Спосіб діагностики запалення в респіраторному тракті у працівників металургійної промисловості

Спосіб діагностики запалення в респіраторному тракті у працівників металургійної промисловості шляхом дослідження біологічного матеріалу з респіраторного тракту, який відрізняється тим, що як біологічний матеріал з респіраторного тракту використовують конденсат повітря, видихуваного на поверхню охолодженої чашки Петрі, і визначають вміст нітрит-юнів після конверсії нітрат-юнів у нітрит-юни за допомогою металевого кадмію та діагностують запалення в респіраторному тракті при ВМІСТІ нітрит-юнів більшому ніж 2,48мкМоль/л Винахід стосується медицини, а саме лабораторної діагностики і може бути використаний для діагностики запалення в респіраторному тракті у працівників металургійної промисловості Значне збільшення КІЛЬКОСТІ хронічних обструктивних захворювань легень, серед яких переважає хронічний обструктивний бронхіт, стало причиною пильної уваги лікарів різних спеціальностей Ця медична проблема ускладнюється і соціальною проблемою росту професійної захворюваності обструктивними захворюваннями легень, зокрема хронічним пиловим бронхітом, який займає одне з перших місць за розповсюдженістю на крупних підприємствах металургійної промисловості У зв'язку з цим, невідкладною проблемою є розробка точних способів діагностики запалення в респіраторному тракті у працівників металургійної промисловості, що дозволить своєчасно провести необхідну терапію та у більшості випадків запобігти появі небезпечних ускладнень Велика імовірність виникнення різних ускладнень пов'язана з неточною та несвоєчасною діагностикою запалення, що в підсумку приводить до росту інвалідизацм та смертності серед населення Тому дуже актуальним є пошук надійних маркерів, які дозволили б точно діагностувати запалення в респіраторному тракті у працівників металургійної промисловості лаваж зі збором бронхоальвеолярного змиву стандартним способом 2 Досліджують відносний вміст альвеолярних макрофагів серед інших клітинних елементів у складі бронхоальвеолярного змиву 3 Діагностують запалення респіраторного тракту у працівників металургійної промисловості, при рівні альвеолярних макрофагів у складі бронхоальвеолярного змиву від 76,2% і більше (Артюнина Г П , Рочева И И , Лештаева Н Р и др Заболевания респираторной системы у работающих в производстве никеля, кобальта, меди /Медицина труда и промышленная экология 1998,-№11,-С 32-35) Суттєвими ознаками прототипу і винаходу, що збігаються є такі 1 Дослідження біологічного матеріалу з респіраторного тракту Спосіб діагностики запалення в респіраторному тракті у працівників металургійної промисловості за даними дослідження бронхоальвеолярного змиву є достатньо інформативним, дозволяючи оцінити зміни клітинної ланки місцевої неспецифічної резистентності Разом з тим даному способу притаманний значний суб'єктивізм, через те, що процедура проведення бронхоскопії є значною мірою нефізюлопчною і спричиняє стресорну дію на клітини респіраторного тракту Таким чином, сама процедура бронхоскопії здатна привести до змін клітинного складу порожнини і слизової оболонки респіраторного тракту Крім того, точність і відтворюваність вказаного способу Відомий спосіб діагностики запалення в респіраторному тракті у працівників металургійної промисловості, що полягає у наступному 1 Хворому проводять бронхоальвеолярний (О о> 00 00 ю 58896 діагностики запалення респіраторного тракту у працівників металургійної промисловості залежить від техніки проведения бронхоскопії і досвіду лікаря Таким чином, визначення відносної КІЛЬКОСТІ альвеолярних макрофагів у складі бронхоальвеолярного змиву не дає змоги достовірно і точно діагностувати запалення респіраторного тракту, а значна доля суб'єктивних факторів, заважає достатній відтворюваності результатів дослідження В основу винаходу поставлено задачу удосконалення діагностики запалення в респіраторному тракті у працівників металургійної промисловості, шляхом дослідження зразка іншого біологічного матеріалу з респіраторного тракту, що дозволить підвищити точність, достовірність та відтворюваність результатів дослідження Поставлене завдання вирішується тим, що в способі діагностики запалення в респіраторному тракті у працівників металургійної промисловості, шляхом дослідження біологічного матеріалу з респіраторного тракту, новим є те, що в якості біологічного матеріалу з респіраторного тракту використовують конденсат повітря, видихаємого на поверхню охолодженої чашки Петрі, і визначають вміст нітрит-юнів, після конверсії нітрат-юнів у нітрит-юни за допомогою металевого кадмію та діагностують запалення в респіраторному тракті при ВМІСТІ нітрит-юнів більшому ніж 2,48мкМоль/л Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом, що досягається, полягає у наступному для діагностики запалення у респіраторному тракті визначають вміст кінцевих метаболітів оксиду азоту нітрит- і нітрат-юнів у конденсаті видихаємого повітря Діагностика запалення в респіраторному тракті у працівників металургійної промисловості за вмістом кінцевих метаболітів оксиду азоту актуальна для даної категорії людей через те, що дозволяє швидко, а головне достовірно і точно проводити моніторинг стану респіраторного тракту Відомо, ЩО рівень вказаних кінцевих метаболітів оксиду азоту в організмі прямо пропорційний продукції оксиду азоту, який у великій КІЛЬКОСТІ продукується клітинами неспецифічного захисту при запальних процесах Збільшення продукції оксиду азоту у конденсаті видихаємого повітря, яке спостерігається у хворих з обструктивними захворюваннями респіраторного тракту, пов'язане з експресією індуцибельної ізоформи синтази оксиду азоту і є показником розвитку запального процесу Індукторами експресії даної ізоформи синтази оксиду азоту клітинами респіраторного тракту є бактеріальні ліпополісахариди та прозапальні цитокіни При цьому, інтенсивність продукції оксиду азоту залежить виключно від розвитку запалення респіраторного тракту Оксид азоту є важливим внутрішньоі МІЖКЛІТИННИМ посередником здійснення таких життєво важливих функцій, як регуляція функціонального стану епітелію і гладенько-м'язових клітин респіраторного тракту, шляхом модуляції активності гуанілатциклази, потужна мікробіцидна активність та здатність регулювати функціонально-метаболічний стан клітин неспецифічного захисту Неповний перелік проявів функціональної активності оксиду азоту, вказає на ДОЦІЛЬНІСТЬ визначення його рівня у конденсаті видихаємого повітря для діагностики запалення респіраторного тракту Відомо, що конденсат видихаємого повітря, крім розчинених летючих сполук, містить також білкові молекули (адренокортикотропний гормон, кортизол та ш), які можуть зменшити відновлювальну здатність гранул металічного кадмію Тому процедура проведення депротеїнізацм конденсату видихаємого повітря є важливим етапом при визначенні рівня кінцевих метаболітів оксиду азоту в організмі Так само важливим етапом є конверсія нітрат-юнів у нітритюни Визначення лише рівня нітрит-юнів не дає змоги точно і достовірно оцінити продукцію оксиду азоту в організмі людини, через те, що значна частина нітрит-юнів окислюється далі до нітрат-юнів У зв'язку з цим необхідно проводити конверсію нітрат-юнів до нітрит-юнів за допомогою гранул металевого кадмію Таким чином, дослідження рівня продукції оксиду азоту за вмістом кінцевих метаболітів його у конденсаті видихаємого повітря, з обов'язковим проведенням додаткових етапів лабораторного дослідження депротеїнізацм досліджуваного зразка та конверсії нітрат-юнів до нітрит-юнів у ньому, дозволить значно підвищити точнисть, достовірність та відтворюваність способу діагностики запалення респіраторного тракту Для визначення показника норми, нами було обстежено 40 практично здорових осіб Серед обстежених були представлені різні ВІКОВІ групи (згідно рекомендацій ВОЗ), середній вік склав 34,7+42,3 роки, жінок було 14 (35%), ЧОЛОВІКІВ 26 (65%) Після обчислення результатів обстеження групи здорових осіб, вміст нітрит-юнів в конденсаті видихаємого повітря склав 2,47 10,01 мкМ Крім того, було обстежено 78 працівників металургійного підприємства, хворих на хронічний пиловий бронхіт та встановлено, що у хворих з цією потолопєю рівень нітрит-юнів знаходився в межах 2,48-5,37м кМ Спосіб здійснюється таким чином 1 Отримують зразок конденсату видихаємого повітря, шляхом видихання на поверхню охолодженої чашки Петрі впродовж 5 хвилин з середньою частотою (16 -18 за хвилину) При цьому вдихання і видихання повітря здійснюється через рот 2 Проводять депротеїнізацію конденсату видихаємого повітря, для чого змішують 50мкл отриманого конденсату видихаємого повітря з розчинами сульфату цинку (кінцева концентрація 0,4%) та гідроксиду натрію (кінцева концентрація 27,5мМ) 3 Реакційну суміш ретельно перемішують 4 Центрифугують 20 хвилин при 3000об/хв 5 Відбирають депротеїнізовану надосадову рідину для подальшого аналізу 6 До 0,25г гранул металевого кадмію додають 0,5мл сірчаної кислоти 7 Гранули ретельно суспендують 8 Центрифугують 1 хвилину при 1500об/хв 9 Надосадову рідину відбирають 10 До осаду гранул кадмію додають дистильованої води і відмивають гранули шляхом центрифугування протягом 1 хвилини при 1500 об/хв 11 Процедуру відмивання гранул кадмію проводять тричі дистильованою водою і один раз 58896 0,2М гліцин-пдроксид натрію буферним розчином (рН-9,7) 12 Після останнього відмивання, надосадову рідину повністю відбирають 13 Конвертують нітрат-юни у