Спосіб одержання сфінгомієліну

Изобретение относится к медицина и медицинской промышленности, в частности к способам получения индивидуальных фосфолипидов, и может быть использовано для получения липо Изобретение относится к медицине и медицинской промышленности, в частности к способам получения индивидуальных фосфолипидов, и может быть использовано для получения липосомальньгх препаратов, биологически активных эмульсий. Целью изобретения является повышение выхода целевого продукта. Способ осуществляется следующим образом. Мозг крупного рогатого скота очищают, измельчают, гомогенизируют в ацетоне, смесь центрифугируют. К осадку добавляют смесь петролейного эфира и этилового спирта в соотношении 0,9-1,1:1,1-0,9, Полученный экст4-91 -о, сомальных препаратов„ Цель изобретения - повышение выхода продукта. Поставленная цель достигается тем, что мозг крупного рогатого скота очищают, гомогенизируют в ацетоне, центрифугируют. К осадку добавляют смесь петролейного эфира и этилового спирта в соотношении 0,9-1,1:1,1-0,9. Полученный экстракт упаривают, -остаток гидролизуют 1 н. раствором едкого кали в метаноле в течение 8 ч при 37 С и хроматографируют на колонке с силикагелем. Целевой продукт элюируют с смесью хлороформ - метанол - вода в соотношении 65:35:8 с последующей сушкой в вакууме„ Выход хроматографичесс ки чистого сфингомиелина из 1 кг сырья составляет 3,4-3,7, количество примесей 1-2%а ракт упаривают, остаток гидролизуют 1 н„ раствором едкого кали в метаноле в течение 8 ч при 37 С и хроматографируют на колонке с силикагелем. Целевой продукт элюируют смесью хлороз форм - метанол:вода в соотношении 65:35:8 с последующей сушкой в вакууме. Выход хроматографически чистого сфингомиелина из 1 кг сырья составляет 3,4-3,7 г, количество примесей D продукте 1,0-2%. П*р и м е р 1. Мозг крупного рогатого скота очищают от соединительной ткани и мозговой оболочки, 1 кг мозга изрезают и гомогенизируют порциями по 100 г в 400 мл ацетона комнат - t-Ґ 1624741 ной температуры в течение 3 мин Гомогенаты объединяют, надосадочную жидкость декантируют и к осадку добавляют свежую порцию ацетона 4 л. с Смесь выдерживают в течение ночи при комнатной температуре, центрифугируют 10 мин при 3000 об/мин и температуре 4-6 С„ К осадку добавляют смесь этилового спирта (96,5% основного веще- 10 ства) и петролейного эфира (температура кипения 40-70°С) в соотношении 0,9:1,1 в количестве 2 л, Полученную смесь перемешивают в течение 2 ч при 'комнатной температуре, а затем оса15 док отделяют центрифугированием при 3000 об/мин в течение 20 мин при 46°~. К осадку добавляют 2 л указанной смеси и процесс повторяют,, Полученные экстракты объединяют, фильтру- 20 ют через бумажный фильтр и упаривают на роторном испарителе при 4043 С досуха. К остатку добавляют 400 мл охлажденного до 4-6ffC диэтилового эфира, встряхивают до образо- 25 вания однородной суспензии и выдерживают при 4-6°С в течение 2 ч о Суспензии центрифугируют при 6000 об/мин в течение 15 мин при 4-6°С. Надосадочную жидкость удаляют, а к осадку 30 добавляют 200 мл диэтилового эфира, охлажденного до 4-6°С, и процесс по-' вторяют еще 1 раз. К осадку добавляют 60 мл 1 н, раствора КОН в метаноле до образования однородной суспензии 35 и гидролизуют 8 ч при 37°С. После окончания гидролиза раствор охлаждают до температуры 4-6 С, добавляют 85 мл 0,8 H t соляной кислоты и экстрагируют полученный раствор хлорофордо мом в копичестве 300 мл„ Хлороформный слой отделяют, а к раствору добавляют новую порцию хлороформа,, Процесс повторяют еще два раза. Объединенные хлороформные экстракты обез45 воживают 300 г натрия сернокислого безводного, фильтруют и полученный фильтрат упаривают при температуре 40-43°Со Остаток растворяют в 50 мл смеси хлороформа и метанола в соотношении 80:20 и наносят на колонку 50 с силикагелеьі (размер частиц 40/100 мк размер колонки 3,5 X 18 см). Колонку промывают 7 00 мл смеси хлороформ-ме- • танол (80:20), 500 мл смеси хлороформ - метанол (50:50) и 300 мл м е - 55 танол а и Сфиигомпелин элгоируют 600 мл і смеси хлороформ - метанол - вода (65:35:8). Скорость элюирования 10 15 мл/мин. Процесс элюирования контролируют ТСХ. Фракции, содержащие сфингомиелин, объединяют и упаривают. ГТолучелный остаток обрабатывают 100 мл ацетона в течение 30 мин при постоянном перемешивании„ Ацетон сливают. Осадок в течение 2 ч выдерживают в вакууме 0,5-1,0 мм рт.ст.. Выход хроматографичєски чистого сфингомиелина 3,4 г, внешний вид конечного продукта - белое аморфное вещество. П р и м е р 2. Мозг крупного рогатого скота очищают от соединительной ткани и мозговой оболочки. 1 кг мозга нарезают и гомогенизируют порциями по 100 г в 400 мл ацетона комнатной температуры в течение 3 мин о Гомогенаты объединяют, надосадочную жидкость декантируют и к осадку Добавляют свежую порцию ацетона (4 л ) . Смесь выдерживают в течение ночи при комнатной температуре и центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мин и температуре 4-6°Сц К осадку добавляют смесь этилового спирта и. петролейного эфира в соотношении 1:1 в количестве 2 я„ Далее процесс проводят как указано в примере 1, Выход хроматографичєски чистого сфингомиелина 3,66 т . Предложенный способ позволяет увеличить выход целевого продукта по сравнению со способом-прототипом с 1,8-2,2 до 3,4-3,7 г/кг и сократить длительность технологического процесса на 2 сут. Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я Способ получения сфингомиелина из мозга крупного рогатого скота, включающий очистку сырья, его измельчение, гомогенизацию в ацетоне, центрифугирование, экстракцию осадка этиловым спиртом и петролейним эфиром, гидролнэ экстракта, хроматографию, на силнкагеле с последующим элюированием целевого продукта смесью хлороформа и метанола и сушкой в вакууме, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения выхода целевого продукта, экстракцию проводят смесью петролейного эфира и этилового спирта в соотношении 0,9-1,1:1,10,9, а элюирование осуществляют смесью хлороформ - метанол - вода в соотношении 65:35:8. 1624741 Редактор Л0Герасимова Заказ 447/ДСП Составитель И.Иванова Техред М.Моргентал Тираж Корректор Т о Палий Подписное ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул. Гагарина, 101