Спосіб якісного мікрогістохімічного виявлення піролів і піроловмісних сполук при отруєнні великої рогатої худоби піролізидиновими алкалоїдами
Номер патенту: 66996
Опубліковано: 25.01.2012
Автори: Захар'єв Андрій Вікторович, Ульяницька Анастасія Юріївна, Щетинський Ігор Михайлович, Ірніденко Євген Вікторович
Формула / Реферат
Спосіб якісного мікрогістохімічного виявлення піролів і піроловмісних сполук при отруєнні великої рогатої худоби піролізидиновими алкалоїдами, який відрізняється тим, що їх пошук проводять безпосередньо у гістологічних зрізах, отриманих з нефіксованого матеріалу після ущільнення зразків підморожуванням, шляхом постановки якісних аналітичних реакцій з солянокислим розчином n-диметиламінобензальдегіду з окисом селену у водному розчині, з ізатином, і реакції з хлоридом ртуті(П), що дозволяє знайти зв'язок між гістопатологією і патогеном, що викликає ці патології.
Текст
Спосіб якісного мікрогістохімічного виявлення піролів і піроловмісних сполук при отруєнні великої 3 Задачею корисної моделі є розробка методу пошуку піролу та його сполук, в гістологічних зрізах на основі використання тих хімічних визначень, що застосовуються в якісних аналітичних реакціях на піроли. Поставлена задача вирішується тим, що для якісного мікрогістохімічного виявлення піролів і піроловмісних сполук при проведенні патоморфологічних досліджень, згідно з корисною моделлю, їх пошук проводять безпосередньо у гістологічних зрізах, отриманих з нефіксованого матеріалу після ущільнення зразків підморожуванням, шляхом постановки якісних аналітичних реакцій з солянокислим розчином nдиметиламінобензальдегіду, з окисом селену у водному розчині, з ізатином, і реакції з хлоридом ртуті(П), що дозволяє знайти зв'язок між гістопатологією і патогеном, що викликає ці патології. У серії дослідів (матеріалом були фрагменти печінки і інших органів від трупів тварин, що загинули у результаті гострих і хронічних отруєнь піролізидиновими алкалоїдами чорнокореня лікарського і жовтозілля лучного): 1) проводилось патогістологічне дослідження змін, що властиві для цих отруєнь і 2) проводився пошук піролу і піроловмісних сполук у якісних аналітичних реакціях на паралельно отриманих гістологічних зрізах. У результаті проведених досліджень було визначено, що у випадку важких форм отруєння піролізидиновими алкалоїдами у печінці виявляються піроли і піроловмісні сполуки, які офарблювалися в вище зазначених аналітичних реакціях. Приклад конкретного виконання Обов'язковою умовою отримання об'єктивного результату при постановці реакцій на піроли на патогістологічному рівні є, по-перше, отримання зрізу з нативного, нефіксованого матеріалу, а подруге, матеріал слід ущільнювати тільки шляхом його підморожування. Для виконання цих умов висічений з органів матеріал - платівка товщиною не більше 0,5 см. вкладається на заморожуючий столик ТОС-2 з селенітовим вирівнювачем струму і з відведенням тепла за рахунок проведення через столик водопровідної води, для досягнення глибокого і повного підморожування краще через столик пропускати воду за допомогою ультратермостата, у ємність якого додають лід. Різання здійснюється на санному мікротомі столик монтується на місці його препаратоутримувального пристрою, у вільну гільзу цього пристрою поміщується шток заморожуючого столика. Для постановки реакції отриманий зріз переноситься на предметне скельце, після цього на сам зріз за допомогою очної піпетки наносять відповідні реактогени, їх надлишок видаляють піпеткою або фільтрувальним папером. Для мікроскопії оброблених зрізів використовують мікроскоп з малим збільшення, або МБС-2. Порядок постановки реакції: 1. Висікання матеріалу; 2. Підморожування; 3. Різання; 66996 4 4. Перенесення зрізу одразу після його отримання на предметне скельце; 5. Поставлення реакцій: 5.13 реактивом Єрліха (з nдиметиламінобензальдегідом). Реактив готують шляхом розчинення 0,5 г nдиметиламінобензальдегіду у 75 мл розбавленої соляної кислоти. Постановка реакції: а) на отриманий заморожений зріз наносять краплину 96° етилового спирту, надлишок спирту випаровується або видаляється фільтрувальним папером; б) на зріз наносять 1-2 краплини реактиву Ерліха. Результат реакції: пірол і піроловмісні сполуки дають у препаратах червоне офарблення. 