Спосіб одержання засобу з протизапальною, антимікробною та діуретичною дією із листя груші

1. Спосіб одержання засобу з протизапальною, антимікробною та діуретичною дією, що включає екстракцію рослинної сировини спиртом етиловим з подальшим упарюванням одержаного екстракту, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують листя груші звичайної, екстракцію проводять 10% спиртом етиловим при відношенні сировини до екстрагента (1:9) – (1:11) протягом 9-11 годин, одержаний екстракт упарюють до 1/18-1/20 попереднього об'єму. 2. Спосіб за п.1, який відрізняється тим, що сировину піддають екстракції 5-7 разів новими порціями екстрагенту, а одержані екстракти об'єднують. Винахід відноситься до фармації та медицини, а саме до лікарських препаратів рослинного походження, і може бути використаний для лікування запальних захворювань сечовидільної системи. Арсенал фітопрепаратів, що мають комплексну протизапальну, антимікробну та діуретичну дію досить обмежений. Добре відомо, що діуретичну активність мають настої та відвари з листя мучниці звичайної та брусниці, у яких діючою речовиною є глікозид арбутин [1]. Проте зазначені засоби не мають вираженої протизапальної та антимікробної дії, до того ж використання листя даних рослин є економічно невигідним через обмежене поширення цих видів в Україні. Відомі способи одержання з листя рослин різних родів засобів з комплексною, в тому числі про тизапальною дією. Наприклад, відомий спосіб одержання поліфенольного комплексу "Флавітин" з протизапальною, анальгетичною, противиразковою та антиоксидантною активністю [2], який полягає у екстракції листя винограду сорту Дабугі 50% спиртом етиловим при співвідношенні сировина: екстрагент 1:10 з подальшим упарюванням одержаного екстракту до водного залишку, фільтрацією та ресорбцією фенольних сполук з осаду водою, об'єднанням фільтрату з одержаним водним розчином, упарюванням і сушінням. Засіб, одержаний наведеним способом, не має діуретичної та антимікробної дії. З точки зору технологічних особливостей даного способу він є багатостадійним та потребує підвищеного використання спирту етилового. При цьому спосіб передбачає використання сировини, культивування якої обмежене умовами субтропіків. UA (11) 77347 (13) (21) a200503996 (22) 26.04.2005 (24) 15.11.2006 (46) 15.11.2006, Бюл. № 11, 2006 р. (72) Кисличенко Вікторія Сергіївна, Новосел Олена Миколаївна, Яковлєва Лариса Василівна, Самохін Андрій Олександрович (73) НАЦІОНАЛЬНИЙ ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ УНІВЕРСИТЕТ (56) UA A 59681 15.09.2003 Лікарські рослини. За ред. А.М. Гродзинського Київ, Головна ред. Укр. рад. енциклопедії ім. М.П. Бажана, 1990, с.129-130. SU A1 1319351 22.07.1985 Лавренова Г.В., Лавренов В.К. Энциклопедия лекарственных растений. Т.1.-Изд. "Донеччина", Донецк, 1997.- с. 240-241 C2 2 (19) 1 3 77347 4 Завданням винаходу є створення способу ціями екстрагенту при вище наведеному співвідодержання засобу з протизапальною, антимікробношенні 5-7 разів. Об'єднання одержаних екстракною та діуретичною дією, в якому шляхом викоритів забезпечує збільшення кількісного виходу та стання в якості рослинної сировини листя груші якість екстракту. звичайної та проведення екстракції 10% спиртом Згідно з заявленим способом одержаний екстетиловим при заданих умовах, досягають одерракт упарюють до 1/18-1/20 об'єму. жання економічним доступним способом ефективЗаявлений спосіб здійснюють наступним чиного природного засобу з вираженою фармаколоном. Сухе листя груші звичайної подрібнюють до гічною дією для лікування захворювань розміру часток 3-5мм, засипають в екстрактор, сечовидільної системи. заливають 10% спиртом етиловим при співвідноПоставлене завдання вирішується таким чишенні сировина: екстрагент 1:9-1:11, екстрагують ном, що у способі одержання засобу з протизапапри кімнатній температурі протягом 10-12 годин. льною, антимікробною та діуретичною дією, що Зливають одержаний екстракт. Процес повторювключає екстракцію рослинної сировини спиртом ють 5-7 разів з використанням нових порцій екстетиловим з подальшим упарюванням одержаного рагенту до повного вилучення біологічно активних екстракту, згідно з винаходом передбачено викоречовин з заданими активностями з сировини. ристання в якості рослинної сировини листя груші Одержані екстракти об'єднують і упарюють до звичайної, проведення екстракції 10% спиртом 1/18-1/20 попереднього об'єму. етиловим при співвідношенні сировини до екстраВ результаті здійснення заявленого способу генту як 1:9-1:11 протягом 9-11 годин, упарюванодержують засіб з протизапальною, антимікробням одержаного екстракту до 1/18-1/20 об'єму. З ною та діуретичною активністю у формі рідкого метою вичерпної екстракції комплексу біологічно екстракту темно-коричневого кольору, з приємним активних речовин з сировини винаходом передбагрушевим запахом, кислувато-гіркуватий на смак, з чено, що сировину піддають екстракції 5-7 разів солонуватим присмаком з наступними технологічновими порціями екстрагенту, а одержані екстракними та аналітичними параметрами: питома вага ти об'єднують. 