Штам ентомопатогенних бактерій групи bacillus thuringiensis 0239, який використовують для приготування біопрепарату проти листогризучих шкідників сільськогосподарських культур

Штам ентомопатогенних бактерій групи Bacillus thunngiensis 0239 ПФІСГМ УААН, який використовують для одержання біопрепарату проти листогризучих ШКІДНИКІВ Винахід стосується сільськогосподарської мікробіологи, зокрема бактерій, що використовують у засобах захисту рослин від листогризучих ШКІДНИ радського жука молодшого віку в лабораторних, лабораторно-польових умовах складає 92,098,0% Технічним результатом винаходу є підвищення ефективності бактеріального препарату з штаму ентомопатогенних бактерій проти листогризучих ШКІДНИКІВ, зокрема колорадського жука Недоліками, які перешкоджають використанню Bacillus thunngiensis 98 як ефективного бактеріального препарату проти листогризучих ШКІДНИКІВ Є - низька швидкість досягнення стадії зрілості культури, - незначний вміст термостабільного екзотоксину в культуральній рідині в порівнянні з Bacillus thunngiensis 0239 В основу винаходу поставлена задача одержання штаму ентомопатогенних бактерій групи Bacillus thunngiensis 0239, який використовують для приготування біопрепарату проти листогризучих ШКІДНИКІВ сільськогосподарських культур, який є високо технологічним і ефективно діє проти колорадського жука та інших По ефективності і швидкості дії проти личинок колорадського жука молодшого віку штам Bacillus thunngiensis 0239 перевищує виробничий штам Bacillus thunngiensis 98 Біопрепарати на основі Bacillus thunngiensis є екологічно безпечними, вони не впливають на корисну ентомофауну, не накопичуються в грунтах КІВ За прототип обрано виробничий штам Bacillus thungiensis 98, про який описано у а с СРСР № 1166772 на винахід "Ентомоцидннй засіб" Культурально-морфолопчні ознаки прототипу Клггини Bacillus thungiensis 98, мають форму паличок, величиною 0,8-1,Змкм (двохдобової культури), с перитрихіально росташованими джгутиками, спороутворюючі, з біпирамідальними кристалічними включеннями, грампозитивні Культура швидкоростуча, на м'ясо-пептонному агарі (МПА) на другутретю добу утворюються колонії до 4-11мм в діаметрі, матові, округлі, із злегка звилистими краями, сірувато-кремового кольору, з зернистою поверхнею Фізюлого-бюхімічні ознаки культури Bacillus thungiensis 98 Штам синтезує ацетил-метил-карбінол, лецитиназу С, термостабільний екзотоксин, здатний до пдролггичного розщеплення крохмалю і не проявляє уреазної активності, а при гідролізі лецитину не сприяє утворенню пігменту Оптимум температури росту штаму 28°С, рН 7,6, він є факультативним аеробом Відношення до джерела вуглецю виражене у активному засвоюванні сахарози, глюкози, манози, ескуліну, саліцину Відношення до джерела азоту виражене у доброму рості на середовищах з амонійними солями, на МПА Ентомоцидна активність штаму Bacillus thunngiensis 98 по відношенню до личинок коло Поставлена задача вирішена шляхом виділення з природних популяцій комах Криму нового ефективного штаму Новий штам Bacillus thunngiensis 0239 одержано мікробіологічним виділенням ентомопатогенних бактерій групи Bacillus thunngiensis Він має такі CO о 45103 розміром 0,3-1,2мкм, рухомі завдяки джгутику /песпівпадаючі зі штамом-прстотипом властивості рггриху/ Грампозитивний, утворює спори, аероб Штами 0239 і 98 виділені з природних популяБактерії при ПОСІВІ штрихом на м'ясо-пептонному цій комах на м'ясо-пептонному агарі (МПА) агарі сірувато-кремові, з'являються на другу-третю Бактерії рухливі, мають перитрихіальне розтадобу, мають округлу форму, до 4-11мм в діаметрі, шування джгутиків, спороутворюючі, грампозитивматові, в'язкі ВІДНОСИТЬСЯ ДО ентомопатогенних ні Як джерело азоту штами використовують