5.2 Реакція з окисом селену. Робочі розчини: а) 1,0 г окису селену розчиняють у 10 мл дистильованої води, б) концентрована азотна кислота. Постановка реакції: а) на отриманий заморожений зріз наносять краплину 96° етилового спирту, надлишок спирту випаровується або видаляється фільтрувальним папером; б) на зріз наносять 3-4 краплини розчину окису селену і 1 краплину концентрованої азотної кислоти; в) предметне скельце на якому ставиться реакція підігрівається до відходження парів. Результат реакції: пірол і піроловмісні сполуки дають у препаратах фіолетове офарблення. 5.3 Реакція з ізатином. Робочі розчини: а) 0,5 г ізатину розчиняють у 50 мл дистильованої води, б) розбавлена сірчана кислота. Постановка реакції: а) на отриманий заморожений зріз наносять краплину 96° етилового спирту, надлишок спирту випаровується або видаляється фільтрувальним папером; б) на зріз наносять 1-2 краплини розчину ізатину і 1 краплину розбавленої сірчаної кислоти; в) зрізи витримують 3-4 хвилини. Результат реакції: пірол і піроловмісні сполуки дають у препаратах темно-сине офарблення. 5.4 Реакція з хлоридом ртуті (II). Робочі розчини: а) 0,4 г хлориду ртуті розчиняють у 10 мл дистильованої води, б) льодова оцтова кислота. Постановка реакції: а) на отриманий заморожений зріз наносять краплину 96° етилового спирту, надлишок спирту випаровується або видаляється фільтрувальним папером; б) на зріз наносять 1 краплину льодової оцтової кислоти і 1 краплину розчину HgCL2; в) зрізи витримують 2-3 хвилини. Результат реакції: пірол і піроловмісні сполуки дають появу на препаратах аморфних осадів. Таким чином, розроблений спосіб якісного мікрогістохімічного виявлення піролів і піроловмісних сполук дозволяє виявляти зазначені сполуки безпосередньо у гістологічних зрізах тканин. Джерела інформації. 1. Бобрівник Л. Д. Органічна хімія /Л. Д. Бобрівник, В. М. Руденко, Г. О. Лезенко. – К.: Ірпінь, 2002.-543 с 5 2. Келина Н. Ю. Токсикология в таблицах и схемах / Н. Ю. Келина, Н. В. Безручко. - Ростов-наДону: Феникс, 2006.-142 с. 3. Кононський О. І. Органічна хімія / О. І. Кононський. – К.: Дакор, 2003.-567 с. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун 66996 6 4. Юровская М. А. Пиррол / М. А. Юровская // Химическая энциклопедия. -[гл. ред. И. Л. Кнунянц]. - Т. 3.-1992. - С. 1078-1080. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601
ДивитисяДодаткова інформація
Назва патенту англійськоюMethod for qualitative micro-histochemical detection of pyrols and pyrol-containing compounds at cattle poisoning with pyrolizidine alkaloids
Автори англійськоюSchetynskyi Ihor Mykhailovych, Ulianytska Anastasia Yuriivna, Irnidenko Yevhen Viktorovych, Zakhariev Andrii Viktorovych
Назва патенту російськоюСпособ качественного микрогистохимического выявления пиролов и пиролосодержащих соединений при отравлении крупного рогатого скота пиролизидиновыми алкалоидами
Автори російськоюЩетинский Игорь Михайлович, Ульяницкая Анастасия Юрьевна, Ирниденко Евгений Викторович, Захарьев Андрей Викторович
МПК / Мітки
МПК: G01N 33/15
Мітки: отруєнні, піроловмісних, якісного, спосіб, піролізидиновими, сполук, піролів, виявлення, рогатої, мікрогістохімічного, худоби, великої, алкалоїдами
Код посилання
<a href="https://ua.patents.su/3-66996-sposib-yakisnogo-mikrogistokhimichnogo-viyavlennya-piroliv-i-pirolovmisnikh-spoluk-pri-otruehnni-veliko-rogato-khudobi-pirolizidinovimi-alkalodami.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Спосіб якісного мікрогістохімічного виявлення піролів і піроловмісних сполук при отруєнні великої рогатої худоби піролізидиновими алкалоїдами</a>
Попередній патент: Обертова будівельна конструкція
Наступний патент: Метод патоморфологічної діагностики варіантних форм отруєнь великої рогатої худоби піролізидиновими алкалоїдами
Випадковий патент: Спосіб визначення ударної в'язкості клеєного з'єднання деревини