1,11г/см , сухий залишок - 24,3%, вміст спирту Відоме використання у народній медицині етилового - 0,4%, кількісний вміст діючих речовин: плодів груші звичайної для лікування різних запаарбутину - 2,06%, флавоноїдів - 1,02%, дубильних льних процесів, зокрема запалення сечостатевої речовин - 6,24%, оксикоричних кислот - 2,88%. системи, що обумовлено вмістом у плодах груші Винахід ілюструється прикладами. різних груп біологічно активних речовин. Високий Приклад 1 вміст калію робить грушу добрим сечогінним засо1000г сухого листя груші звичайної подрібнюбом [3]. Листя груші вивчені недостатньо. З літеравали до розміру часток 3-5мм, заливали 6500мл турних джерел відомо, що вони містять вуглеводи, 10% спирту етилового і настоювали протягом 10 аскорбінову кислоту, різні класи фенольних спогодин. Отриманий екстракт зливали в ємкість для лук [3]. збору екстракту, а сировину заливали новою порАвторами вперше запропоновано використанцією екстрагенту у тій же кількості. Екстракцію поня листя груші звичайної для одержання засобу з вторювали 5 разів. Отримані екстракти об'єднувапротизапальною, антимікробною та діуретичною ли і упарювали до 1/19 об'єму. Було отримано дією. 1000мл екстракту. Дана сировина є дешевою, доступною, може Приклад 2 заготовлятися після збору врожаю плодів або у Протизапальну дію засобу у формі екстракту, період листопаду. одержаного за заявленим способом, вивчали на Експериментальним шляхом було встановлемоделі антиексудативного набряку, який викликано, що оптимальним екстрагентом для листя груші ли введенням 1% розчину карагеніну щурам субпзвичайної є 10% спирт етиловий. При цьому досялантарно у задню лапу в дозі 0,1мл/тварину. гається ефективна екстракція необхідного комплеЗасіб у формі екстракту, одержаний за заявксу біологічно активних речовин з сировини при леним способом, та настій із листя мучниці як преекономному витрачанні екстрагенту. парат порівняння вводили внутрішньошлунково в При проведенні дослідів було визначено співдозі 1,05мл/к, до ін'єкції карагеніну. Про розвиток відношення сировини до екстрагенту як 1:9-1:11. набряку судили по різниці об'ємів лап з набряком При зменшенні кількості екстрагенту погіршується та без ( V) в динаміці. Протизапальну активність процес екстракції (до повного поглинання екстраоцінювали за антиексудативною дією препаратів і генту сировиною). Збільшення екстрагенту понад розраховували по формулі: задане співвідношення економічно недоцільне. ( Vконт- Vдослід)/ Vконт, де Експериментально визначено, що при провеVконт - різниця об'ємів лап з набряком та без у денні екстракції в одну стадію (однією порцією контрольний групі; екстрагенту) процес триває 10-12 годин. Vдослід - різниця об'ємів лап з набряком та без Для вичерпної екстракції з сировини комплектварин дослідної групи. су біологічно активних речовин з заданим спектРезультати експерименту представлені в табром фармакологічних активностей одну й ту ж лиці 1. порцію сировини піддають екстракції новими пор 5 77347 6 Таблиця 1 Протизапальна активність засобу у формі екстракту, одержаного за заявленим способом, у порівнянні з настоєм із листя мучниці звичайної Динаміка Через 1год. 10,3±0,6* (44,6%)** 15,8±1,8 (15%)** 18,6±1,6 Умови досліду Екстракт із листя груші звичайної Настій із листя мучниці звичайної Контрольна патологія протизапальної Через 2год. 15,2±1,3* (44,3%)** 23,2±2,7 (15%)** 27,3±0,8 активності V, ум. од. Через 3год. Через 4год. 15,2±0,8* 15,8±1,2* (52,5%)** (40,6%)** 25,2±2,7 25,1±2,4 (21,2%)** (12,8%)** 32±1,3 28,8±1,7 Примітки: * - відхилення вірогідне по відношенню до контрольної групи тварин, Р 0,05; ** - у порівнянні з контрольною патологією Отримані результати показали, що екстракт із листя груші виявляє виражену протизапальну дію, а настій із листя мучниці має помірну протизапальну активність. За протизапальною дією засіб, одержаний за заявленим способом, перевищує дію препарату порівняння - настій із листя мучниці - у середньому на 29,5%. Приклад 3. Антимікробну активність