Препарат для лікування опіків на основі клітин хоріону, спосіб його приготування і спосіб лікування

1. Препарат для лікування опіків, який отримують з тканини хоріону, який відрізняється тим, що являє собою суспензію клітин хоріону людини з концентрацією клітин 5млн. в 1мл суспензії. 2. Спосіб одержання препарату для лікування опіків, який включає дезагрегацію тканини, фільтрацію одержаної суспензії та її кріоконсервування, який відрізняється тим, що тканину хоріону додатково обробляють 0,25% розчином трипсину при температурі 8-10°С. 3. Спосіб лікування опіків шляхом застосування препарату, який отримують з тканини хоріону, який відрізняється тим, що як такий препарат застосовують суспензію клітин хоріону людини з концентрацією клітин 5млн. в 1мл суспензії. Винахід належить до галузі медицини і може бути використаний для лікування опіків різного ступеня складності. Найбільш близьким препаратом до заявленого є препарат "Кріохор", що являє собою кріоекстракт хоріону людини [1]. Недоліком цього препарату є те, що він не містить життєздатних клітин і тому не має замісної дії. Це пов'язано з умовами одержання кріоекстракту (дворазове заморожування-відігрів). В основу винаходу поставлено задачу створити такий препарат для лікування опіків, який би містив життєздатні клітини хоріону і таким чином здійснював замісний ефект. Ця задача вирішується тим, що препарат, який отримують з тканини хоріону людини, згідно з винаходом, являє собою суспензію клітин хоріону людини з концентрацією клітин 5млн в 1 мл суспензії. Заявлений препарат "Суспензія клітин хоріону" містить повний комплекс біологічно активних ре човин і має повноцінні життєздатні клітини. Методом проточної цитофлюорометрії установлено, що 4,2% клітин препарату мають імунофенотип стовбурових клітин СД34+СД45. Ця популяція клітин є плюрипотентною і має потенціал диференціровки в спеціалізовані клітини в залежності від умов мікроотечення. Замісний ефект препарату і визначається, в першу чергу, наявністю в ньому даних клітин. Ця популяція клітин повністю зберігається при кріоконсервуванні. Найбільш близьким способом одержання препарату до заявленого є спосіб одержання препарату "Гемонейронал" [2]. Згідно зі способом тканини ембріона дезагрегують в скляному гомогенізаторі або під впливом вібрації частотою 50-90Гц у розчині Хенкса. Одержану суспензію фільтрують крізь капроновий фільтр і кріоконсервують. Однак цей спосіб є малоефективним в випадку одержання препарату з тканини хоріону. Це пов'язано з тим, що клітини хоріону, на відміну від емб (19) UA (11) 74976 (13) C2 (21) 20040806939 (22) 19.08.2004 (24) 15.02.2006 (46) 15.02.2006, Бюл. № 2, 2006 р. (72) Гончарук Олена Іванівна, Петренко Тетяна Пилипівна, Павленко Ольга Володимирівна, Парфьонова Вікторія Володимирівна, Грищенко Валентин Іванович (73) ІНСТИТУТ ПРОБЛЕМ КРІОБІОЛОГІЇ І КРІОМЕДИЦИНИ НАЦІОНАЛЬНОЇ АКАДЕМІЇ НАУК УКРАЇНИ (56) UA, A, 54248, 17.02.2003 SU, A1, 1 432 844, 20.01.1996 WO, A, 00/78259, 28.12.2000 US, B1, 6 326 019, 04.12.2001 UA, A, 38604, 15.05.2001 3 74976 4 ріональних клітин, міцніше з'єднані між собою, а результатів бактеріологічного та вірусологічного даний спосіб не дозволяє порушити всі міжклітинні контролю. контакти, які являють собою спеціалізовані струкНайбільш близьким до заявленого способу літури, що утворюються цитоплазматичними мемкування опіків є спосіб лікування опіків за допомобранами і компонентами примембранних шарів гою препарату "Кріохор", який являє собою кріоексуміжних клітин [3]. В результаті препарат, одерстракт хоріону людини [4]. жаний цим способом, містить низьку кількість житОднак цей спосіб не є достатньо ефективним, тєздатних клітин (табл. 1). оскільки "Кріохор", не чинить замісної дії. Тому Задачею винаходу є створення такого способу відбувається повільне загоювання рани і досить одержання препарату "Суспензія клітин хоріону", в тяжке протікання опікової хвороби. якому застосування ферментативної обробки заЗадачею винаходу є створення такого способу безпечило би можливість підвищити кількість житлікування опіків, який би за рахунок застосування тєздатних клітин в препараті. клітинного препарату, що має замісну дію, забезЦя задача вирішується тим, що в способі одепечив скорочування строків загоювання ран і зниржання препарату, який включає дезагрегацію ження тяжкості протікання опікової хвороби. тканини, фільтрацію одержаної суспензії та її кріоЦя задача вирішується тим, що в способі лікуконсервування, згідно з винаходом, тканину хоріовання опіків шляхом застосування препарату, який ну додатково обробляють 0,25% розчином трипотримують з тканини хоріону, як такий препарат сину при температурі 8-10°С. застосовують препарат "Суспензія клітин хоріону", Ферментативна обробка тканини хоріону в що являє собою суспензію клітин хоріону людини з умовах гіпотермії дозволяє руйнувати міжклітинні концентрацією клітин 5млн в 1мл суспензії. зв'язки і при цьому зберігати високу життєздатність Застосування препарату "Суспензія клітин хоклітин. З таблиці 1 видно, що заявлений спосіб ріону" для лікування опіків дозволяє скоротити дозволяє одержати в 12 разів більше життєздатстрок загоювання ран на 10-12 днів і знизити тяжних клітин, ніж прототип. кість протікання хвороби. Спосіб здійснюють таким чином. Ефективність способу лікування за допомогою Тканину хоріону тричі промивають в стерильцього препарату досліджували на лабораторних ному фізіологічному розчині з антибіотиками, петваринах. Як об'єкт для дослідження використовуреносять в стерильний флакон з 0,25% розчином вали щурів лінії Вістар масою 150-180г, одного трипсину і витримують протягом 20 годин при 8віку, які знаходились в однакових умовах утриман10°С. Після цього розчин трипсину видаляють, а ня. Після моделювання опіку тварини були поділетканину приміщують у розчин Хенкса і проводять ні на 2 групи по 6 тварин у кожній. В першу групу дезагрегацію на магнітній мішалці без підігріву. входили тварини без лікування. Тваринам другої Після повної дезагрегації клітини осаджують шлягрупи проводили лікування із застосуванням кріохом низькошвидкісного центрифугування. Суперконсервованого препарату "Суспензія клітин хорінатант видаляють. Процедуру повторюють двічі. ону". Результати наведені в табл. 2 і 3. Дані, навеКлітинну суспензію фільтрують через стерильний дені в табл. 2, показують, що заявлений спосіб капроновий фільтр і оцінюють життєздатність клілікування забезпечує прискорення процесу загоютин. Далі суспензію приміщують в стерильні пласвання опікових ран. При цьому тяжкість протікання тикові ємності по 2мл, кріоконсервують і зберігахвороби слабо виражена, про що свідчить зниженють в умовах рідкого азоту до одержання ня показників лейкоцитів в крові тварин (табл. 3). Таблиця 1 Показники життєздатності суспензії клітин хоріону, одержаної різними способами Спосіб одержання суспензії За прототипом Заявлений Χ 5,0 64,6 Кількість життєздатних клітин, % Sx 0,2 1.3 Ρ