Спосіб визначення кустарно виготовлених заборонених похідних ефедрину у сечі людини

Спосіб визначення кустарно виготовлених заборонених похідних ефедрину в сечі людини, що здійснюється шляхом їх екстракції з наступним хроматографічним визначенням та ідентифікацією за допомогою реактивів барвників 1% розчину нінпдрину в ацетоні, тривкого чорного Б, реактиву Сімона, реактиву Маркі, який відрізняється тим, що додатково після хроматографування проводять проявлення хроматограм послідовним нанесенням 1% ацетонового розчину ншпдрину і реактиву Маркі, після зміни забарвлення порівнюють з хроматограмою, обробленою 10% розчином хлориду заліза, при отриманні позитивних результатів проводять внутрішньогрупову ідентифікацію повторним хроматографуванням з проявленням тривким чорним Б, флюрамом і реактивом Сімона Винахід відноситься до медицини, зокрема до визначення заборонених похідних ефедрину у біологічному матеріалі Відомим Є спосіб визначення одного з небезпечних похідних ефедрину-ефедрону в сечі людини, в основу якого покладено утворення дітюкарбаматного комплексу між ефедроном і катіоном МІДІ в специфічних умовах дослідження з подальшим хроматографічним розподілом в тонких шарах сорбенту (Еремин С К , Изотов Б Н , Веселовская Н В Анализ наркотических средств М -1993 г-С 116) Недоліком цього способу є його мала специфічність відносно ефедрону, а також те, що це визначення має лише попереднє значення Іншим відомим способом ідентифікації цієї сполуки в екстрактах, здобутих з внутрішніх органів трупів, є метод хроматографії в тонких шарах сорбенту де ефедрон поряд із структурними аналогами проявляется розчином діфеніламша в концентрованій сірчаній кислоті та діфенілкарбазоном в етанолі Після застосування цих реактивів проявників неможливо однозначно зробити висновок про виявлення ефедрону (А Ф Фартушный, В П Сухин и др Идентификация некоторых фенилалкиламинов в лекарственных препаратах и биосредах Питання судової медицини та експертної практики Донецьк -1998 -С 75-77) реактивом Марки чутливості якої недостатньо для використання її для визначення цієї групи речовин у біологічному матеріалі (Recommended Methods for Testing Amphetamine and Methamphetamme, Mannual for Use by National Narcotics Laboratories, ST/NAR/9 Unites Nation, 1987) Найбільш близьким до заявляемого рішення і обраним за прототип є спосіб визначення заборонених фенілалкіламшів у сечі людини після їх екстракції з лужного середовища, після чого екстракт розподіляють методом хроматографії у тонкому шарі сорбенту і проводять групову та внутрішньо групову ідентифікацію за допомогою чотирьох реактивів барвників 1% розчину ншпдріну в ацетоні, тривкого чорного Б, флюрама та реактиву Сімона (Recommended Methods for the Detection and Assay of Heroin, Cannabmoids, Cocaine, Amphetamine, Methamphetamme and Ring-Substituted Amphetamine Derivatives in Biological Specimens United Nations New York, 1995) Для ідентифікації заборонених фенілалкіламінів у речових доказах використовують реакцію з Недоліком цього способу є те, що немає даних про такі сполуки як ефедрон і норефедрон - речовини, що виготовляють незаконно кустарним способом і які підлягають контролю (Про затвердження переліку наркотичних засобів, психотропних речовин і прекурсорів Постанова Кабінету Міністрів України №770 від 6 травня 2000 р) Сировиною для виготовлення цих речовин прислуговують складні лікарські засоби, що містять в собі ефедрин і фенілпропаноламш (Наркотичні засоби, пси (О (О (О 62664 хотропні речовини та їх розпізнавання Довідник МВС України, Київ, 1997 р, Сосин И К , Линский И В , Чуев Ю Ф и др Клиника, патогенез и лечение зависимости от психостимуляторов, получаемых путем кустарной химической модификации некоторых препаратов, содержащих прекурсоры Архів психіатри - 2001 - №4 С 117-122), а також ліки і їх метаболіти, що дають схожі забарвлення при проведенні ідентифікації з розчином ншпдрину (амідопирин, анальгін та ІНШІ) І мають близькі хроматографічні характеристики (табл 1 ) Таблиця 1 Результати хроматографічного розподілу фенілалкіламшів та забарвлення що виникає з реактивами-проявниками Забарвлення Речовина Ефедрин Фенілпропаноамш Ефедрон Норефедрон Амфетамш Метамфетамін Величина Rf в системі 3 1 % роз3 р-ном чином 1 Марки ншпдрину Фіолето0,31 ве Фіолето0,62 ве Рожеве 0,66 Рожеве Фіолетове Темнофіолетове 2 3 0,46 0,18 0,47 0,69 0,71 0,53 0,65 0,7 0,5 жовтогаряче 0,46 0,62 0,62 