мінеральні і органічні форми азоту Як джерело вуглеФізюлого-бюхімічні ознаки штаму Пігментів не цю використовують різні форми вуглеводів сахаутворює На середовищах з органічним азотом , розу, манозу, глюкозу, мальтозу та ІНШІ Штами зокрема МПА, солями амонію добре розвивається Bacillus thunngiensis 98 и Bacillus thunngiensis 0239 Штам Bacillus thunngiensis 0239 активно засвоює здатні синтезувати термостабільний екзотоксин сахарозу, глюкозу, манозу, ескулін, саліцин ПдроНа відміну від штаму бактерій Bacillus thunngiensis лізує крохмаль На твердих та рідких середовищах 98, продукуючого 5,3мкл екзотоксину на 1 грам коштам Bacillus thunngiensis 0239 росте в межах 20рму, Bacillus thunngiensis 0239 продукує 5,8мкл ек45°С, а температурний оптимум становить 28зотоксину на 1 грам корму Ентомоцидну актив30°С Зростання бактерій спостерігається в діапаність штамів Bacillus thunngiensis 98 і 0239 визназоні рН 7,0-8,6, а оптимальною є реакція середочали на личинках колорадського жука ( вища 7,2-7,6 Ознаки штаму СТІЙКІ ВІН Є патогенLeptmotarsa decemlmeta) 1-2 віку (10-15 діб) ним для листогризучих комах-шкідників і не є патогенним для теплокровних тварин і людини КультуШтами мають такі відрізняльні морфологічні ру зберігають на скошеному м'ясо-пептонному агаознаки рі при температурі 3-5°С, пересіваючи один раз в 6 Добові культури обох штамів являють собою МІСЯЦІВ Склад середовища для довгострокового палички, розміри яких різні (штам Bacillus зберігання штаму м'ясні кубики - 0,4%, пептон thunngiensis 98 - 0,8-1,Змкм, а штам Bacillus 1,0%, NaCI - 0,5%, агар - 2,0%, вода дистильоваthunngiensis 0239 - 0,3-1,2мкм) Експоненціальна н а - 1 л , рН 7,2 фаза росту штаму Bacillus thunngiensis 0239 переходить до стаціонарної через 36 годин, тоді як Приготування рідкого препарату Bacillus штаму Bacillus thunngiensis 98 через 40 годин thunngiensis 0239 Дріжджо-полісахаридне середоКультура нового штаму досягає технологічної зрівище для отримання маточної культури (посівного лості через 40 годин, а штам-прототип - через 44 матеріалу) має такий склад дріжджі кормові години, що є важливим при одержанні препаратив2,0%, мука кукурудзяна - 1,5%, дистильована вода ної форми у виробництві - 1 л , рН 7,6-7,8 Стерилізують при тиску 1атм, протягом ЗО хвилин Стерильне живильне середовиЗазначена перерахована вище сукупність сутще в колбах Ерленмейєра (по ЮОмл середовища) тєвих позитивних ознак штаму Bacillus thunngiensis засівають суспензією спор, вирощених на МПА, в 0239 підтвержує можливість одержання очікуваноКІЛЬКОСТІ 0,1% від об'єму і вирощують на технологіго технічного результату чній качалці при 200-220об/хв, температурі 28°С, Характеристика штаму бактерій Bacillus протягом 48-72 годин Титр рідкої культури повиthunngiensis 0239 Номенклатурні дані рід нен бути не нижче 1,5 млрд, спор в 1мл суспензії Bacillus, вид - Bacillus thunngiensis 0239, депонований у колекції Інституту сільськогосподарської Готовою маточною культурою стерильно інокумікробіологи УААН під реєстраційним номером Елюють промислове середовище в КІЛЬКОСТІ 0,1% 13 від об'єму середовища і вирощують на технологічній качалці при 200-220 об/ хв, температурі 28°С, Походження штаму Штам Bacillus thunngiensis протягом 48-72 годин Промислові середовища ку0239 одержаний в Південному філіалі Інституту курудзяний екстракт - 2,0%, кукурудзяна мука сільськогосподарської мікробіологи УААН з комах 1,5% або кукурудзяний екстракт - 2,0%, меляса природних популяцій Криму 1,5% Титр рідкої культури повинен бути не нижче Спосіб виділення Штам Bacillus thunngiensis 1,5 млрд спор в 1мл суспензії Культурою, яку 0239 виділений в Південному філіалі Інституту одержано в промисловому середовищі інокулюють сільськогосподарської