Ізолят бактерії lactobacillus acidophilus 24 для виготовлення пробіотичного препарату

Ізолят бактерії LACTOBACILLUS ACIDOPHILUS 24 для виготовлення пробіотичного 3 номанітних гнійно-запальних процесів, а також дисбіотичних кишкових зрушень у дрібних тварин. Об'єкт даного дослідження - Lactobacillus acidophilus 24, був ізольований в притулку для бездомних тварин ЗАТ «Ясинуватського машинобудівельного заводу» Донецької області із фекалій від здорового кота віком 4 роки при вивченні нормальної кишкової аутофлори у вказаного вище виду тварин. Ізолят мікроорганізму Lactobacillus acidophilus 24 виділяли висівом серійних розведень фекалій здорового кота (10-2-107 у фосфатному буфері, рН 7,2). Ці розведення висівали на середовища MRS і культивували за температури 37°С 42 години. Ізолят, який є об'єктом даного дослідження, ізолювали із розведення фекалій 10-5. Колонії для подальшої ідентифікації відбирали випадково, морфотинкторіальні, культуральні і біохімічні властивості вивчали на ізолятах. Позначення ізоляту - Lactobacillus acidophilus 24. Видова назва мікроорганізму - Lactobacillus acidophilus 24. Сімейство - Lactobacillaceae, рід Lactobacillus, вид - acidophilus. Морфо-тинкторіальні властивості: у препаратах-мазках з двохдобових культур, пофарбованих за Грамом лактобацили мають вигляд грампозитивних паличок правильної форми, 4-6 мкм довжини, які утворюють завилисті ланцюжки різної довжини. Lactobacillus acidophilus 24 - це аспорогенний, нерухомий мікроорганізм. Культуральні властивості: ізолят Lactobacillus acidophilus 24 є факультативним анаеробним мікроорганізмом. На живильному середовищі MRS-2 дає щіткоподібний ріст. На твердих живильних середовищах (MRS-4, агар з гідролізованим молоком) - ростуть у вигляді дрібних непрозорих білих шорстких колоній. Знежирене молоко ізолят мікроорганізму Lactobacillus acidophilus 24 згортає через 24-48 години з утворенням характерного суцільного згустку без пухирців газу. Хемоорганотрофи, потребують складні живильні середовища. Біохімічні властивості: ізолят мікроорганізму Lactobacillus acidophilus 24 гомоферментативний, розкладає з утворенням кислоти без газу глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, рафінозу, галактозу, саліцин і фруктозу. Згортає знежирене молоко через 24-48 години, утворює кислоту з кислотністю 160° за Тернером. Біологічні властивості: ізолят мікроорганізму Lactobacillus acidophilus 24 не є патогенним для тварин, у тому числі для білих мишей, морських свинок, собак та котів у дозі 1 млрд. мікробних клітин при внутрішньочеревному введенні. Антагоністичні властивості: ізолят бактерії Lactobacillus acidophilus 24 має виражену антагоністичну активність у відношенні до патогенних і умовно патогенних мікроорганізмів (Е. соlі серогруп O8, O18, O26; Е. aerogenes; P. aeruginosa; С. freundii; P. vulgaris; P. mirabilis; S. uberis; S. aureus; C. albicans), які найчастіше обумовлюють дисбіотичні кишкові порушення у собак та котів. Адгезивні властивості: ізолят бактерії Lactobacillus acidophilus 24 має високі адгезивні 56051 4 індекси у відношенні до еритроцитів теляти, кози, вівці, собаки, кота та кролика. Чутливість до антибіотиків: при діскдифузійному тесті ізолят мікроорганізму Lactobacillus acidophilus 24 був стійким до пеніциліну, оксациліну, амоксіциліну, стрептоміцину, доксіцикліну, гентаміцину, лінкоміцину, левоміцетину, цефазоліну, цефтріаксону, енрофлоксацину, тілозіну, метронідазолу. Це дозволяє використовувати ізолят бактерії Lactobacillus acidophilus 24 при лікуванні разом із антибіотиками. Антигенні властивості: ізолят бактерії Lactobacillus acidophilus 24 не вивчались. Стабільність основних властивостей ізоляту: ізолят бактерії Lactobacillus acidophilus 24 зберігає свої властивості в знежиреному молоці в умовах рефрижератору при +4-6°С протягом 6 місяців. Стабільність генетичних властивостей: у дослідного ізолята не спостерігається дисоціація протягом 6 місяців при періодичних пересівах у знежирене молоко. Ізолят вільний від іншої бактерійної мікрофлори та грибів. Середовища для культивування ізоляту: для вивчення і перевірки культуральних властивостей використовують живильні середовища MRS-2, MRS-4, агар з гідролізованим молоком. Поточна підтримка бактерій проводиться вирощуванням на знежиреному молоці, рН 7,0 у пробірках при 37°С на протязі 24-48 годин. Основні умови зберігання: культури бактерій вирощують у знежиреному молоці і зберігають в холодильнику за температури +4-6°С, або при кімнатній температурі. Пересів для збереження життєдіяльності і біохімічних властивостей проводять на знежирене молоко через 30-35 діб. Приклад 1. Визначення біохімічної активності ізоляту бактерії Lactobacillus acidophilus 24. З добових культур бактерій Lactobacillus acidophilus, що вирощені на живильному середовищі, робили висіви в пробірки із знежиреним молоком (доза висіву - 0,2 см3 на 5 см3 молока). Засіяні лактобактерії повинні згорнути знежирене молоко за 48-72 години з утворенням характерного суцільного згустку без пухирців газу. Лактобактерії, які не відповідали вимогам, бракували. Приклад 2. Визначення нешкідливості ізоляту бактерії Lactobacillus acidophilus 24. Для перевірки на нешкідливість білим мишам, морським свинкам, котам та собакам, у кількості по 3 тварини ізолят мікроорганізму Lactobacillus acidophilus вводили у дозі 1 млрд. мікробних клітин внутрішньочеревинно. Спостереження за тваринами проводили протягом трьох діб. Тварини залишились живими. При загибелі тварин дослід повторюють на подвійній кількості макроорганізмів. У повторному досліді тварини повинні залишитись живими. При загибелі хоч однієї тварини, ізолят лактобактерії бракують. Ізолят бактерії Lactobacillus acidophilus 24 може бути використаний в якості пробіотичного препарату для корекції дисбіотичних кишкових порушень у собак та котів. 5 Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко 56051 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601