Спосіб виготовлення пробіотичного препарату бацилярного субтилісу

Спосіб виготовлення пробіотичного препарату бацилярного субтилісу, який включає культивування штаму бактерій Bacillus subtilis 44-р, відділення бактеріальної маси, змішування її із захисним середовищем і висушування сублімаційно або у сушильній установці розпилюючого типу, який відрізняється тим, що з метою підвищення виходу цільового продукту та збільшення терміну придатності препарату поживне середовище для культивування штаму бактерій стаціонарно у колбах додатково містить сухий м'ясопептонний бульйон, манган (II) сульфат пентагідрат, ферум (II) сульфат гептагідрат і кобальт хлорид гексагідрат при наступному співвідношенні компонентів, мас. %: (19) 1 3 66420 Поставлена задача вирішується за рахунок внесення у живильні середовища сухого м'ясопептонного бульйону, меляси та солей мікроелементів. Спосіб одержання пробіотичного препарату бацилярного субтилісу, що заявляється, здійснюється наступним чином. Для виготовлення препарату використовують штам бактерій Bacillus subtilis 44-р. Штам Bacillus subtilis 44-р депонований у Депозитарії Державного науково-контрольного інституту біотехнології і штамів мікроорганізмів (вул. Донецька, 30, м. Київ, Україна) 17 травня 2002 року за реєстраційним номером 141. Виготовлення посівного матеріалу здійснюють шляхом культивування виробничого штаму стаціонарно у колбах за температури 37±1 °C упродовж 3-5 діб на удосконаленому середовищі такого складу, мас. %: кукурудзяний екстракт меляса сухий м'ясопептонний бульйон крохмаль діамоній гідрофосфат дикалій гідрофосфат тригідрат магній сульфат гептагідрат манган (II) сульфат пентагідрат ферум (II) сульфат гептагідрат кобальт хлорид гексагідрат вода питна кальцій хлорид вода питна 0,02-0,05 решта. Отриману бактеріальну масу відділяють від культуральної рідини центрифугуванням, змішують із захисним середовищем та висушують сублімаційно або у сушильній установці розпилюючого типу. У результаті здійснення даного способу одержують сухий препарат бацилярний субтиліс, в 1 г якого міститься не менше 5 млрд. життєздатних клітин. Переваги запропонованого способу відображено в наведеному нижче прикладі. Приклад 1. Виготовлення у колбах посівного матеріалу пробіотичного препарату бацилярний субтиліс згідно із запропонованим способом. 3 Готують 100 см живильного середовища такого складу, г: 2,0-2,5 2,0-2,3 2,5-3,0 0,5-0,8 0,5-0,6 0,2-0,3 0,02-0,03 0,005-0,007 0,005-0,007 0,001-0,003 решта. кукурудзяний екстракт меляса сухий м'ясопептонний бульйон крохмаль діамоній гідрофосфат дикалій гідрофосфат тригідрат магній сульфат гептагідрат манган (ІІ) сульфат пентагідрат ферум (II) сульфат гептагідрат кобальт хлорид гексагідрат вода питна Культивування у ферментері проводять упродовж 24 годин з перемішуванням і аерацією при температурі 37±1 °C у модифікованому живильному середовищі такого складу, мас. %: кукурудзяний екстракт меляса крохмаль діамоній гідрофосфат дикалій гідрофосфат тригідрат магній сульфат гептагідрат манган (II) сульфат пентагідрат ферум (II) сульфат гептагідрат 4 2,5 2,2 2,5 0,6 0,5 0,3 0,03 0,007 0,007 0,002 решта. Корегують рН 20 %-вим розчином натрій гідроксиду до значення 6,8. Потім вносять суспензію чистої культури Bacillus subtilis 44-р з концентрацією життєздатних 2,0-2,5 2,0-2,5 0,5-0,7 0,5-1,0 0,2-0,5 0,02-0,04 0,005-0,008 0,005-0,008 клітин не менше 2,0  109 КУО/см в кількості 0,1 % до об'єму середовища. Культивування здійснюють протягом 48 годин при температурі 37  1 °C у термостаті. 3 Титр життєздатних клітин становить 2,0  109 3 КУО/см (табл. 1). Таблиця 1 Порівняльна характеристика ефективності відомого та запропонованого способів одержання посівного матеріалу Одержаний посівний матеріал За відомим способом За запропонованим способом Тривалість культивування, діб 5-8 Із наведених у таблиці даних видно, що при одержанні посівного матеріалу запропонованим способом досягається високий титр життєздатних клітин за суттєвого зменшення тривалості культивування. Приклад 2. Виготовлення експериментальних партій пробіотичного препарату бацилярний субтиліс згідно із запропонованим способом. 2-3 Кількість життєздатних клітин, 3 КУО/см немає даних 2,5  109 Готують 100 л живильного середовища такого складу, кг: кукурудзяний екстракт меляса крохмаль діамоній гідрофосфат дикалій гідрофосфат тригідрат магній сульфат гептагідрат 2,0 2,0 0,5 0,5 0,2 0,02 5 66420 манган (II) сульфат пентагідрат ферум (II) сульфат гептагідрат кальцій хлорид вода питна рям з розрахунку 0,05 об'єму на 1 об'єм середовища за годину. . 9 Титр життєздатних клітин становить 3,0 10 3 КУО/см . Бактеріальну масу відділяють від культуральної рідини центрифугуванням при 12600 g. Одержану вологу біомасу змішують у співвідношенні 1:1 із захисним середовищем такого складу, мас. %: 0,005 0,005 0,02 решта. Корегують рН 20 %-вим розчином натрій гідроксиду до значення 6,8-7,0. Біохімічні показники приготованого середовища: сухі речовини за Балінгом,° рН амінний Нітроген, мг % 6 цукроза натрій ацетат тригідрат вода питна 11-13 6,8-7,0 25-30. Потім вносять суспензію чистої культури Bacillus subtilis 44-p, одержану згідно зі способом, наведеним вище, в кількості 0,01 % до об'єму середовища. Культивування здійснюють упродовж 24 годин за температури 37±1 °C при безперервному перемішуванні та аерації стерильним повіт 10 2 решта. Отриману пасту висушують сублімаційно або у сушильній установці розпилюючого типу. Вихід сухого продукту становить 515 г з титром життє. 9 здатних клітин Bacillus subtilis 44-p 5,0 10 КУО/г, що відповідає виходу цільового продукту 9,1 % від культуральної рідини (табл. 2). Таблиця 2 Порівняльна характеристика ефективності відомого та запропонованого способів одержання сухого пробіотичного препарату Кількість життєздатних клітин Одержаний сухий препарат в культуральній 3 рідині, КУО/см в сухому препараті, КУО/г Вихід готового продукту, % Збереженість життєздатності клітин Bacillus subtilis, % 6 міс. 12 міс. 18 міс. 24 міс. За відомим способом 2,4 10 . 9 4,2 10 . 9 8,7 100 84,7 немає даних немає даних За запропонованим способом 3,0 10 . 9 5,0 10 . 9 9,1 100 100 100 100 Із наведених в таблиці даних видно, що при одержанні біомаси запропонованим способом зростає титр життєздатних клітин в культуральній рідині, підвищується вихід готового продукту після Комп’ютерна верстка А. Крижанівський висушування біомаси із захисним середовищем. Виготовлений таким чином препарат придатний до застосування впродовж 24 місяців (термін спостереження). Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601