Спосіб діагностики облігатного передраку товстої кишки

Спосіб діагностики облігатного передраку товстої кишки шляхом оцінки показників проліферативної активності епітелію поліпа товстої кишки на ГІСТОЛОГІЧНИХ препаратах, який відрізняється тим, що виявляють білок мутантного гена р53, визначають КІЛЬКІСТЬ ПОЗИТИВНИХ на антиген ядер проліферувальних клітин, КІЛЬКІСТЬ патологічних МІТОЗІВ і при збільшенні їх КІЛЬКОСТІ ВІДПОВІДНО від 4,3% та 5,0%, наявності білка му тантного гена р53 і онкопатологм у родоводах діагностують облігатний передрактовстої кишки характеристику однієї сторони змін, що спостерігаються в поліпах, між тим для характеристики повної картини змін необхідний комплексний ПІДХІД з урахуванням перш за все основних показників проліферації клітини Одним із ключових моментів процесу проліферації є експресія гена-супресора пухлинного росту р53, мутація якого гальмує апоптоз і сприяє збільшенню проліферативного потенціала клітин Це призводить до зростання мітотичної активності клітинної популяції, що сприяє збільшенню ростової фракції клітин, яка визначається при імунопстохімічному дослідженні антигену ядер проліферуючих клггин(РСІ\ІА) Останній реєструє усі фази мітотичного циклу, а не тільки клітини, що знаходяться у МІТОЗІ Мітотичний індекс не може бути використаний як показник проліферативного пулу поліпа товстої кишки, тому що в нормі епітелій слизової оболонки товстої кишки відноситься до найбільш оновлюючої популяції клітин людини, у зв'язку з чим у морфологічно незмінєній слизовій оболонці спостерігається велика КІЛЬКІСТЬ МІТОЗІВ Серед останніх можуть спостерігатися і поодинокі патологічні мітози Збільшення числа патологічних МІТОЗІВ, навпаки, є достовірним показником генетичної нестабільності епітелію Поряд з цим особливості проліферації клітин пов'язані також із нестабільністю геному хворих, яка більше виражена в осіб із сімей з накопиченням онкопатологм [Н П Кулешов с соавт, 1992, И П Нєсина, Л 3 Полищук, 2000, F Nuzso, M Stefan і, 1989], тому при О ю 59447 характеристиці ростової фракції новоутворення необхідно враховувати і обтяженість сімейного анамнезу на рак Найближчим за сукупністю ознак аналогом запропонованого винаходу є визначення експресії білка р53 в колоректальних аденомах в залежності від рівня дисплазм епітелію [L Kaklamanis et al ,1993] Показано, що мутація гена р53 спостерігається при важкому ступені дисплазм епітелію аденом, що дає основу для використання р53позитивних клітин для оцінки ростових потенцій епітеліальних клітин слизової оболонки Цей спосіб ми обрали прототипом Фактором, якого бракує прототипу при спробі його використання з метою оцінки ростового потенціалу поліпа, є відсутність посилань на конкретні об'єктивні показники, що характеризують ростову фракцію як облігатний передрак Немає також вказівок, що свідчать про внесок сімейної обтяженості родоводів у хворих з колоректальною патологією у загальну схильність до розвитку раку В основу винаходу поставлено задачу оптимізувати діагностику облігатного перєдраку товстої кишки шляхом оцінки показників проліферативної активності епітелію ПОЛІПІВ Поставлена задача досягається шляхом визначення підвищеної експреси білка р53, антигену ядер проліферуючих НИХ препаратах, враховуючи спадкову схильність хворого до онкопатологм Суть запропонованого винаходу полягає у слідуючому На основі клініко-генеалопчного обстеження хворого складають його родовід, визначають КІЛЬКІСТЬ хворих родичів на рак та спектр онкопатологм у родоводах, що дає можливість оцінити наявність чи відсутність спадкової схильності до онкопатологм У цих же хворих на бюпсійному матеріалі, фіксованому у 10% розчині нейтрального формаліну з подальшою класичною ГІСТОЛОГІЧНОЮ обробкою бюптата новоутворення, проводять морфологічну верифікацію патологічного процесу Паралельно на цьому ж матеріалі оцінюють проліферативну активність новоутворення за допомогою імунопстохімічних методів визначення експресії білка р53 і антигену ядер проліферуючих клітин, а також КІЛЬКОСТІ патологічних мітозів Для підрахунку експресії білка р53, потрібно проаналізувати 300 клітин, для визначення PCNA 2000 при збільшенні мікроскопу х40, для КІЛЬКОСТІ патологічних МІТОЗІВ - 1000 при збільшенні мікроскопу х90(масляна імерсія) Результати визначення показників проліферативного пулу у поліпах різної гістологічної структури з урахуванням спадкової схильності родин до онкопатологм подані у таблиці клітин і КІЛЬКОСТІ патологічних МІТОЗІВ на ГІСТОЛОГІЧ Показники, % Білок Р53 PCNA* Патологічні МІТОЗ И Аденоматозні поліпи Сімейний онкоанамнез обтяжений необтяжений 0 0 4,3-6,1 0 5,6 ±1,3 4,8-6,4 3,6 ±0,1 2,9-4,0 * PCNA - антиген ядер проліферуючих клітин, ** чисельник - середні показники, знаменник коливання показників Як видно з таблиці, у хворих з аденоматозними поліпами не визначається експресія білка р53, антигену ядер проліферуючих клітин, а КІЛЬКІСТЬ патологічних МІТОЗІВ значно менша, ніж у аналогічних поліпах в осіб з обтяженим онкоанамнезом В аденопапіллярних поліпах перераховані показники значно вищі, ніж в адєноматозних поліпах, при чому найбільша їх величина визначається у хворих з сімейною обтяженістю родоводів Таким чином, в аденопапілярних поліпах товстої кишки, особливо в осіб з сімейним обтяженням родоводів на рак, існує ростова фракція з високою проліферативною активністю, визначеною завдяки застосуванню імунопстохімічних маркерів, які свідчать про генетичну нестабільність клітин, що є основою для подальшого розвитку малігнізацм Тому збільшення патологічних МІТОЗІВ ВІД 5,0% і КІЛЬКОСТІ PCNA-позитивних клітин від 4,3% поряд із виявленням білка мутантного гена р53 є об'єктивними показниками облігатного перєдраку Винахід ілюструють приклади Приклад 1 Хворий 3(66 років) без спадкової Аденопапілярні поліпи Сімейний онкоанамнез обтяжений необтяжений 35,2 ±2,5 18,6 ±1,3** 27,3 - 45,0 17,0-20,3 34,6 ±2,7 16,1 + 1,8 29,7-76,1 11,8-27,5 20,7 + 3,1 13,5+ 1,7 17,0-23,0 11,8-15,2 обтяженості родоводу з онкопатологм КЛІНІЧНИЙ діагноз - поліп прямої кишки Морфологічний діагноз - аденоматозний поліп Результати комплексного дослідження аденоматозного поліпу цього хворого КІЛЬКІСТЬ р53-позитивних клітин у новоутворенні - 0, КІЛЬКІСТЬ клітин з ядерним антигеном проліферуючих клітин - 4,3%, КІЛЬКІСТЬ патологічних МІТОЗІВ - 2,9% Застосування комплексу показників проліферативної активності дозволило констатувати незначну проліферацію епітелію поліпа, що характерна для аденоматозного поліпа Приклад 2 Хворий Г (53 роки) без спадкової обтяженості родоводу з онкопатологм КЛІНІЧНИЙ діагноз - поліп ректо-сигмовидного відділу товстої кишки Морфологічний діагноз - аденопапіллярний поліп Результати комплексного дослідження аденопапіллярного поліпу цього хворого КІЛЬКІСТЬ р53-позитивних клітин у новоутворенні - 19,3%, КІЛЬКІСТЬ PCNA-пазитивних клітин -14,2%, КІЛЬКІСТЬ патологічних МІТОЗІВ - 5,3% КІЛЬКІСНІ показники свідчать про підвищену проліферативну активність епітелію поліпа, що дає підстави розглядати цей аденопапілярний поліп як облігатний передрак Приклад 3 Хворий А (49 років) із спадковою обтяженістю родоводу з онкопатологм - синдром Пейтца-Єгерса У самого хворого протягом 3-х 59447 років видалені поліпи у прямій та сигмовиднш кишці, гайморовій порожнині та у сечоводі Рідна сестра хворого у 47 років померла від раку яєчника У батька неодноразово видалені поліпи товстої кишки, один з них був малігнізований КЛІНІЧНИЙ діагноз - поліп ректо-сигмовидного відділу товстої кишки Морфологічний діагноз - аденопапілярний поліп Результати комплексного дослідження аденопапілярного поліпу цього хворого КІЛЬКІСТЬ р53позитивних клітин у новоутворенні - 33,4%, КІЛЬКІСТЬ PCNA-позитивних клітин - 42,5%, КІЛЬКІСТЬ патологічних МІТОЗІВ - 17,9% Показники проліферативної активності свідчать про високий проліферативний потенціал новоутворення у хворого з обтяженим онкоанамнезом, що дозволило уточнити діагноз аденопапілярний поліп - облігатний передрак Приклад 4 Хворий П (64 роки) із спадковою обтяженістю родоводу з онкопатологм Мати