Спосіб отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку коней із високою проліферативною активністю

Реферат: Спосіб отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку коней із високою проліферативною активністю включає отримання аспірату кісткового мозку, розбавлення фосфатно-буферним розчином, центрифугування протягом 25 хв на фікол-верографіновому градієнті щільності. При цьому аспірат кісткового мозку розбавляють у фосфатно-буферному розчині у співвідношенні 1:5, а центрифугування проводять на фікол-верографіновому градієнті щільності ρ=1,076 при відцентровій силі у 300 g. UA 89267 U (12) UA 89267 U UA 89267 U 5 10 15 20 25 30 35 40 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини та біотехнології, зокрема до способів збагачення популяції клітин кісткового мозку коней мононуклеарами з високою проліферативною активністю. Відомий аналог (патент № 50905 від 25.06.2010, бюл. № 12. Спосіб отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку собак із високою проліферативною активністю), при якому отриманий кістковий мозок собак піддають попередній 12-годинній холодній трипсинізації, розбавляють у фосфатно-буферному розчині у співвідношенні 1:7 та центрифугують на фіколверографіновому градієнті щільності ρ=1,074 при відцентровій силі у 1200 g. Недоліком даного способу є додаткова трата часу на трипсинізацію кісткового мозку та низька проліферативна активність отриманої фракції мононуклеарних клітин. Задачею корисної моделі є вдосконалення способу отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку коней, збагаченої популяцією МСК, який може бути використаний для напрацювання біологічного матеріалу для подальшого його застосування при патологіях опорно-рухового апарату тварин. Поставлена задача вирішується тим, що у способі отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку коней із високою проліферативною активністю, який включає отримання аспірату кісткового мозку, розбавлення фосфатно-буферним розчином, центрифугування протягом 25 хв. на фікол-верографіновому градієнті щільності, згідно з корисною моделлю, його розбавляють у фосфатно-буферному розчині у співвідношенні 1:5, а центрифугування проводять на фікол-верографіновому градієнті щільності ρ=1,076 при відцентровій силі у 300 g. Запропонований спосіб дає змогу відділити мононуклеарні клітини від еритроцитів та отримати фракцію мононуклеарних клітин з високою проліферативною активністю. 3 3 Спосіб здійснюється наступним чином. У стерильну пробірку об'ємом 15 см вносять 4 см 3 фікол-верографінового градієнта щільності (ρ=1,076). Обережно нашаровують 8 см розбавленого фосфатно-буферним розчином аспірату кісткового мозку на розчин фіколу. Відцентрифуговують при 300 g протягом 25 хв. Після центрифугування знімають верхній шар надосадової рідини, не порушуючи цілісності розташованого нижче шару мононуклеарних клітин. Обережно переносять шар мононуклеарних клітин у нову стерильну центрифугувальну 3 пробірку, додавши до нього 10 см фосфатно-буферного розчину. Клітини розпіпетовують та відцентрифуговують при 300 g протягом 5 хв. Відмивання клітин повторюють двічі. Для подальшого застосування ресуспендують осад клітин у відповідній кількості живильного середовища. При проведенні досліду було апробовано градієнти щільності (ρ=1,074; ρ=1,076; ρ=1,078; ρ=1,080;) при відцентровій силі центрифугування у 300 g. Фракції мононуклеарних клітин, отриманих при різних параметрах центрифугування, культивують у живильному середовищі (DMEM - 80 %, ембріональна сироватка теляти - 20 %). Оцінку результату досліду здійснюють через 11 діб культивування на основі проліферативної активності отриманих фракцій клітин. За допомогою способу отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку коней із високою проліферативною активністю вдається скоротити час, необхідний для напрацювання біомаси клітин, а отже зменшити витрати на проведення терапевтичних маніпуляцій та підвищити їх ефективність. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 45 50 Спосіб отримання фракції мононуклеарних клітин кісткового мозку коней із високою проліферативною активністю, який включає отримання аспірату кісткового мозку, розбавлення фосфатно-буферним розчином, центрифугування протягом 25 хв на фікол-верографіновому градієнті щільності, який відрізняється тим, що аспірат кісткового мозку розбавляють у фосфатно-буферному розчині у співвідношенні 1:5, а центрифугування проводять на фіколверографіновому градієнті щільності ρ=1,076 при відцентровій силі у 300 g. Комп’ютерна верстка С. Чулій Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 1