коричн 0,31 еве 0,53 0,33 0,32 0,53 0,33 0,47 0,62 0,60 0,71 0,68 0,50 0,75 0,66 ідентифікацією за допомогою реактивів барвників 1% розчину ншпдрину в ацетоні, тривкого чорного Б, реактиву Сімона, реактиву Маркі, згідно з винаходом, додатково після хроматографування проводять проявлення хроматограм послідовним нанесенням 1% ацетонового розчину ншпдрину іреактиву Маркі, після зміни забарвлення порівнюють з хроматограмою, обробленою з 10% розчином хлориду заліза При отриманні позитивних результатів проводять внутришньогрупову ідентифікацію повторним хроматографуванням з проявленням тривким чорним Б, флюрамом і реактивом Сімона Послідовне проявлення хроматограм дозволяє визначити заборонені фенілалкіламіни, а також відокремити метаболіти ЛІКІВ ВІД фенілалкіламшів, додаткове оброблення 10% розчином хлориду заліза проводять остаточну ідентифікацію заборонених речовин Спосіб, що заявляється проводиться таким чином 20мл сечі пацієнта підкислюють хлороводневою кислотою до рН=1-2 і проводять екстракцію 20 мл диетилового ефіру Верхній ефірний шар відокремлюють і використовують для визначення речовин кислої природи Водну фазу підлужують ДВІЧІ 25% розчином аміаку до рН=11-12 і екстрагують ДВІЧІ з 20 мл суміші хлороформ-2-пропанол (9 1) Отриманий екстракт випарюють на повітрі і сухий залишок розчиняють у 0,5 мл хлороформу, 50 мкл розчину наносять на ЛІНІЮ старту двох хроматографічних платівок «Сорбфіл» Після закінчення хроматографування платівки витягують, висушують і проявляють Першу 1% ацетоновим розчином ншпдрину, фіксуючи забарвлення та величини Rf (відношення відстані, яка пройдена центром плями речовини до відстані, яка пройдена системою розчинників), а після висушування наносять реактив Маркі і після зміни забарвлення, порівнюють з другою хроматограмою обробленою 10% розчином хлориду заліза (табл 2, 3) При отриманні позитивних результатів проводять внутрішньогрупову ідентифікацію знайдених речовин Для цього проводять повторне хроматографування з проявленням тривким чорним Б, флюрамом і реактивом Сімона 0,52 3,4метілендю- Фіолеточорне кси- мета- ве мфетамш СинєПарацетафюлето- жовте мол ве МонометіФіолетоламінове антипірин 4Фіолетоаміноантівве пірін Система 1 - метанол, 25% аміак (100 15) Система 2 - етилацетат, етанол, 25% аміак (85 10 0,5) Система 3 - толуол, ацетон, етанол, 25% аміак (45 45 7,5 2,5) В основу винаходу поставлена задача удосконалення способу визначення кустарно виготовлених заборонених похідних ефедрину в сечі людини, в якому за рахунок введення додаткового етапу проявлення хроматографічних платівок, досягається можливість відединтифікувати заборонені речовини від ЛІКІВ та їх метаболітів Поставлена задача вирішується в способі визначення кустарно виготовлених заборонених похідних ефедрину в сечі людини шляхом и екстракції з наступним хроматографічним визначенням та Таблиця 2 Забарвлення, що виникає після послідового нанесення 1% розчину ншпдрину і реактива Марки Речовина Ефедрин Фенілпропаноамш Ефедрон Норефедрон Амфетамш Метамфетамш 3,4-метілендюксиметамфетамш Монометіламшо-антипірин 4-амшоантівпірш Забарвлення Малинове Малинове Малинове Малинове Коричневе Коричневе Чорно-синє Жовте Жовте 62664 Таблиця З Забарвлення, що виникає з 10% розчином хлориду заліза Речовина Ефедрин Ефедрон Норефедрон Амфетамш Первитін 3,4-метілендюксиметамфетамш Амідопирин Монометіламшо-антипірин 4-аміноантівпірш Парацетамол Забарвлення Слабке жовте Слабке жовте Слабке жовте Фіолетове Синє Синє Синє-фюлетове Комп'ютерна верстка М Клюкш Приклад 1 Хворий X, 1965 р н , наркоман приймає кустарно виготовлені наркотики з теофедрину Проведення аналізу дало можливість диференціювати присутність ефедрону і ефедрину у сечі по забарвленню в малиновий колір Приклад 2 Хворий У, історія хвороби № , 1973 р н , наркоман приймає кустарно виготовлені наркотики з теофедрину Забарвлення слабке жовте Проведення аналізу дало можливість диференціювати присутність метамфетаміну у сечі Приклад 3 Хворий К , 1955 р н , приймає теофедрін при астмі Проведення аналізу дало можливість диференціювати присутність ефедріну у сечі по забарвленню хроматограм в фіолетовий колір Таким чином, запропонований спосіб визначення заборонених похідних ефедрину, дозволяє їх надійно ідентифікувати Підписне Тираж39 прим Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, Львівська площа, 8, м Київ, МСП, 04655, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119