Спосіб виділення пеніцилінрезистентних пневмококів

Спосіб виділення пеніцилінрезистентних пневмококів шляхом посіву пневмококів на кров'яному агарі, використання дисків з оксациліном та інкубації 18-24 години при 35-37°С в атмосфері 5% СО2, який відрізняється тим, що диск з оксациліном (1 мкг/диск) накладають на первинний посів досліджуваного матеріалу та виявляють колонії пеніцилінрезистентних пневмококів у зоні затримки росту, діаметром 20мм навколо диска. (19) (21) u201100806 (22) 24.01.2011 (24) 11.07.2011 (46) 11.07.2011, Бюл.№ 13, 2011 р. (72) ВОЙТОВИЧ ОЛЕКСАНДР ВАСИЛЬОВИЧ, ПАНТЮШЕНКО ЛЮДМИЛА ІВАНІВНА, КАМИШНИЙ ОЛЕКСАНДР МИХАЙЛОВИЧ (73) ЗАПОРІЗЬКИЙ ДЕРЖАВНИЙ МЕДИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ, ВОЙТОВИЧ ОЛЕКСАНДР ВАСИЛЬОВИЧ, ПАНТЮШЕНКО ЛЮДМИЛА ІВАНІВНА, КАМИШНИЙ ОЛЕКСАНДР МИХАЙЛОВИЧ 3 2. Виявляють колонії, подібні на пневмокок, які мають сірий колір, слизисті і проявляють альфагемоліз. 3. З первинного посіву відсівають підозрілу колонію і проводять підтвердження виділення пневмокока, стандартним способом. 4. З первинного посіву відсівають колонію пневмокока на агар Гівенталя-Ведьміної і дискодифузійним методом проводять виявлення чутливості пневмококів до оксациліну у кількості 1мкг/ диск. 5. Пневмококи, що мають зону затримки росту 20мм характеризують, як чутливі до пеніциліну, при діаметрі зони затримки росту 19мм пневмококи характеризують, як помірно резистентні. Суттєвими ознаками найближчого аналога і корисної моделі, що збігаються, є посів пневмококів на кров'яному агарі, використання дисків з оксациліном та інкубація 18-24 години при 35-37°С в атмосфері 5% СО2. Не зменшуючи значення вказаного способу для виділення пеніпилінрезистентних пневмококів, слід зауважити, що популяція пневмококів, виділених з певного біотопу людини, неоднорідна за багатьма ознаками і зокрема за чутливістю до антибіотиків. Серед цих пневмококів зустрічаються як чутливі, так і резистентні до пеніцилінів бактерії. У первинному посіві матеріалу, отриманого від пацієнта на кров'яному агарі, колонії цих бактерій не відрізняються за своєю морфологією. Тож, дослідник цілком випадково відбирає колонії пневмококу для подальшого пересіву і визначення чутливості до оксациліну. Таким чином, відсутність селекції пневмококів за чутливістю до пеніциліну при первинному посіві негативно позначується на точності та достовірності виділення пеніцилінрезистентних пневмококів. В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення способу виділення пеніцилінрезистентних пневмококів шляхом виявлення резистентних до оксациліну колоній пневмококів у первинному посіві, що дозволить підвищити точність і достовірність виділення пеніцилінрезистентних пневмококів. Поставлена задача вирішується тим, що у способі виділення пеніцилінрезистентних пневмококів шляхом посіву пневмококів на кров'яному агарі, використання дисків оксациліном та інкубації 18-24 години при 35-37°С в атмосфері 5% СО2 новим є те, що диск з оксациліном (1 мкг/диск) накладають на первинний посів досліджуваного матеріалу та виявляють колонії пеніцилінрезистентних пневмококів у зоні затримки росту, діаметром 20мм навколо диска. Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає у наступному: диск з оксациліном застосовується на первинному посіві матеріалу, отриманого від пацієнта, на кров'яному агарі. При цьому через 18-20 годин вже можна отримати попередні дані про наявність у досліджуваному матеріалі пеніцилінрезистентних пневмококів. У подальшому, для підтвердження виділення пневмокока, підозрілі на пневмокок колонії досліджують 61284 4 із застосуванням оптохінового тесту і тесту лізису у присутності солей жовчних кислот. Таким чином, застосування диска з оксациліном на первинному посіві дозволяє точно, достовірно і швидко виділяти пеніцилінрезистентний пневмокок у матеріалі, отриманому від пацієнта. З урахуванням вищевказаного, виділення пеніцилінрезистентних пневмококів у первинному посіві клінічного матеріалу на кров'яному агарі з оксациліновим диском, яке проведене уперше, дозволить підвищити точність, достовірність і швидкість виділення пеніцилшрезистентних пневмококів. Спосіб здійснюють таким чином: 1. Матеріал, отриманий від пацієнта, засівають на кров'яний агар у чашці Петрі, накладають на посів диск з оксациліном (1мкг/диск), проводять інкубацію 18-24 години при 35°С в атмосфері 5% СО2. 2. У зоні діаметром 20мм навколо диска з оксациліном виявляють подібні на пневмокок резистентні до оксациліну колонії, які мають сірий колір, слизисті і проявляють альфа-гемоліз. 3. Виділяють чисту культуру і проводять тести для підтвердження виділення пневмокока, стандартним способом. Приклад: До бактеріологічної лабораторії Запорізької обласної дитячої клінічної лікарні надійшов матеріал (харкотиння) пацієнта Т. з пневмонією. Матеріал був досліджений з метою виділення пеніцилінрезистентного пневмокока способом, викладеним у найближчому аналозі і запропонованим нами способом. Результати дослідження проведеного за методом, викладеним у аналозі показали наявність у матеріалі рясного росту колоній, морфологічно подібних на пневмокок. Подальші дослідження підозрілих на пневмокок колоній із застосуванням оптохінового тесту і тесту лізису у присутності солей жовчних кислот підтвердили наявність пневмокока. Окреме дослідження п'яти відібраних колоній пневмокока на чутливість до оксациліну, показало, що пневмококи у чотирьох колоніях були чутливими до антибіотика із зонами затримки росту, відповідно, 21, 20, 22, 22мм, а одна колонія пневмокока була резистентна до оксациліну із зоною затримки росту 11мм. Дослідження, проведене запропонованим нами способом дозволило у первинному посіві на кров'яному агарі виявити резистентні до оксациліну колонії з морфологією, характерною для пневмококів. Подальші дослідження підозрілих на пневмокок колоній із застосуванням оптохінового тесту і тесту лізису у присутності солей жовчних кислот підтвердили наявність пневмокока. Порівняння найближчого аналога і запропонованого нами способу виділення пеніцилінрезистентних пневмококів показало, що запропонований нами спосіб дозволяє точно і, до того ж, у двічі швидше виділяти пеніцилінрезистентні пневмококи у разі наявності їх у досліджуваному матеріалі. Таким чином, використання способу, що пропонується, дозволяє швидше, більш точно і достовірно проводити виділення пеніцилінрезистентних пневмококів. 5 61284 Література: (Кречикова О.И., Козлов Р.С., Богданович Т.М, Стецюк О.У., Суворов М.М., Катосова Л.К., Вишнякова Л.А., Фаустова М.Е. Выделение, идентифика Комп’ютерна верстка Н. Лиcенко 6 ция и определение чувствительности к антибиотикам Streptococcus pneumoniae// Клиническая микробиология и антимикробная терапия.-2000.-№1.С.88-98.). Підписне Тираж 24 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601