хворого у 62 роки померла від раку товстої кишки Рідна сестра хворого прооперована з приводу раку товстої кишки Один брат хворого у 52 роки помер від раку шлунку, другий у 63 роки - від раку слизової оболонки ротової порожнини КЛІНІЧНИЙ діагноз - поліп сигмовидної кишки Морфологічний діагноз аденопапілярний поліп Результати комплексного дослідження адєнопапілярного поліпу цього хворого КІЛЬКІСТЬ р53-позитивних клітин у новоутворенні - 45,0%, КІЛЬКІСТЬ PCNA-ПОЗИТИВНИХ КЛІТИН - 68,4%, КІЛЬКІСТЬ патологічних МІТОЗІВ 28,3% Комплексний ПІДХІД ДОЗВОЛИВ визначити одночасне збільшення всіх показників проліферативної активності, що свідчить про високий проліферативний потенціал епітелію поліпа, який визнано облігатним передраком Достовірність запропонованого способу діагностики облігатного передраку товстої кишки доведена одночасним зростанням всіх показників проліферативної активності епітелію аденоматозних ПОЛІПІВ хворих із сімейною обтяженістю родоводів на онкопатолопю, зростаючою тенденцією наближення їх цифрових величин до значень в аденокарциномах товстої кишки, а також високим співпадшням(83,4%) результатів визначення експреси вказаних маркерів проліферації у паралельно досліджених раках товстої кишки Запропонований спосіб є високо інформативним порівняно з морфологічним дослідженням ПОЛІПІВ товстої кишки, простий для виконання, не потребує додаткового устаткування і може використовуватись у патопстолопчних відділеннях медичних закладів онкологічного і гастроентерологічного профілю Список література 1 Загребни В М Биологические маркеры Комп'ютерна верстка І Вихованець прєдрака толстой кишки //Архив патологии - 1395 -57, №4 - С 83 - 92 2 Казанцева И А Патология митоза в опухолях человека Новосибирск Наука, 1981 -143с 3 Комптон К К Прогресс в изучении генетики рака ободочной кишки Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии 1998 -№3 -С 100-106 4 Кулешов Н П , Кортина-Герреро Д , Разинкова Г А, и др Изучение хромосомной сайтломкости у больных с первичномножественными опухолями и семейными формами рака молочной железы //Вопросы онкологии - 1991 - 32, №2 С 160-166 5 Несина И П , Полищук Л 3 Определение хромосомной сайт-ломкости в лимфоцитах периферической крови больных колоректальным раком с учетом отягощенности семейного анамнеза онкопатологией //Цитология и генетика, - 2000 - 34, №1 -С 35-41 6 Bosnian F Т, Kikuchi Y , Dmjens W N М Proliferation and apoptosis in prohferative lesions of the colorecturn//J Pathol -1997 - 181, suppl - P 2 Clausen О Р F , 7 Andersen S N , StromkJaer H et al Genetic aberrations of DNA-diploid and aberrant cell populations monitored at different stages of colorectal tumorogenesis in ulcerative colitis// Тез 11-го Международного союза ассоциаций патологоанатомов М , 1899 -С 331 -332 8 Costa А , Maraska R , Valentims В et al p53 gene point mutations in relation to p53 nuclear protein accumulation in colorectal cancers//J Path - 1995 176 - P 4 5 - 5 3 9 Goellner G M , Tester D , Thibodeau S et al Different mechanisms underlie DNA instability in Huntmgton disease and col orectal cancer //Amer J Hum Genet -1997 60, №4 - P 873 - 890 10 Izzo F .Pelhcchia С Comparison of nuclear matrix protein composition in colon cancer and dysplasia //1998 - 33, №2 - P 191 -134 11 Kaklamanis L , Gatter К С , Mortensen N et al p53 expression in colorectal adenomas //Amer J Path -1993 -142, №1 -P 87 12 Nuzzo F , Stefam M Monitoring of genetic instability in subjects with increased risk of cancer // Ann 1st Super Sanita -1989 - 25, №1 - P 81 - 83 13 Quirke P Molecular pathology of colorectal cancer//ActaChir Austr -1997 - 29, №4 - P 3 14 Yamaguchi A , Nakagawara G , Kurosaka Y, et al p53 immunoreacti on in endoscopic biopsy specimens of colorectal cancer and its prognostic significance // Br J Cancer - --1993 - 68, №2 - P 339 - 402 Підписано до друку 06 10 2003 Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ТОВ "Міжнародний науковий комітет", вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна