Спосіб прогнозування розвитку тяжких форм акне за допомогою молекулярно-генетичних методів

Реферат: Спосіб прогнозування розвитку тяжких форм акне здійснюють шляхом проведення молекулярно-генетичного дослідження за поліморфізмами генів TLR-4(C399T), IL-1(C3953T), IL-8(C781T) з наступним аналізом та при виявленні гетерозиготних генотипів СТ та гомозиготних генотипів ТТ за досліджуваними генами прогнозують тяжкий перебіг акне і призначають більш коректну терапію. UA 121339 U (54) СПОСІБ ПРОГНОЗУВАННЯ РОЗВИТКУ ТЯЖКИХ ФОРМ АКНЕ ЗА ДОПОМОГОЮ МОЛЕКУЛЯРНОГЕНЕТИЧНИХ МЕТОДІВ UA 121339 U UA 121339 U 5 10 15 20 25 30 Корисна модель належить до медицини, а саме до дерматології, і може бути використана у практичній медицині для прогнозування динаміки розвитку та схильності до тяжкого перебігу акне. В основу корисної моделі поставлена задача розробки способу прогнозування розвитку тяжких форм акне у хворих з даною патологією та людей із тяжкими формами акне у сімейному анамнезі. Поставлена задача вирішується тим, що виконують шляхом проведення молекулярногенетичного дослідження за поліморфізмами генів TLR-4(C399T), IL-1|3(C3953T), IL-8(С781Т) з наступним аналізом та при виявленні гетерозиготних генотипів СТ та гомозиготних генотипів ТТ за досліджуваними генами прогнозують тяжкий перебіг акне і призначають більш коректну терапію. Спосіб, що заявляється, дозволяє виявити несприятливі при даній патології генотипи, що важливо для своєчасного призначення/корекції терапії. Технічним результатом, що досягається при застосуванні даної корисної моделі, є збільшення точності оцінки ризику виникнення тяжких форм акне. Введення даного способу у клінічну практику дозволить із високою ймовірністю прогнозувати схильність пацієнта до розвитку тяжких форм акне та, відповідно, призначати більш коректну терапію. Спосіб здійснюється наступним чином: у хворого на легкі (комедональні, папулопустульозні) форми акне або у людини, яка мала родичів із тяжкими формами акне в анамнезі, беруть кров із ліктьової вени у вакуумні пробірки з калієвою сіллю етилендіамінтетраоцтової кислоти як антикоагулянт. Геномну ДНК для молекулярно-генетичного дослідження виділяють з периферійної крові за допомогою специфічних тест-систем. До цільної крові додають лізуючий розчин та сорбент на силікагелі. Після лізису відмивають зразки розчинами для відмивання № 1 та № 2, відповідно до інструкції. Для елюції ДНК з сорбенту додають ТЕ-буфер. Отриманий супернатант, що містить очищену ДНК, використовували для проведення полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР). Для визначення поліморфних варіантів генів IL-1β (С3953Т) (rs 1143634), IL-8 (C781T) (rs2227306), TLR-4 (399 С/Т) (rs 4986791) використовують модифіковані протоколи з олігонуклеотидними праймерами із застосуванням методу ПЛР та наступним аналізом поліморфізму довжини рестрикційних фрагментів (ПДРФ). Досліджувані ділянки генів ампліфікують за допомогою специфічних праймерів (табл. 1). Таблиця 1 Олігонуклеотидні праймери Ген (полі-морфізм) IL-1β (С3953Т) IL-8 (С781Т) TLR-4 (399 С/Т) 35 40 45 Послідовність праймерів (5-3) F-GTTGTCATCAGACTTTGACC R-TTCAGTTCATATGGACCAGA F-CTCTAACTCTTTATATAGGAATT R-GATTGATTTTATCAACAGGCA GGTTGCTGTTCTCAAAGTGATTTTGGGAGAA ACC TGA AGA CTG GAG AGT GAG TTA AAT GCT Розмір ампліфікованої ділянки ДНК 249п.н. 203 п.н. 406 п.н. Приклад. Хвора М., 17 років, історія хвороби № 849 17.01.2017 p., звернулась зі скаргами на розповсюджений вузловато-кістозний висип на шкірі обличчя та спини, що стрімко прогресував протягом останніх 3-х місяців, розрішуючись формуванням рубців. Був встановлений діагноз: Акне, конглобатна форма. До цього протягом 4 років пацієнтка хворіла на папуло-пустульозну форму акне, що мала тривалі періоди повної ремісії. Хвора лікувалась лише топічними препаратами та застосовувала косметичні засоби для проблемної шкіри. При проведенні молекулярно-генетичного дослідження було виявлено наявність гетерозиготного поліморфізму СТ за геном IL-8 (C781T), що асоціюється з тяжким перебігом акне. Пацієнтці було призначено системну терапії ретиноїдами та нікотинамід рибозидом, що дало позитивний ефект протягом 2-х місяців застосування. Дана пацієнтка мала рідного брата 19 років, який страждав на акне середньо-тяжкого ступеня, що погано піддавались місцевому лікуванню та поступово прогресували. З метою 1 UA 121339 U 5 10 визначення подальшої тактики лікування та прогнозування можливого перебігу захворювання, даному пацієнтові також було проведено молекулярно-генетичне дослідження, результати якого вказали на наявність гетерозиготних генотипів СТ одразу за двома досліджуваними генами: IL-1β (C3953T) та IL-8(C781T). Таким чином, було прийнято рішення про призначення системної терапії ретиноїдами за схемою вузлових форм акне, що дало позитивний результат протягом 2 місяців лікування та ввело пацієнта у ремісію (4 місяці спостереження по закінченні лікування). Спосіб апробовано на базі Київської міської клінічної шкірно-венерологічної лікарні на 95 хворих на акне та родичах хворих на акне. Як видно із отриманих результатів, за допомогою заявленого способу точність прогнозування розвитку тяжких форм акне є високою, що забезпечує призначення більш коректної терапії. Позитивний результат апробації заявленого способу дозволяє рекомендувати його для впровадження у практичну охорону здоров'я. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 20 Спосіб прогнозування розвитку тяжких форм акне, який здійснюють шляхом проведення молекулярно-генетичного дослідження за поліморфізмами генів TLR-4(C399T), IL-1(C3953T), IL-8(C781T) з наступним аналізом та при виявленні гетерозиготних генотипів СТ та гомозиготних генотипів ТТ за досліджуваними генами прогнозують тяжкий перебіг акне і призначають більш коректну терапію. Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2