мікробіологи УААН в 1994 великі об'єми середовища в ферментері для одерроці мікробіологічним методом Патикою Т І і Колжання спорового матеріалу Bacillus thunngiensis, басовою В В з трупів золотогузок молодшого віку який центрифугується для виготовлення пасти Ними ж штам ідентифікований по визначнику Берп Одержують пасту с титром спор в 1г 16 -24 млрд (1974), Barjac , Bonnefoi (1968), Barjac (1978), Зберігають препарат при температурі 15-30°С Lysenco (1963), порівняний із типовим штамом баокремо від отрутохімікатів Строк зберігання рідкоктерій Bacillus thunngiensis 98 го і пастоподібного препарату не меньше 6 МІСЯЦІВ Бютехнолопчна характеристика Штам синтезує ацетил-метил-карбінол і термостабільний екзотоксин Утворює спори і кристалічний білковий ендотоксин Ентомоцидна активність штаму Bacillus thunngiensis 0239 по відношенню до личинок колорадського жука молодшого віку складає 100% Біопрепарат виготовлений на основі штаму Bacillus thunngiensis 0239 використовують для захисту рослин від шкідливих комах Культурально-морфолопчні ознаки штаму Клітини трьохдобової культури штаму Bacillus thunngiensis 0239 мають паличковидну форму, Обробку рослин проводять ручним оприскувачем, куди заливають робочий розчин препарату Bacillus thunngiensis(BT) Доза препарату на 1га 6кг пасти, або 30л рідкої культури, що розчинені в 300л води Ентомоцидна активність штамів Bacillus thunngiensis 98 і 0239, культивованих в дріжджополісахаридному середовищі, яка випробувана на личинках колорадського жука першого-другого віку (титр робочої культури 100 млн/мл, лабораторний дослід), приведена в Таблиці 1 45103 Таблиця 2 Таблиця 1 Загибель по днях обліку, % 3 5 7 10 Варіант досліду Контроль без обробки 0 Bacillus thunngiensis 98 31,0 (стандарт) Bacillus thunngiensis 33,3 0239 0 4,0 4,0 48,8 84,3 92,0 55,5 91,0 100 Найбільше зниження чисельності личинок колорадського жука відмічено на 5-7 добу при обробці препаратом Bacillus thunngiensis 0239 Біологічна ефективність через 10 днів після оприскування препаратом досягає 100% Порівняльні дослідження ефективності Bacillus thunngiensis 98 и 0239 в лабораторно-польовому ДОСЛІДІ на личинках колорадського жука першого, другого ВІКУ (ТИТР РОБОЧОЇ КУЛЬТУРИ 100 млн/мл ) поиведені в Таблиці 2 Варіант досліду Загибель по днях обліку, % 3 Контроль без обробки Bacillus thunngiensis 98 (стандарт) Bacillus thunngiensis 0239 5 7 10 0 0 0 0 58,7 86 95 98 61 82 97 100 Ефективність дії рідкого препарату Bacillus thunngiensis 0239 складає 97-100%, a Bacillus thunngiensis 98 - 95 -98 % Спостерігається антифідантний ефект і загибель значної маси личинок протягом 5-6 днів Порівняльні випробування ефективності пастоподібної форми препаратів Bacillus thunngiensis 98 і 0239 в польовому ДОСЛІДІ на популяції колорадського жука приведені в Таблиці З Таблиця З Варіант досліду Контроль ХІМІЧНИЙ препарат банкол Паста Bacillus thunngiensis 98 Паста Bacillus thunngiensis 0239 Строк обліку, доба 0 3 7 10 0 3 5 10 0 3 5 10 Чисельність шкідника, штук Личинки 1-2 віку 66 10 8 10 44 29 20 14 138 71 60 32 Високий відсоток загибелі особин колорадського жука в перші 3 доби відмічені при обробці картоплі банколом - 89,6% Паста Bacillus thunngiensis 0239 як за дією на личинок, так і за результатами Личинки 3-4 віку 59 12 8 3 32 17 10 6 40 ЗО 25 12 % гибелі по днях обліку Урожайність, ц/га Особин всього 125 22 16 13 76 46 ЗО 20 178 101 85 44 82,4 87,2 89,6 40,0 60,5 73,7 43,3 52,2 75,3 132,4 128,4 131,0 запобігання втрати урожаю, практично, не поступається хімічному контролю Показники ефективності пасти ВТ 98 і 0239 ВІДПОВІДНО 73,7% і 75,3% ДП "Український інститут промислової власності "(Укрпатент) Україна, 04119, Киів-119, вул сім'ї Хохлових, 15 (044) 456-20-90