Спосіб визначення перфузійної здатності капілярів міокарда

Спосіб визначення перфузійної здатності капілярів міокарда, що включає визначення ступеня перфузіиного резерву капілярного русла в залежності від КІЛЬКОСТІ відкритих та закритих капілярів, який відрізняється тим, що в ендотеліальних клітинах закритих капілярів підраховують середню КІЛЬКІСТЬ субмембранних мікропіноцитозних везикул на 1мкм довжини люмінальної поверхні ендотелюцита, та якщо вона менша за 10 одиниць, то перфузіину здатність міокарда оцінюють як погану, від 10 до 2од - як достатню, вища за 25 - як добру такий спосіб визначення перфузійної здібності капілярів міокарду, який шляхом зменшення зразку тканини знижує травматизацію органа, зменшує тривалість етапів оцінки та має високу інформативність при використанні Означений вище технічний результат досягається тим, що у відомому способі визначення перфузійної здібності міокарду, що включає визначення ступеню перфузіиного резерву капілярного русла в залежності від КІЛЬКОСТІ відкритих та закритих капілярів, який відрізняється тим, що, в ендотеліальних клітинах закритих капілярів підраховують середню КІЛЬКІСТЬ субмембраних мікропіноцитозних везикул на 1мкм довжини люмінальної поверхні ендотелюцита, та якщо вона менше 10 одиниць, то перфузіину здібність міокарда оцінюють як погану, від 10 до 25од - як достатню, вище 25 - як добру Причинно-наслідковий зв'язок сукупності істотних ознак з означеним вище технічним результатом полягає в тому, що для визначення перфузійної здібності капілярів міокарду потрібний зразок біологічного матеріалу, який не перевищує розмірів ЗхЗхЗмм Такий об'єм тканини за даними [2] містить як відкриті, так і закриті капіляри, тобто є інформативним Це відповідає умовам мінімальної травматизації тканини міокарду людини під час виконання біопсії Більша інформативність методу 00 о о> ю 59108 досягається тим, що визначається не тільки КІЛЬКІСТЬ закритих капілярів, але і їхня функціональна здатність до трансмембранного переносу речовин Оскільки ДЛЯ дослідження потрібен малий зразок матеріалу, тим самим зменшується тривалість оцінки Морфологічним критерієм здібності закритих капілярів міокарду до реперфузм є КІЛЬКІСТЬ мікропіноцитозних везикул, які демонструють здібність зберігати можливість трансендотеліального транспорту Швидкість включення закритих капілярів у повноцінне функціонування визначається початковим станом ендотелюцитів Для доведення можливості відтворення способу з отриманням вищезазначеного технічного результату, проведено дослідження на 12 серцях щурів до та під час фізичного навантаження (плавання) Результати проведених досліджень на експериментальних тваринах дозволили встановити, що КІЛЬКІСТЬ відкритих капілярів під час навантаження знаходиться в залежності від початкового стану ендотелію закритих капілярів, а саме від активності трансендотеліального транспорту, яка може бути визначена через КІЛЬКІСТЬ субмембранних мікропіноцитозних везикул на люмінальній поверхні ендотелюцита Ці дані дозволяють більш повноцінно оцінювати перфузійну здібність капілярів міокарду, що підвищує інформативність заявляемого методу у порівнянні з прототипом Отже, сукупність відокремлюючих ознак винаходу, що заявляється, є істотною, бо має причинно-наслідковий зв'язок з підвищенням інформативності, зменшенням об'єму бюпсійного матеріалу та терміну проведення оцінки ендотеліальних клітин закритих капілярів на наявність в них мікропіноцитозних везикул ВІДОМОСТІ, ЩО підтверджують можливість здійснення способу визначення перфузійної здібності капілярів міокарда, що заявляється, полягають в наступному Для здійснення способу визначення перфузійної здібності капілярів міокарду, необхідне таке обладнання і матеріали як набір реактивів, ультрамікротом, електронний мікроскоп Фіксування та заливку матеріалу виконують за традиційною схемою [2] Спосіб визначення перфузійної здібності капілярів міокарду виконують наступним чином Відразу після забору бюптату міокарда зразок тканини розміщують в охолодженій суміші, яка містить 2% розчин параформу і 2,5% глютарового альдегіду на 0,1М фосфатному буфері (рН 7,3) Матеріал дофіксовують у 1% розчині чотирьохоксидного осмію на тому ж буфері, зневоднюють в охолоджених розчинах спиртів і ацетонів зростаючої концентрації і заливають в суміш епона з аралдітом На ультрамікротомі отримують ультратонкі зрізи 1 мкм завтовшки, які контрастують уранілацетатом і цитратом свинцю та оцінюють в електронному мікроскопі При проведенні візуального обстеження бюптату за допомогою електронного мікроскопа визначають функціональний стан капілярів за способом [1] В ендотеліальних клітинах закритих капілярів підраховують КІЛЬКІСТЬ субмембранних мік ропіноцитозних везикул на 1 мкм довжини люмінальної поверхні у ЗО ділянках різних ендотеліальних клітин Потім підраховують середнє арифметичне Якщо воно складає до 10 одиниць оцінюють перфузійну здібність міокарда як погану, від10до25од - як достатню, вище 25од -якдобРУ У ВІДПОВІДНОСТІ з винаходом для оцінки перфузійної здібності міокарду необхідно оцінити дві групи тварин тих, що знаходились у стані спокою, та тих, які перенесли фізичне навантаження плаванням Приклад 1 Контрольна група тварин Забір бюптату зроблений у 2 тварин, які знаходились у стані спокою Зразок тканини розміщували в охолодженій суміші, яка містить 2% розчин параформу і 2,5% глютарового альдегіду на 0,1 М фосфатному буфері (рН 7,3) Матеріал дофіксовували у 1% розчині чотирьохоксидного осмію на тому ж буфері, зневоднювали в охолоджених розчинах спиртів і ацетонів зростаючої концентрації і заливали в суміш епона з аралдітом На ультрамікротомі отримували ультратонкі зрізи 1мкм завтовшки, які контрастували ураніл-ацетатом і цитратом свинця та оцінювали в електронному мікроскопі Безпосередньо під час загальної візуальної оцінки препарату визначали функціональний стан капілярів Пасивне спадання просвіту капіляра до щелевидного з розворотом ядра ендотеліальної клітини в просвіт судини вказувало на те, що це закритий капіляр Встановили середню КІЛЬКІСТЬ відкритих (75%) та закритих (25%) капілярів, а також середню КІЛЬКІСТЬ субмембранних везикул в ендотелії закритих капілярів, яка дорівнювала 26од Приклад 2 Група тварин, які перенесли фізичне навантаження Підготовку матеріалу на всіх етапах проводили за вищезазначеною методикою Етап 1 У 2 тварин забір матеріалу провели після 5-хвилинного фізичного навантаження плаванням Середня КІЛЬКІСТЬ відкритих капілярів становила 81%, закритих - 19% Середня КІЛЬКІСТЬ субмембранних везикул - ЗО Етап 2 У 2 тварин забір матеріалу провели після 10-хвилинного фізичного навантаження Середня КІЛЬКІСТЬ відкритих капілярів становила 89%, закритих - 11% Середня КІЛЬКІСТЬ субмембранних везикул - 21 Етап З У 2 тварин забір матеріалу провели після 15-хвилинного фізичного навантаження Середня КІЛЬКІСТЬ відкритих капілярів становила 88%, закритих -12% Середня КІЛЬКІСТЬ субмембранних везикул -12 Етап 4 У 2 тварин забір матеріалу провели після 20-хвилинного фізичного навантаження Середня КІЛЬКІСТЬ відкритих капілярів становила 80%, закритих - 20% Середня КІЛЬКІСТЬ субмембранних везикул - 7 Етап 5 У 2 тварин забір матеріалу провели після 30-хвилинного фізичного навантаження Середня КІЛЬКІСТЬ відкритих капілярів становила 78%, закритих - 22% Середня КІЛЬКІСТЬ субмембранних везикул - 6 КІЛЬКІСТЬ відкритих капілярів на кожному з ета 59108 пів фізичного навантаження залежить від попередньої середньої КІЛЬКОСТІ субмембранних мікропіноцитозних везикул в ендотеліальних клітинах закритих капілярів Якщо вона становить 25 одиниць та більше - спостерігається значний (на 68%) зсув співвідношення відкритих та закритих капілярів у бік відкритих Якщо середня КІЛЬКІСТЬ везикул становить від 10 до 25од - зсув співвідношення відсутній, бо КІЛЬКІСТЬ відкритих капілярів незначно зменшується (до 1%) Якщо КІЛЬКІСТЬ везикул становить до 10 одиниць, то спостерігається зменшення КІЛЬКОСТІ відкритих капілярів Таким чином, після проведення експериментального випробування запропонованого способу визначення перфузійної здібності капілярів міокарда заявником встановлено, що заявлений спосіб може бути широко використаний у роботі патологоанатомічних відділень та дослідницьких морфологічних і патофізіологічних лабораторій для заявляемого рішення задачі у тому вигляді, як воно охарактеризоване у незалежному пункті формули Комп'ютерна верстка Е Гапоненко Підтверджена можливість його здійснення за допомогою вказаних у заявці, або відомих до дати пріоритету, діагностичних приладів і середовищ Спосіб, що втілює заявляємий винахід, при здійсненні забезпечує досягнення позитивного результату, а саме визначення перфузійної здібності капілярів міокарду за меншим об'ємом біоптату по відношенню до прототипу Отже, розроблений об'єкт відповідає умовам «промислова придатність», «новизна», «винахідницький рівень» і може бути кваліфікований винаходом України Джерела інформації 1 Способ ультраструктурной оценки перфузионной способности капилляров миокарда Заяв 2108744 РФ, MI1KG01 N1/28 /Волков A M , Казанская Г М , Ломиворотов В Н , Шунькин А В (РФ) №95118781/14, Заявл 31 1095, Опубл 20 04 98 2 Карупу В Я Электронная микроскопия - К Вища школа, 1984 - 162с Підписано до друку 05 09 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна