Селективно-діагностичне середовище для індикації бактерій групи кишкових паличок

Селективно-діагностичне середовище для індикації бактерій групи кишкових паличок, що містить пептон 1-1,1 г, натрій хлорид 0,5-0,6 г, лактозу 1-1,1 г, стерильну водопровідну воду 100-101 см , який відрізняється тим, що додатково містить алкаларилсульфонат (сульфанол) 0,5-0,6 г, глутамат натрію 0,3-0,35 г та 1,6 % розчин бромтимоловий синій 0,2-0,22 см 3 . Корисна модель відноситься до санітарної мікробіології та ветеринарно-санітарної експертизи і може бути використана для індикації бактерій групи кишкових паличок. Аналогом корисної моделі слугує середовище Кеслера, яке застосовується для індикації бактерій групи кишкових паличок в молоці та молочних продуктах, змивах [1]. До складу середовища Кеслера входять наступні компоненти: 10г пептону, 50см 3 жовчі, 1дм3 дистильованої води, 2,5г глюкози, індикатор генціан-віолет. Прототипом корисної моделі є середовище КОДА для індикації бактерій групи кишкових паличок в молоці, воді, змивах [2]. Для приготування середовища КОДА беруть 1,2% - сульфанолу, 0,5% - натрію хлориду, 1% - лактози, 1% - пептону та два індикатори - бромкрезолпурпур і метиленовий голубий. Як в аналогу так і в прототипі визначення присутності бактерій групи кишкових паличок базується на здатності цих бактерій розщепляти цукри (глюкозу, лактозу), що входять до складу вищезазначених середовищ. В результаті розкладання цукрів змінюється рН середовища, що сприяє зміні кольору індикатора. Недоліком прототипу є те, що не всі варіанти бактерій групи кишкових паличок здатні в процесі розмноження розкладати лактозу, знижувати рН середовища до рівня зміни кольору індикаторів (бромкрезолпурпурового і метиленового голубого). Тому при наявності таких бактерій колір середовища може не змінюватися, чим і спричиняється недостатня індикаційна чутливість прототипу. В основу корисної моделі покладено завдання створити середовище з підвищеною чутливістю для індикації бактерій групи кишкових паличок шляхом введення в його склад комплексної системи, що підвищує біохімічну активність мікроорганізмів і яка складається з натрію гідрокарбонату та глутамату натрію та [3], а також сульфоналу та індикатора бромтимолового голубого. Для порівняння прототипу із запропонованим середовищем досліджено 118 змивів з молочного обладнання і молока сирого. Результати дослідження наведено в табл. 1 та 2. Випробування дослідних варіантів середовища (використали різні концентрації глутамату натрію) в порівняні з прототипом ілюструється на наступних прикладах та в таблиці 1: Приклад 1. Використали середовище наступного складу: сульфанолу - 0,5%; лактози - 1 %; натрію хлориду - 0,5%; натрію карбонату - 0,2%; бромтимолового синього - 1,6% водний розчин 0,2см3 на 100см3 середовища і 0,1% глутамату натрію. Приклад 2. Використали середовище: сульфанолу - 0,5%; лактози - 1%; натрію хлориду - 0,5%; натрію карбонату - 0,2%; бромтимолового синього - 1,6% водний розчин - 0,2см3 на 100см3 середовища і 0,3% глутамату натрію. Приклад 3. Використали середовище: сульфанолу - 0,5%; лактози - 1%; натрію хлориду - 0,5%; натрію карбонату - 0,2%; бромтимолового синього - 1,6% водний розчин - 0,2см3 на 100см3 середовища і 0,5% глутамату натрію. Випробування різних варіантів середовища із со 00 со О) 10168 різною кількістю сульфанолу в їх складі в порівнянні з прототипом наведені в наступних прикладах та в таблиці 2. Приклад 4. Використали середовище: сульфанолу - 0,3%; лактози - 1%; натрію хлориду - 0,5%; натрію карбонату - 0,2%; бромтимолового синього - 1,6% водний розчин - 0,2см3 на 100см3 середовища і 0,3% глутамату натрію. Приклад 5. Використали середовище: сульфанолу - 0,5%; лактози - 1%; натрію хлориду - 0,5%; натрію карбонату - 0,2%; бромтимолового синього - 1,6% водний розчин - 0,2см3 на 100см3 середовища і 0,3% глутамату натрію. Приклад 6. Використали середовище: сульфанолу - 0,8%; лактози - 1%; натрію хлориду - 0,5%; натрію карбонату - 0,2%; бромтимолового синього - 1,6% водний розчин - 0,2см3 на 100см3 середовища і 0,3% глутамату натрію. Проведені дослідження свідчать про те, що більш ефективні показники щодо індикації бактерій групи кишкових паличок має заявлене середовище (приклад 2), яке назване нами як "живильне селективно-діагностичне середовище "СДК" (середовище для коліформних бактерій). Запропоноване середовище готують, додаючи до 100см3 стерильної водопровідної води 0,5г натрію хлориду, 0,5г сульфанолу, 0,2г карбонату натрію, 1г лактози, 0,3г глутамату натрію, 0,2см3 1,6%-ного розчину бромтимолового синього. Колір середовища - синьо-зелений. Середовище доводять до кипіння, витримують протягом 5 хвилин (автоклавування не потрібне), розливають по 5см 3 в стерильні пробірки. До 5см 3 середовища додають 1см3 молока чи його розведення, інкубують протягом 24 годин при +37°С. Зміна кольору середовища до жовтого свідчить про наявність бактерій групи кишкових паличок. Заявлене нами середовище має вищий рівень чутливості порівняно з прототипом внаслідок внесення оптимальної кількості глутамату натрію активатора біохімічної активності бактерій групи кишкових паличок, і індикатора бромтимолового синього - як більш чутливого до зміни рН середовища. Застосування середовища СДК дає змогу більш ефективно оцінювати безпеку молока сирого чи молочних продуктів. Джерела інформації: 1. ГОСТ9225-84 Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа. 2. Банникова Л.А., Королева Н.С., Семенихина В.Ф. Микробиологические основы молочного производства. - М.: Агропромиздат, 1987. - 400 с. 3. Перт Дж. Основы культивирования микроорганизмов и клеток. - М.: «Мир», 1978. - 332 с. Таблиця 1 Порівняльна характеристика різної кількості глутамату натрію в складі середовища Показники, що порівнюються Склад діагностичного середовища Мета, з якою використовується тест Прототип - середовище КОДА Пептон - 1 %, лактоза - 1%, натрію хлориду - 0,5%, сульфонол - 1,2%, індикатор: бромкрезол пурпуровий і метиленовий голубий. Для визначення титру бактерій групи кишкових паличок Колір сереТемно-фіолетовий довища Кількість се5см 3 редовища Спосіб викоВ пробірках ристання. Кількість досліджуваного 1см 3 матеріалу Температура При 37°С інкубації Тривалість Протягом 24 гоінкубації дини Приклади І II III Пептон - 1 % , лактоза 1%, натрію хлориду 0,5%, сульфонол 0,5%, індикатор: бромтимоловий голубий, натрію гідрокарбонату 0,2% + глутамату натрію-0,1%. Пептон - 1 %, лактоза 1%, натрію хлориду 0,5%, сульфонол 0,5%, індикатор: бромтимоловий голубий, натрію гідрокарбонату 0,2% + глутамату натрію - 0,3%. Пептон - 1%, лактоза 1%, натрію хлориду 0,5%, сульфонол 0,5%, індикатор: бромтимоловий голубий, натрію гідрокарбонату - 0,2% + глутамату натрію - 0,5%. Для визначення титру бактерій групи кишкових паличок Для визначення титру бактерій групи кишкових паличок Для визначення титру бактерій групи кишкових паличок Синьо-зелений Синьо-зелений Синьо-зелений 5см 3 5см 3 5см 3 В пробірках В пробірках В пробірках 1см 3 1см 3 1см 3 При 37°С При 37°С При 37°С Протягом 24 години Протягом 24 години Протягом 24 години 10168 Продовження таблиці 1 Показники, Прототип - серещо порівнюдовище КОДА І ються Оцінка результатів досліджень: - позитивний результат (середовище 75,4% 50,8% забарвлюється в жовтий колір) - негативний результат (колір сере49,2% 24,6% довища не змінюється) Наявність росту бакте- Ріст тільки бакте- Ріст тільки бактерій ПІМ ГПХ/ПІ/1 К\Лl^lrl I J-'jf I 1*1 І"! групи кишкових палишкових пали- рій групи кишкових паличок чок чок і іншої мікрофлори Кількість досліджених 118 118 проб Приклади II III 87,3% 87,3% 12,7% 12,7% Ріст тільки бактерій групи кишкових паличок Ріст тільки бактерій групи кишкових паличок 118 118 Таблиця 2 Порівняльна характеристика різної кількості сульфанолу в складі середовища Показники, що порівнюються Прототип - середовище КОДА Пептон - 1%, лактоза - 1 % , натрію хлориду - 0,5%, Склад діагносульфонол - 1,2%, стичного сеіндикатор: бромкредовища резол пурпуровий і метиленовий голубий. Для визначення Мета, з якою титру бактерій грувикористову- пи кишкових палиється тест чок Колір сереТемно-фіолетовий довища Кількість се5см 3 редовища Спосіб викоВ пробірках ристання Кількість досліджуваного 1см3 матеріалу Температура При 37°С інкубації Тривалість Протягом 24 годиінкубації ни Приклади І II III Пептон - 1 %, лактоза - Пептон - 1%, лактоза 1%, натрію хлориду - 1%, натрію хлориду 0,5%, сульфанол 0,5%, сульфанол 0,3%, індикатор: бро- 0,5%, індикатор: броммтимоловий голубий, тимоловий голубий, натрію гідрокарбонату натрію гідрокарбонату - 0,2% + глутамату 0,2% + глутамату нанатрію - 0,3%. трію - 0,3%. Пептон - 1 %, лактоза 1 %, натрію хлориду 0,5%, сульфанол 0,8%, індикатор: бромтимоловий голубий, натрію гідрокарбонату - 0,2% + глутамату натрію - 0,3%. Для визначення титру Для визначення титру бактерій групи кишко- бактерій групи кишкових паличок вих паличок Для визначення титру бактерій групи кишкових паличок Синьо-зелений Синьо-зелений Синьо-зелений 5см 3 5см 3 5см 3 В пробірках В пробірках В пробірках 1см 3 1см3 1см 3 При 37°С При 37°С При 37°С Протягом 24 години Протягом 24 години Протягом 24 години 10168 Продовження таблиці 2 Показники, Прототип - серещо порівнюдовище КОДА ються Оцінка результатів досліджень: - позитивний результат (середовище 50,8% забарвлюється в жовтий колір) - негативний результат (колір сере49,2% довища не змінюється) Наявність росту бактеРісттільки бактерій групи кирій групи кишкових шкових палипаличок чок і іншої мікрофлори Кількість досліджених 118 проб Комп'ютерна верстка А. Крулевський Приклади І II III 75,4% 87,3% 87,3% 24,6% 12,7% 12,7% Ріст бактерій групи Ріст тільки бактерій кишкових паличок, Ріст тільки бактерій групи кишкових палистафілококів і ентеро- групи кишкових паличок чок коків 118 118 Підписне 118 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП "Український інститут промислової власності", вул Глазунова, 1, м. Київ - 4 2 , 01601