Спосіб потенціювання антимікробної активності ліофілізованого ксенодермотрансплантата

Винахід відноситься до медицини, зокрема, до комбустіології і трансплантології, і може бути використаний при лікуванні хворих за методом хірургічної дермопластики. Відомий спосіб потенціювання антимікробної активності ліофілізованого ксенодермотрансплантата (КДТ), який включає просочення клаптя КДТ розчином антибіотика на одному з технологічних етапів його виготовлення [1]. Просочення субстрату ксеногенної шкіри розчином антибіотика у процесі її виробництва забезпечує го товому продукту, наприклад, препарату ліофілізованої шкіри свині, антимікробні властивості, які притаманні клаптям ліофілізованого КДТ як під час збереження, зокрема, відповідно до технічних умов гарантовано впродовж трьох років, так і при клінічному застосуванні. Недоліком відомого способу є недостатній рівень ефективності, що проявляється у вигляді недостатньо високої антимікробної активності ліофілізованого КДТ. Наведений недолік випливає з того, що антимікробні властивості просоченого антибіотиком консервованого біополімерного субстрату, яким є препарат ліофілізованого КДТ, з часом втрачаються, головним чином, через природні процеси біохімічного та фізикохімічного розкладу (деградації) молекул антибіотика. В основу винаходу поставлено завдання вдосконалити відомий спосіб, у якому шляхом біогенного стимулювання комплексу антибіотик-біополімерний субстрат ліофілізованого КДТ на етапі його підготовки до клінічного застосування досягають підвищення антимікробної активності ліофілізованого КДТ, а отже ефективності його клінічного застосування. При розгляді технічного завдання було взято до уваги те, що кров людини, в особливості, сироватка, містить значну кількість антимікробних чинників, що складають так звану систему природної імунологічної резистентності організму як цілого. До них, як відомо, належать білки-опсоніни, численні ферментні компоненти системи комплемента, лізоцим, інші білкові макромолекули з антимікробною активністю. З врахуванням того, що значна кількість антимікробних чинників крові є продуктами клітинної, перш за все, лейкоцитної секреторної діяльності, вочевидь стає доцільність інкубації клаптів ліофілізованого КДТ у нативній крові або її розчині. Попередньо просочений антибіотиком ліофілізований КДТ при взаємодії з неспецифічними факторами природної імунологічної резистентності нативної крові в умовах in vitro набуватиме ефективнішої антимікробної активності, що буде з позитивним наслідком використано при проведенні маніпуляцій хірургічної пластики. Виходячи з наведеного, поставлене завдання вирішують тим, що у відомому способі потенціювання антимікробної активності препарату ліофілізованого ксенодермотрансплантату, який включає просочення препарату розчином антибіотика на одному з технологічних етапів його виготовлення, відповідно до винаходу препарат ліофілізованого ксенодермотрансплантату безпосередньо перед хірургічною пластикою інкубують у розчині нативної крові при 18-24°С впродовж 45-60 хвилин. Перелік фігур. Фіг. 1 С хема індукції антимікробних властивостей консервованої ксеношкіри нативною кров'ю. Фіг. 2 Характер росту колоній золотистого стафілококу після інкубації змиву культури мікроорганізму з ксеношкірою в умовах попередньої взаємодії з нативною кров'ю (дослід - А) та в контролі (Б). Спосіб здійснюють таким чином. Готують розчин аутологічної крові, для чого взяту попередньо (в межах 1-2 годин) кров з вени змішують у стерильних умовах з ізотонічним розчином натрію хлориду у співвідношенні 1:1-1:4. Клапті ліофілізованого КДТ занурюють у розчин крові і витримують при 18-24°С впродовж 45-60 хвилин. Для визначення ефективності запропонованого способу, стандартизовані за площею клапті КДТ, наприклад, у вигляді кружечків діаметром 5-8мм, після завершення інкубації в розчині нативної крові вміщують у стандартизований змив мікробної культури, наприклад, золотистого стафілококу, витримують у ньому 30хв, після чого на тверде живильне середовище окремо висівають проінкубовані кружечки шкіри і змив культури - інкубат. Для контролю аналогічним чином проводять дослід з інкубацією клаптів КДТ у стерильному ізотонічному розчині натрію хлориду - без попередньої інкубації в нативній крові. Висновки про наявність ефекту посилення антимікробної активності ліофілізованого КДТ роблять за порівняльним аналізом кількості колоній мікробів, що виросли на живильному середовищі в контролі і досліді. Приклад 1. З вени донора отримали 2,0мл крові, яку відразу з дотриманням правил асептики і антисептики перенесли до пробірки з 4мл ізотонічного розчину натрію хлориду. До розчину крові в пробірці відразу внесли 10 клаптів у вигляді кружечків консервованої ксеношкіри діаметром 6мм, після чого суміш інкубували впродовж 50хв при 20°С. По завершенню інкубації кружечки ксеношкіри - ліофілізованого КДТ перенесли до пробірки із стандартизованим змивом мікробної культури золотистого ста філококу і залишали там ще впродовж 30хв, після чого на твержде живильне середовище в дво х ча шках Петрі окремо помістили по 5 проінкубованих кружечків ксеношкіри, а ще на дві чашки висяли змив культури - інкубат. У контролі інкубували клаптів (кружечки) ксеношкіри у стерильному ізотонічному розчині натрію хлориду без додавання аутологічної крові з наступним вміщенням у змив мікробної культури золотистого ста філококу і посівом аналогічних інгредієнтів на живильне середовище у чашках Петрі. Результат оцінювали через 48 год після посіву мікробного матеріалу. Висновки про вплив біогенних чинників крові на антимікробну активність КДТ сформульовано за даними порівняльного аналізу кількості колоній мікробів, що виросли на живильному середовищі в контролі і досліді. У наведеному прикладі 1 в контрольному препараті при посіві неактивованого клаптя ліофілізованого КДТ виросло 14 колоній стафілокока, а при посіві інкубату - 368 колоній, а в результаті попередньої інкубації ліофілізованого КДТ у розчині нативної крові аналогічні показники становили 3 і 224 колоній - відповідно. Приклад 2. Запропонованим способом здійснили потенціювання антимікробної активності консервованої ксеношкіри шляхом інкубації з нативною кров'ю 22 доноріов - здорових дорослих людей. Результати наведені в таблиці. Таблиця Характер біогенного впливу нативної крові на антимікробні властивості консервованої ксеношкіри Дослідний субстрат Змив мікробної культури - вихідний субстрат (базовий контроль) Змив мікробної культури і інкубований в ньому КДТ - контроль Змив мікробної культури і інкубований в ньому КДТ після попередньої обробки нативною кров'ю - дослід n Число колоній мікроорганізмів Посів клаптів КДТ % Посів інкубату 28 % 448±32 144 26 18 ±4* 100 311±24 4 ±2* 22 238±17 76