу в способі - прототипі до 45 одержання препарату природного сурфактанта 50мг на 1 кг у запропонованому способі легенів із легенів тварин, при якому якість, тобто Забруднення речовини частинками крові, плівки і ступінь чистоти, одержаного препарату не т п , яке є наслідком роздрібнення вихідного поступається перед відомим способом, але ступінь матеріалу, усувається її свободною, без тиску, виділення сурфактанта з масооб'ємної одиниці фільтрацією, очищенням активного вихідних легень є значно більшим Для рішення поставленої задачі в способі фосфоліпідного компоненту сурфактанта за одержання препарату природного сурфактанта рахунок оброблення одержаної після легенів із легень тварин, який включає обробляння центрифугування субстанції хлороформотканин легень фізіологічним розчином із метаноловою сумішшю, а в подальшому подальшим його поетапним центрифугуванням, на розчином хлористого калію Послідуюча за першому етапі - при прискоренні (1000 - 1200)д видаленням залишків хлороформу у рідкому азоті протягом (0,5 - 1) години, на другому, після ультразвукова кавітація дозволяє одержати стійку суспендування осаду в 20% розчині хлористого емульсію фосфоліпідів у фізрозчині з розміром натрію густиною 1,15г/мл, - при прискоренні (1400 частинок не більш 25мкм У результаті сукупність 1500)д протягом 20 хвилин, розфасування вказаних операцій дозволяє отримувати препарат одержаного препарату в лікарські форми та його із ступенем чистоти не меншим за спосібстерилізацію в ультрафіолетовому СВІТЛІ, прототип ВІДПОВІДНО до винаходу вихідний матеріал перед Приклад конкретного виконання оброблянням фізрозчином подрібнюють, його Легені свині безпосередньо після забою обробляння фізрозчином здійснюють шляхом здрібнювали в електром'ясорубці, заливали витримання протягом (2 - 4) годин із рахунку (3 фізрозчином із рахунку 4мл розчину на 1г легені 5)мл розчину на 1г тканини подрібненого Через 3 години одержану завись фільтрували без матеріалу, а після його обробляння фізрозчином тиску через 6 шарів медичної марлі Одержаний фільтрують без тиску, після чого фільтрат, який розчин центрифугували при прискоренні 1100д містить фосфоліпіди, заливають сумішшю протягом однієї години для осадження хлороформ-метанол, у співвідношенні (1,8 - 2,2) 1 фосфоліпідів сурфактанта та дрібнодисперсних із рахунку (1,6 - 2,4)мл суміші на 1г осаду, та білків Рідину над осадом видалили, а осад видержують протягом (22 - 26) годин Після цього суспендували у 20%-ному розчині NaCI гущиною верхню частину розчину, що містить метанол, 1,15г/мл і центрифугували при прискоренні 1500д вилучають, а нижню, хлороформову, частину, протягом 20 хвилин для розділення білкових та заливають (0,62 - 0,66)% розчином хлористого фосфоліпідних фракцій При цьому фракція калію на (22 - 26) години Потім верхню частину фосфоліпідів здіймалась на поверхню розчину у розчину вилучають, а нижню - висушують у парах вигляді білувато-жовтої плівки Потім рідкого азоту у вакуумі при -(0,9 - 1,1) атм фосфоліпідну фракцію відсмоктували піпеткою та Одержану таким чином речовину фосфоліпідів заливали хлороформо-метаноловою (21) шляхом ультразвукової кавітації розчинюють у сумішшю з розрахунку 20мл суміші на 1 мл фізрозчині, після чого одержаний продукт фосфоліпідної фракції та відстоювали 24 години розфасовувають і стерилізують в У результаті відстоювання розчин розділився ультрафіолетовому СВІТЛІ на 2 фракції верхю (метанолову), яка містила білкові компоненти, та нижню (хлороформову) При цьому, якщо необхідно одержати сурфактант легень Верхню фракцію видаляли, а препарат "Сукрим" (назва створена із скорочення нижню заливали 0,64%-ним розчином КСІ на 24 слів Су - сурфактант, крим - Крим як географічна години Потім верхню частину одержаного розчину назва Автономної Республіки Крим), розчинення видалили, а нижню частину розчину хлороформа речовини фосфоліпідів у фізрозчині здійснюють у сурфактанта висушували в парах рідкого азоту в пропорції (20 - 30)мг на 1 мл розчину, і одержану умовах вакууму - 1атм для видалення розчинника емульсію, після розфасування і перед стерилізацією, піддають леофілізацм до Одержану речовину, яка містила у собі одержання абсолютно сухої порошкоподібної очищений сурфактант легень, діспергували в речовини фізрозчині шляхом ультразвукової кавітації При цьому, залежно від того, який препарат, "Сукрим" При необхідності одержання препарату або "Сузакрин", було необхідно одержати, "Сузакрин" (назва створена із скорочення слів Су співвідношення речовини із сурфактантом і сурфактант, за - Загорулько - прізвище автора, кри фізрозчину приймали різне, а саме для "Сукрима" - Крим як географічний об'єкт, н - Новіков, - 25мг речовини на 1 мл фізрозчину, для прізвище одного із співробітників лабораторії) "Сузакрин" - 70мг речовини на 1 мл фізрозчину розчинення речовини фосфоліпідів у фізрозчині здійснюють у пропорції (60 - 80)мг на 1 мл розчину Далі, при необхідності одержати "Сукрим", після кавітації речовину розфасовували по 2,15мл Подрібнення вихідного матеріалу та його в ампули ємністю 5мл і піддавали леофільній витримування у фізрозчині сприяють набагато 5 56122 сушці до одержання абсолютно сухої порошкоподібної речовини білувато-жовтого кольору Ампули укупорювали і стерилізували в ультрафіолетовому СВІТЛІ протягом 24 годин Для одержання "Сузакрину" речовину після кавітації розфасовували по 7,5мл у флакони ємністю Юмл, флакони укупорювали та піддавали стерилізації в ультрафіолетовому СВІТЛІ протягом 24 годин