Ізолят бактерії lactobacillus rhamnosus 26 для виготовлення пробіотичного препарату

Ізолят LACTOBACILLUS RHAMNOSUS 26 для виготовлення пробіотичного препарату, який проявляє високу антагоністичну активність по відношенню до патогенної та умовно патогенної мікрофлори, стійкість до основних антибактерійних зазасобів при лікуванні гнійних ран у котів. (19) (21) u201007098 (22) 08.06.2010 (24) 25.11.2010 (46) 25.11.2010, Бюл.№ 22, 2010 р. (72) РУДЕНКО ПАВЛО АНАТОЛІЙОВИЧ (73) ЛУГАНСЬКИЙ НАЦІОНАЛЬНИЙ АГРАРНИЙ УНІВЕРСИТЕТ 3 будівельного заводу» Донецької області із біоптату здорової шкіри від здорового кота віком 5 років при вивченні нормальної аутофлори екологічних ніш організму вказаного вище виду тварин. Ізолят мікроорганізму Lactobacillus rhamnosus 26 виділяли висівом серійних розведень біоптату здорової шкіри здорового кота у фосфатному буфері, рН 7,2. Ці розведення висівали на середовища MRS і культивували за температури 37 °С 42 години. Колонії для подальшої ідентифікації відбирали випадково, морфо-тинкторіальні, культуральні і біохімічні властивості вивчали на ізолятах. Позначення ізоляту - Lactobacillus rhamnosus 26. Видова назва мікроорганізму - Lactobacillus rhamnosus 26. Сімейство - Lactobacillaceae, рід Lactobacillus, вид - rhamnosus. Морфо-тинкторіальні властивості: у препаратах-мазках з двохдобових культур, пофарбованих за Грамом лактобацили мають вигляд грампозитивних паличок правильної форми, 4-6 мкм довжини, які утворюють завилисті ланцюжки різної довжини. Lactobacillus rhamnosus 26 це аспорогенний, нерухомий мікроорганізм. Культуральні властивості: ізолят Lactobacillus rhamnosus 26 є факультативним анаеробним мікроорганізмом. На живильному середовищі MRS-2 дає щіткоподібний ріст. На твердих живильних середовищах (MRS-4, агар з гідролізованим молоком) - ростуть у вигляді дрібних непрозорих колоній. Знежирене молоко ізолят мікроорганізму Lactobacillus rhamnosus 26 згортає через 48-60 години з утворенням характерного суцільного згустку без пухирців газу. Хемоорганотрофи, потребують складні живильні середовища. Біохімічні властивості: ізолят мікроорганізму Lactobacillus rhamnosus 26 гомоферментативний, розкладає з утворенням кислоти без газу глюкозу, лактозу і рамнозу. Згортає знежирене молоко через 48-60 години, утворює кислоту з кислотністю 180° за Тернером. Біологічні властивості: ізолят мікроорганізму Lactobacillus rhamnosus 26 не є патогенним для тварин, у тому числі для білих мишей, морських свинок та котів у дозі 1 млрд. мікробних клітин при внутрішньочеревному введенні. Антагоністичні властивості: ізолят бактерії Lactobacillus rhamnosus 26 має виражену антагоністичну активність у відношенні до патогенних і умовно патогенних мікроорганізмів (Е. соlі серогруп О8, О18, О26; Е. aerogenes; P. aeruginosa; С. freundii; P. vulgaris; P. mirabilis; S. uberis; S. pyogenes; S. aureus; С albicans), які найчастіше обумовлюють гнійні рани у котів. Адгезивні властивості: ізолят бактерії Lactobacillus rhamnosus 26 має високі адгезивні індекси у відношенні до еритроцитів теляти, кози, вівці, кота та кролика. Чутливість до антибіотиків: при діскдифузійному тесті ізолят мікроорганізму Lactobacillus rhamnosus 26 був стійким до пеніци 54994 4 ліну, оксациліну, амоксіциліну, стрептоміцину, доксіцикліну, гентаміцину, лінкоміцину, левоміцетину, цефазоліну, цефтріаксону, енрофлоксацину, тілозіну, метронідазолу. Це дозволяє використовувати ізолят бактерії Lactobacillus rhamnosus 26 при лікуванні гнійно-запальних процесів м'яких тканин у котів разом із антибіотиками. Антигенні властивості: ізолят бактерії Lactobacillus rhamnosus 26 не вивчались. Стабільність основних властивостей ізоляту: ізолят бактерії Lactobacillus rhamnosus 26 зберігає свої властивості в знежиреному молоці в умовах рефрижератору за температури +4-6 °С протягом 6 місяців. Стабільність генетичних властивостей: у дослідного ізоляту не спостерігається дисоціація протягом 6 місяців при періодичних пересівах у знежирене молоко. Ізолят вільний від іншої бактерійної мікрофлори та грибів. Середовища для культивування ізоляту: для вивчення і перевірки культуральних властивостей використовують живильні середовища MRS-2, MRS-4, агар з гідролізованим молоком. Поточна підтримка бактерій проводиться вирощуванням на знежиреному молоці, рН 7,0 у пробірках при 37 °С на протязі 24-48 годин. Основні умови зберігання: культури бактерій вирощують у знежиреному молоці і зберігають в холодильнику за температури +4-6 °С, або при кімнатній температурі. Пересів для збереження життєдіяльності і біохімічних властивостей проводять на знежирене молоко через 30-35 діб. Приклад 1. Визначення біохімічної активності ізоляту бактерії Lactobacillus rhamnosus 26. З добових культур бактерій Lactobacillus rhamnosus, що вирощені на живильному середовищі, робили висіви в пробірки із знежиреним молоком (доза висіву - 0,2 см3 на 5 см3 молока). Засіяні лактобактерії повинні згорнути знежирене молоко за 48-72 години з утворенням характерного суцільного згустку без пухирців газу. Лактобактерії, які не відповідали вимогам, бракували. Приклад 2. Визначення нешкідливості ізоляту бактерії Lactobacillus rhamnosus 26. Для перевірки на нешкідливість білим мишам, морським свинкам та котам, у кількості по 3 тварини ізолят мікроорганізму Lactobacillus rhamnosus вводили у дозі 1 млрд. мікробних клітин внутрішньочеревинно. Спостереження за тваринами проводили протягом трьох діб. Тварини залишились живими. При загибелі тварин дослід повторюють на подвійній кількості макроорганізмів. У повторному досліді тварини повинні залишитись живими. При загибелі хоч однієї тварини, ізолят лактобактерії бракують. Ізолят бактерії Lactobacillus rhamnosus 26 може бути використаний в якості пробіотичного препарату для лікування гнійних ран у котів. 5 Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 54994 6 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601