Спосіб отримання протимікробного комплексу

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к получению противомикробных препаратов. Основу производства современных антибиотиков составляет использование продуктов микробного антагонизма. Однако до настоящего времени не известна возможность получения антибактериальных препаратов из химического состава микроорганизмов. Одним из перспективных направлений в создании препаратов такого рода может быть использование в качестве субстратной основы липидных фракций микроорганизмов. Целью изобретения является повышение антибактериальной активности и расширение спектра действия. Поставленная цель достигается путем использования в качестве сырья липидного субстрата из отходов микробиологического производства различных видов туберкулинов. Пример 1. 10,0г обезвреженной автоклавированием влажной массы производственных штаммов Mycobacterium tuberculosis DT/Str и Mycobacterium Bovis Vallee, полученной как балластный остаток производства туберкулина, экстрагируют 110мл смеси спирт-эфир (1:1) в течение 24ч при 38°С. После отделения надосадочной жидкости оставшуюся массу в аналогичном режиме последовательно обрабатывают хлороформом и ацетоном. Полученные порции растворенных в сольвентах фракций туберкулолипидов раздельно отгоняют при 50°С под вакуумом (10-15мм рт. ст.). В результате получают сухие навески (г): спиртоэфирная фракция - 1,56. хлороформная - 1,192, ацетоновая - 1,252. Общий выход туберкулолипидов составляет 4,0 (в граммах). Полученную навеску туберкулолипидов окисляют 3% р-ром перекиси водорода из расчета 1мл/мг при 37°С в течение 24ч в условиях шлюттелирования. После декантации раствора перекиси водорода влажную массу туберкулолипидов прогревают при 70°С в течение 45 мин для инактивации перекиси водорода. К массе туберкулолипидов добавляют 50мл 10% раствора аспарагиновой кислоты и проводят гидролиз при 38°С в течение 16 суток при шлюттелировании. Надосадочную жидкость, представляющую целевой продукт, простерилиэовывают через фильтр Зейтца и охарактеризовывают по физико-химическим и биологическим свойствам: рН 4,08, сухой остаток - 0,282г/л, С2-С7 - 4,308г % сухого остатка, альдегиды и перекисные соединения - 94,3г %, нелетучие соли - 3,23г %, соли жирных кислот - 1,02г % сухого остатка: токсичность - (ЛД50) - 4200мкг/кг массы мышей, противогрибковая активность (Candida albicans) - 68,4мкг/мл, антибактериальная активность (St. aureus) - 4.23мкг/мл. Пример 2. 10,0г обезвреженной автоклавированием массы туберкулезных бактерий аналогичным образом экстрагируют последовательным применением органических сольвентов и на выходе получают 4,085г туберкулолипидов со следующим пофракционным составом (г): спиртоэфирная фракция - 1,640, хлороформная - 1,187, ацетоновая - 1,258. После окисления 3% раствором перекиси водорода и температурной дезактивации остатков окислителя массу туберкулолипидов подвергают кислотному гидролизу 50мл 10% раствора аспарагиновой кислоты в течение 30 сут при 40°С. Полученный целевой продукт имеет следующие показатели: рН 3,84; сухой остаток - 0,289г/л; С2-С7 4,385г %, альдегиды и перекисные соединения - 96,8г %, нелетучие соли - 3,31г %, соли жирных кислот - 1,03г %, токсичность (ЛД50) - 5,044мкг/мл массы белых мышей, противогрибковая активность - 61,5мкг/мл (Candida albicans), антибактериальная активность - 3,92мкг/мл. Полученный противомикробный комплекс обладает широким спектром антибактериальной и противогрибковой активности, в том числе в отношении грамположительных и грамотрицательных бактерий и кокков, а также в отношении определенных видов патогенных грибов (табл.1 и 2). При этом действие на группу патогенных кокков проявляется в концентрациях 17,8-4,5мкг/мл. в отношении спорообраэующи х бактерий - 8,91-1,32мкг/мл, грамотрицательных бактерий - 35,6-4,5мкг/мл (табл.1). Антибактериальное действие полученного комплекса не зависит от уровня лекарственной устойчивости микроорганизмов и проявляется, в основном, бактерицидным эффектом. Комплекс активен в отношении простых и сложных ассоциаций и смешанных культур бактерий и кокков (табл.3). При исследовании селективного потенциала полученного комплекса методами пассажей в условиях постоянных и возрастающих концентраций установлено, что 50-кратный эффект пассирования не приводит к развитию лекарственной устойчивости у микроорганизмов. Фунгиста тический потенциал полученного антимикробного комплекса характеризуется способностью подавлять жизнедеятельность Candida ablicans, Tr. rubrum, M. canis, Ер. flocosum в концентрациях 17,735.5мкг/мл. Таким образом, способ позволяет получать из микробной массы новый класс биологически активных веществ, обладающих противомикробной активностью, в том числе бактерицидно способных в отношении патогенных и условно-патогенных грамположительных и грамотрицательных бактерий и кокков, а также в отношении патогенных грибов. При этом действие препарата характеризуется преимущественно бактерицидным эффектом и не зависит от уровня и спектра лекарственной устойчивости микроорганизмов. Полученный комплекс не обладает селективной активностью, что исключает возможность развития устойчивых вариантов микроорганизмов, активен в отношении ассоциаций и смешанных культур бактерий.