Спосіб одержання екзополісахариду

Спосіб одержання екзополісахариду, який включає культивування Acinetobacter sp. IMB В7005 на поживному середовищі, що містить мінеральні солі, ростові фактори, а також суміш етанолу і глюкози, який відрізняється тим, що посівний матеріал, вирощений на мінеральному середовищі з етанолом до середини експоненційної фази росту, складає 9-11% від об'єму середовища. (19) (21) a200704736 (22) 27.04.2007 (46) 25.06.2008, Бюл.№ 12, 2008 р. (72) ПИРОГ ТЕТЯНА ПАВЛІВНА, UA, ВИСЯТЕЦЬКА Н АДІЯ ВОЛОДИ МИРІВНА, U A (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ УНІВЕРСИТЕТ ХАРЧОВИХ ТЕХНОЛОГІЙ, UA (56) SU 1579059, 23.04.92. Корж Ю.В. Регуляція С2-метаболізму у Acinetobacter sp. B-7005 - продуцента екзополіса 3 83318 Спосіб здійснюється таким чином. Acinetobacter sp. 1MB В-7005 вирощують на середовищі такого складу (г/л): КН2РО4 - 6,8; КОН - 1,8; NH4NO3 - 0,3; MgSO4 x 7Н2О - 0,4; СаСl2 х 2Н2О 0,1; FeSO4 х 7Н2О - 0,001. У середовище додатково вносять 0,5% (об'ємна частка) дріжджового автолізату та 0,0006% (масова частка) пантотенату кальцію. Як джерело вуглецю та енергії використовують суміш етанолу і глюкози у концентрації 0,75% (об'ємна частка) і 0,75% (масова частка) відповідно. Як посівний матеріал використовують культур у з експоненційної фази росту (20-24 год), вирощену на мінеральному середовищі наведеного вище складу, що містить 0,5% (об'ємна частка) етанолу як джерело вуглецевого живлення. Культивування здійснюють у колбах об'ємом 750 мл з 100 мл середовища на качалці (220об/хв.) при 30°С, рН 6,8-7,0 упродовж 120год. Використання нового способу дає змогу підвищити майже у 1,3 раза кількість синтезованого полісахариду (з 7,2 до 9,2г/л) і його вихід субстрату (з 53 до 68%). Приклад 1. Залежність синтезу полісахариду Acinetobacter sp. 1MB B-7005 від способу підготовки посівного матеріалу Культивування бактерій здійснюють в умовах, описаних вище. Як джерело вуглецю і енергії використовують суміш етанолу і глюкози у концентрації 0,75% (об'ємна частка) і 0,75% (масова частка) відповідно. Як посівний матеріал використовують добову культур у, вирощену на агаризованому середовищі (МЛА), а також культуру з експоненційної фази росту (24 год.), вирощену 4 на мінеральному середовищі наведеного вище складу, що містить як джерело вуглецевого живлення такі субстрати: етанол (0,5%, об'ємна частка), глюкозу (0,5%, масова частка), суміш етанолу і глюкози у концентрації 0,5% (об'ємна частка) і 0,5% (масова частка) відповідно. Кількість посівного матеріалу становить 10% від об'єму середовища. Концентрацію біомаси визначають за оптичною густиною клітинної суспензії з наступним перерахунком на абсолютно суху біомасу клітин (АСБ) у відповідності з калібрувальним графіком. Ефективність трансформації вуглецю субстратів в ЕПС оцінюють за наступними показниками: кількість синтезованих ЕПС, вихід ЕПС від субстрату, ЕПС-синтезувальна здатність. Кількість синтезованого полісахариду встановлюють ваговим методом. ЕПС-синтезувальну здатність розраховують як відношення кількості синтезованого ЕПС до біомаси та виражають у г ЕПС/ г АСБ. Концентрацію етанолу в культуральній рідині визначають за методом газорідинної хроматографії, глюкози - за глюкозооксидазним методом. Показники синтезу полісахариду залежно від способу підготовки посівного матеріалу наведено у табл. 1. З даних, наведених у табл. 1, видно, що показники синтезу полісахариду є найвищими за використання посівного матеріалу, вирощеного на середовищі з етанолом. Порівняно з прототипом кількість синтезованого полісахариду збільшується майже у 1,3 раза, а його вихід від субстрату - з 53 до 68%. Таблиця 1 Синтез полісахариду Acinetobacter sp. 1MB В-7005 на суміші етанолу і глюкози залежно від способу підготовки посівного матеріалу Джерело вуглецю при одержанні посівного матеріалу МП А (прототип) Етанол, 0,5% Глюкоза, 0,5% Етанол, 0,5% + глюкоза, 0,5 % Показники процесу ЕПС, г/л Вихід ЕПС від субстрату, % 7,2 53,3 9,2 68,1 7,9 58,5 8,5 63,0 Біомаса, г/л 1,9 1,2 1,5 1,8 Приклад 2. Залежність синтезу полісахариду Acinetobacter sp. 1MB B-7005 від фізіологічного стану посівного матеріалу Культивування бактерій здійснюють в умовах, описаних вище. Як посівний матеріал використо вують культуру з початку, середини експоненційної та початку стаціонарної фази росту, вирощену на середовищі з етанолом (0,5%). Кількість посівного матеріалу становить 10%. Таблиця 2 Синтез полісахариду Acinetobacter sp. 1MB В-7005 на суміші етанолу і глюкози залежно від фізіологічного стану посівного матеріалу Фаза росту посівного матеріалу Початок експоненційної фази Середина експоненційної фази Початок стаціонарної фази ЕПС, г/л 7,3 9,2 7,8 Показники процесу Вихід ЕПС від субстрату, % 54,1 68,1 57,8 5 83318 Таким чином, за використання посівного матеріалу з середини експоненційної фази росту показники синтезу полісахариду є вищими порівняно із застосуванням інокуляту з початку експоненційної і стаціонарної фаз росту. Приклад 3. Залежність синтезу полісахариду Acinetobacter sp. 1MB B-7005 від концентрації посівного матеріалу 6 Культивування бактерій здійснюють в умовах, описаних вище. Як посівний матеріал використовують культур у з середини експоненційної фази росту, вирощену на середовищі з етанолом (0,5%). Кількість посівного матеріалу становить 5, 10 і 15% від об'єму середовища. Таблиця 3 Синтез полісахариду Acinetobacter sp. 1MB В-7005 на суміші етанолу і глюкози залежно від концентрації посівного матеріалу Концентрація посівного матеріалу, % 5 10 15 Таким чином, показники синтезу полісахариду є найвищими за використання посівного матеріалу з середини експоненційної фази у концентрації 10%. Комп’ютерна в ерстка В. Клюкін Показники процесу Вихід ЕПС від субстрату, % 52,6 68,1 66,7 ЕПС, г/л 7,1 9,2 9,0 Отже, використання запропонованого способу дає змогу підвищити порівняно з прототипом кількість синтезованого полісахариду у 1,3 раза (з 7,2 до 9,2г/л), а його ви хід від субстрату з 53 до 68%. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601