засобу, одержаного за заявленим способом, вивчали загальноприйнятим у мікробіологічній практиці методом дифузії в агар у дослідах in vitro. Вибір тестштамів проводили з урахуванням етіологічної структури збудників захворювань сечостатевої системи. Як тест-штами використовували еталонні штами мікроорганізмів з американської типової колекції культур: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Bacillus subtilis ATCC 6633 і клінічні штами Staphylococcus aureus кл.17, виділені з матеріалу хворих із гнійно-запальними захворюваннями сечостатевої системи. Досліди повторювали тричі у відношенні кожного штаму мікроорганізму. При проведенні досліджень по вивченню антимікробної дії засобу, одержаного за заявленим способом, використовували м'ясопептонний агар, що містить 120мг % змінного азоту. Рівень антимікробної дії оцінювали за діаметром зони затримки росту мікроорганізму навколо лунки з внесеним препаратом, оцінюючи його за наступною шкалою: діаметр зони затримки росту мікроорганізму 18 чутливий штам. Усереднені дані трьох експериментів у відношенні кожного з мікроорганізмів наведені у таблиці 2. Таблиця 2 Антимікробна дія засобу у формі екстракту, одержаного за заявленим способом Засіб Екстракт S.aureus АТСС 25923 25,0±0,2 Діаметр зони затримки росту мікроорганізму, мм P.aeruginosa АТСС 9027 25,2±0,2 15,1±0,2 18,3±0,3 S.aureus клініч. №17 Е. соli АТСС 25922 Результати проведених досліджень показали, що досліджуваний зразок засобу у формі екстракту, одержаного за заявленим способом, має широкий спектр антимікробної дії. Порівняльна оцінка рівня антимікробної активності екстракту у відношенні вивчених тест-штамів свідчить про більш виражений ефект у відношенні культур грампозитивних бактерій - S. aureus (включаючи як музейні, так і клінічні штами) і В. subtilis. Виявлену антимікробну дію екстракту можна пояснити наявністю в листі груші фенологлікозиду - арбутину, вміст якого досягає 0,0004-0,0015%, а в отриманому екстракті складає 2,06%. Приклад 4. При вивченні діуретичної дії засобу, одержаного за заявленим способом, було використано уніфіковану методичну схему. Самці щурів були розділені на 3 групи: контрольна і дві дослідних. Показники діуретичної дії, зокрема діурез, вивчали у перший день і через тиждень після початку експерименту. Для вивчення діуретичної дії в ці терміни контрольним тваринам вводили щоденно по 5мл дистильованої води, а дослідним В. subtilis АТСС 6633 20,1±0,0 - засіб у формі екстракту в дозах 1,05мл/кг і 2,9мл/кг і дистильовану воду до одержання загальної кількості рідини 5мл. Результати вивчення діуретичної дії при введенні дослідженого екстракту наведені в таблиці 3. Таблиця 3 Вивчення діуретичної дії засобу у формі екстракту, одержаного за заявленим способом Термін досліду 1 день 1 тиждень Доза засобу контроль 1,05мл/кг 2,9мл/кг. контроль 1,05мл/кг 2,9мл/кг Діурез, мл 1,45±0,19 3,63±0,62 3,42±0,77 3,12±0,70 3,62±1,22 3,62±1,22 Аналіз даних таблиці 3 свідчить, що засіб у формі екстракту, одержаний за заявленим способом, виявляє виражену діуретичну дію. Таким чином, заявлено спосіб одержання за 7 77347 8 собу з протизапальною, антимікробною та діурезастосований як самостійний лікарський засіб, так і тичною дією. Даний спосіб простий у виконанні, як діюча субстанція для створення різних лікарсьекономічно вигідний, передбачає використання ких форм. дешевої, доступної, розповсюдженої на Україні Джерела інформації: сировини, не потребує дорогих і токсичних реакти1. Государственная фармакопея СССР. Вып.2. вів, екологічно нешкідливий, може бути здійснений Общие методы анализа. Лекарственное раститев умовах хіміко-фармацевтичних підприємств з льное сырье / МЗ СССР. - 11 изд., доп. - М.: Медивикористанням стандартного обладнання. цина, 1989. - С.275-277; С.278-279. В результаті здійснення способу одержують 2. Деклараційний патент на винахід №59681 А, засіб у формі екстракту з вираженою протизапаУкраїна, МПК 7 А61К35/78, заявка №2002119121, льною, антимікробною та діуретичною активністю. заявл. 11.11.2002, опубл. 15.09.2003, Бюл. №9, Засіб нетоксичний, не викликає алергічної та уль2003р. церогенної дії, може бути рекомендований для 3. Растительные ресурсы СССР: Цветковые тривалого безпечного вживання при лікуванні хрорастения, их химический состав, использование; нічних захворювань сечовидільної системи. ОдерСемейства Hydrangeaceae-Haloragaceae. - Л.: Наужаний за заявленим способом засіб може бути ка, 1987.- С.73. Комп’ютерна верстка Т. Чепелева Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601