Спосіб прогнозування перебігу захворювання у хворих на рак молочної залози

Спосіб прогнозування перебігу захворювання у хворих на рак молочної залози, який відрізняється тим, що біопсійний або післяопераційний 3 В основу корисної моделі поставлено задачу удосконалення способу прогнозування перебігу захворювання у хворих на РМЗ шляхом визначення швидкості генерування супероксидних радикалів клітинами пухлини в біопсійному або післяопераційному матеріалі та рівнів окисного пошкодження ДНК у добовій сечі, за якими оцінюють фундаментальні зрушення в організмі хворих та формують прогноз перебігу захворювання. Поставлена задача вирішується тим, що спосіб прогнозування перебігу захворювання у хворих на рак молочної залози базується на вивченні біопсійного та післяопераційного матеріалу, який перетворюють на гомогенат і в ньому визначають швидкість генерування супероксидних радикалів, а в добовій сечі визначають рівень маркера окисного пошкодження ДНК - у нмолях 8-оксогуаніну (8oxoG), і при значеннях швидкості генерування супероксидних радикалів клітинами пухлини < 3,0 нМоль/хв. • г сирої тканини і рівня утворення 8oxoG в організмі хворого < 5,0 нМ/доба • кг маси тіла прогноз перебігу захворювання оцінюють як позитивний, а при значеннях  3,0 для пухлини і  5,0 для сечі - як негативний. Оцінка наведеним способом прогнозу перебігу захворювання у хворих на РМЗ дає можливість відслідковувати в кількісному вимірі в динаміці лікування стан систем генерування супероксидних радикалів та їх вплив на перебіг захворювання. Оцінка швидкості окисного пошкодження ДНК та активності систем генерування супероксидних радикалів у тканині пухлини в онкологічних хворих є сучасним інтегральним показником, який дає можливість визначити основну характерну ознаку злоякісної пухлини, а саме пухлинну прогресію, зокрема метастазування, та резистентність до цитостатичних агентів, що є основною перевагою запропонованого методу. Показники рівня швидкості генерування супероксидних радикалів клітинами пухлини та окисного пошкодження ДНК в організмі хворого знаходяться у прямо пропорційній залежності між метастатичним потенціалом пухлини, її злоякісністю та визначають напрямок прогресування і цим визначають прогноз перебігу захворювання. Високі рівні супероксидних радикалів в організмі та, зокрема, у злоякісній пухлині відображають рівень клітинної гіпоксії та рівень деградації міжклітинного матриксу в тканинах організму, ступінь злоякісності пухлин та її метастатичний потенціал, напрямок прогресування та резистентність до хіміотерапії. Спосіб що заявляється, забезпечує точний прогноз перебігу захворювання у хворих на РМЗ, що дасть можливість покращити лікування цього надзвичайно складного контингенту хворих. Спосіб здійснюється наступним чином. Під час операції 250 мг пухлинної тканини (або біопсійний матеріал) швидко (15 с) гомогенізують на льоду в скляному гомогенізаторі з додаванням 2,0 мл фосфатного буфера з рН = 7,4. Отриманий гомогенат пухлини фільтрують через два шари марлі, додають 20 Моль спінового уловлювача 5.5-dimethyl-1-pyrroline N-oxide (DMPO) (виробництва фірми Sigma) і реєструють швидкість генерування супероксидних радикалів на радіоспектро 66970 4 метрі електронного парамагнітного резонансу (ЕПР) при кімнатній температурі. Одночасно у хворого досліджують рівень окисного пошкодження ДНК, визначаючи маркер 8oxoG в добовій сечі. Для цього 20 мл добової сечі фільтрують через фільтрувальний папір та пропускають через колонку для твердофазної екстракції 8-oxoG. Визначення кількісного рівня окисного пошкодження ДНК в організмі хворого проводиться методом оптичної спектрофотометрії на спектрофотометрі (наприклад, марки СФ-46) з реєстрацією поглинання при 250, 260, 280 і 293 нм. Рівень утворення 8-oxoG в клітинах організму визначається за формулою: V   C1  V1  нМ / доба  кг маси тіла (1) Rex  Vappl  W де V - загальний об'єм сечі, мл; V1 - об'єм сечі, з якого виділяли оксидномодифікований гуанін, мл; Vappl - об'єм сечі, який аналізується на колонці, мл; W - маса тіла, г; C1 - концентрація 8oxoG. Межа розподілу між умовно "сприятливим" та "несприятливим" рівнями швидкості генерування супероксидних радикалів в пухлині складає 3,0 нМоль/хв. • г сирої тканини (діапазон можливих значень 1,2-8,0) та 8-oxoG в сечі 5,0 нМ/доба • кг маси тіла (діапазон можливих значень 3,8-16,0) для всіх обстежених хворих, що відповідає медіані для кожного вищевказаного співвідношення. Встановлено, що для групи хворих із значеннями рівнів генерування супероксидних радикалів в пухлині < 3,0 і 8-oxoG і < 5,0 в сечі прогноз перебігу захворювання є позитивний, а із значеннями  3,0 для пухлини і  5,0 для сечі - негативний. Приклади практичного застосування. 1. Хвора Т. (історія хвороби № 2384, АК № 4849/04п, ПГЗ № 8968 - аденокарцинома молочної залози, T2N0M0 G2, стадія II), якій виконана операція з видалення пухлини. Рівень швидкості генерування супероксидних радикалів клітинами пухлини склав 1,25 нМоль/хв. • г сирої тканини. Рівень утворення 8-оксогуаніну в клітинах пухлини, що визначали по формулі (1), дорівнював 1,95 нМ/доба • г сирої тканини. За таких умов тривалість життя хворої склала 248 тижнів. 2. Хвора З. (історія хвороби № 8073, АК № 584604, ПГЗ № 17062 - аденокарцинома молочної залози, T3N2M0, G2, стадія ІІІВ), якій виконана операція з видалення пухлини. Рівень швидкості генерування супероксидних радикалів клітинами пухлини склав 5,4 нМоль/хв. • г сирої тканини. Рівень швидкості утворення маркера окисного пошкодження ДНК у цієї хворої склав 13,6 нМ/доба • кг маси тіла. За таких умов тривалість життя хворої склала 48 тижнів. 3. Хвора М. (історія хвороби № 3129, АК № 344613, ПГЗ № 6786 - аденокарцинома молочної залози, T2N0M0, G2, стадія II), якій виконана операція з видалення пухлини. Рівень швидкості генерування супероксидних радикалів клітинами пухлини склав 2,8 нМоль/хв. • г сирої тканини. Рівень швидкості утворення маркера окисного пошкодження ДНК у цієї хворої склав 4,6 нМ/доба • кг 5 маси тіла. За таких умов тривалість життя хворої склала 139 тижнів. Клінічну апробацію способу проведено на базі кафедри онкології Національної медичної академії післядипломної освіти ім. П. Л. Шупика. Дослідження проведені у 18 хворих на РМЗ. Продемон Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська 66970 6 стровано, що спосіб точний, високоінформативний, пов'язаний з невеликими матеріальними витратами для його виконання, що свідчить про можливість широкого використання його в клінічній практиці. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601