нітрит-юни, для чого до гранул кадмію додають депротеїнізовану надосадову рідину досліджуваної проби 14 Додають 80мкл 0,6М гліцин-пдроксид натрію буферного розчину (рН-9,7) 15 Інкубують реакційну суміш 20 хвилин при кімнатній температурі (22°С) 16 Центрифугують реакційну суміш 1 хвилину при 1500об/хв 17 До надосадової рідини об'ємом 200 мкл, додають реактив Gness у співвідношенні 2 1 18 Інкубують суміш 15 хвилин при кімнатній температурі (22°С) 19 Реєструють оптичну ЩІЛЬНІСТЬ інкубаційної суміші при 540нм, за допомогою фотоелєктроколориметричного рідера 20 Визначають вміст нітрит-юну по калібровочніи кривій стандартним способом 21 Діагностують запалення в респіраторному тракті у працівників металургійної промисловості при рівні нітрит-юнів більшому ніж 2,48мкМ Приклад Хворий Б 45 років, працівник крупного металургійного підприємства, надійшов у профпатолопчне відділення Запорізької обласної клінічної лікарні зі скаргами на кашель з гнійним харкотинням, слабкість, СПІТНІЛІСТЬ, головний біль, утруднене дихання, задуху у спокої та при найменшому фізичному навантаженні, сухий кашель, збільшення температури до 38,8°С Вказані ознаки порушення функції дихання з'явились вперше За три дні до надходження в клініку, після перенесеної гострої респіраторної вірусної інфекції, з'явилися вищезазначені скарги, виникнення яких хворий пов'язує із значним переохолодженням Анамнез життя - без особливостей, спадкової патологи в родині не виявлено 3 1982 року і до теперішнього часу працює різчиком металу, де піддається впливу шкідливих професійних факторів (пил, випромінювання, загазованість) Пацієнт палить впродовж 10 років, ІНШІ ШКІДЛИВІ звички заперечує, алергологічний анамнез не обтяжений Об'єктивно спостерігаються наступні зміни Задуха в спокої Шкіра та видимі злизові оболонки бліді, акроцианоз, на обличчі дифузний цианоз При пальпації верхівний поштовх відзначається на 2-2,5см вліво від середньоключичної лінії з лівого боку в 5 міжребір'ї, поширений, збільшений по висоті, посилений Перкуторно над всією поверхнею легенів легеневий звук з тимпаничним та коробковим ВІДТІНКОМ, аускультативно - дихання жорстке, велика КІЛЬКІСТЬ Комп'ютерна верстка Н Лисенко розсіяних сухих та вологих хрипів, більше у нижніх відділах Частота дихання 26 за 1 хвилину, виражений експіраторний характер задухи Артеріальний тиск у момент надходження 155/95мм рт ст, пульс 87 ударів за хвилину, задовільних властивостей На електрокардіограмі - ознаки гіпертрофії міокарду правого шлуночка, порушення процесів реполяризацм в правих грудних відведеннях, неповна блокада правої ніжки пучка Гіса При ехокардюграфічному дослідженні спостерігається збільшення порожнини правого шлуночка, потовщення передньої стінки правого шлуночка та міжшлуночкової перетинки, парадоксальний рух міжшлуночкової перетинки у сістолу, помірне зниження скоротливих властивостей лівого шлуночка При рентгенологічному дослідженні легені збільшеної повітряності з посиленим судинним малюнком, корені деформовані Враховуючи скарги хворого, клінічну картину захворювання, дані об'єктивного дослідження, виникла необхідність додаткових лабораторних досліджень з метою оцінки інтенсивності запального процесу Для цього хворому було проведено бронхоальвеолярний лаваж зі збором бронхоальвеолярного змиву стандартним способом Дослідження клітинного складу бронхоальвеолярного змиву дозволило встановити відносний вміст альвеолярних макрофагів, який становив 70,5%, що не дозволило однозначно діагностувати запалення респіраторного тракту Але враховуючи дані анамнезу та клінічної картини захворювання, імовірність високої інтенсивності запального процесу була досить великою, тому для оцінки інтенсивності запального процесу був застосований пропонуємий спосіб Після обчислення отриманих результатів вміст нітрит-юнів склав 8,34мкМ, що свідчило про наявність і високу інтенсивність запального процесу у респіраторному тракті Це дозволило точно встановити діагноз та призначити курс патогенетичне обумовленої терапії Через три тижні комплексного лікування з включенням засобів, які спроможні були зменшити інтенсивність запального процесу, поряд з поліпшенням клінічної картини захворювання та позитивною динамікою клініколабораторних даних, рівень нітрит-юнів в конденсаті видихаємого повітря склав 4,27мкМ, що свідчило про зменшення інтенсивності запального процесу у хворого, до середньої за інтенсивністю Таким чином, використання способу, що пропонується, дозволяє точно оцінити інтенсивність запального процесу при бронхолегеневих захворюваннях, а у конкретному випадку, дозволило вчасно призначити необхідну терапію і відвернути появу ускладнень Підписано до друку 05 09 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна