Спосіб отримання препарату з гладкого хоріона

1. Спосіб отримання препарату з гладкого хоріона шляхом відділення фрагментів гладкого хоріона від плаценти, промивання, обеззараження, подрібнення, охолодження подрібненого гладкого хоріона до температури зберігання, підтримування температури зберігання постійно, який відрізняється тим, що тканину хоріона відокремлюють від плаценти в умовах стерильного боксу, процес промивання та обеззараження суміщають шляхом промивання фрагментів гладкого хоріона тричі у фізіологічному розчині, що містить 3050од/мол цефтриоксону, переносять у стерильний лоток, в умовах ламінарного боксу розрізають на шматки розміром 35х35-50х50 мм, заливають фізі U 2 (19) 1 3 14548 4 Іншим недоліком отриманого препарату є руйнуцентрифугування і відділення кінцевого продукту з вання значної частини біологічно активних речонаступним його кріоконсервуванням при -196°С. вин, що знаходяться у хоріоні, внаслідок прийняЦей спосіб одержання біостимулятора у випатих режимів обробки сировини та наступної дку одержання препарату з тканини хоріона є масублімаційної сушки. Препарат не містить життєлоефективним. Це пов'язано з тим, що клітини здатних клітин і не може здійснювати замісний хоріона, на відміну від наприклад ембріональних ефект. клітин, міцніше з'єднані між собою. В результаті Відомий спосіб отримання препарату з гладкогомогенізації на початковій стадії приготування го хоріона для корекції імунного статусу [М.Ф. Дапрепарат, одержаний цім способом по його завеценко "Тканинна терапія за методом професора ршенню містить низьку кількість життєздатних кліН.І. Краузе в стоматології і щелепно-лицьовій хірутин і пов'язані з цим недоліки препарату зазначені ргії" Приготування хімічно оброблених тканин за вище. методом проф. Краузе. Труди Саратовського меІншим недоліком даного способу є те, що він дичного інституту, том VII, 1949, - С.407-414] шляявляє собою клітинну суспензію (клітинний склад хом відділення від плаценти фрагментів гладкого не зазначений), що повинна наноситься на основу, хоріона, промивання їх водою, обеззараження а потім - на рану, у результаті чого відбувається розчином, який щодня оновлюють. При цьому як більша втрата клітин. знезаражуючий розчин використали 2% розчин Завданням розробки є створення способу хлорациду, а промивали водопровідною водою. отримання препарату з гладкого хоріона в якому Недоліком відомого способу є руйнування шляхом застосування нових операцій, режимів їх значної частини біологічно активних речовин, що виконання та застосовуваних речовин забезпечузнаходяться у гладкому хоріоні, при обеззараженні ється підвищення вмісту в препараті усіх компонехлорацином, крім того відбувається насичення нтів білків і гормонів та стовбурових клітин, харакфрагментів тканини хлором, а подальша їх обробтерних для нативного хоріона, та забезпечується ка відмиттям не звільняє від токсичних з'єднань можливість його тривалого зберігання. хлору, контакт з якими може викликати токсичні, Для вирішення цього завдання спосіб отриалергічні і інші патологічні реакції у реципієнта. мання препарату з гладкого хоріона передбачає Крім того, така обробка гладкого хоріона не повнівідділення фрагментів гладкого хоріона від плацестю знищує бактерійну і вірусну мікрофлору, а танти, промивання, обеззараження, подрібнення, кож може надавати дратівливу дію на слизові обоохолодження подрібненого гладкого хоріона до лонки. температури зберігання та підтримування темпеВідомий спосіб отримання препарату з гладкоратури зберігання постійно. го хоріона для корекції імунного статусу людини Новим в способі є те, що тканину хоріона відо[див. патент України №54248, МПК: 7 А61К35/50, кремлюють від плаценти в умовах стерильного дата публікації: 17.02.2003, номер бюлетеня 2] боксу, процес промивання та обеззараження сушляхом відділення фрагментів гладкого хоріона, міщають шляхом промивання фрагментів гладкого промивання їх водою, обеззараження розчином, хоріона тричі у фізіологічному розчині, що містить який щодня оновлюють, при цьому фрагменти 30-50ед/мол цефтриоксона, переносять у стеригладкого хоріона охолоджують до температури льний лоток, в умовах ламінарного боксу розріза+4°-+10°С та підтримують таку температуру посють на шматки розміром 35х35-50х50мм, заливатійно, промивають стерильною дистильованою ють фізіологічним розчином з 15-20% водою, а як знезаражувальний розчин використоконцентрацією диметилсульфоксиду на 20-30хв, вують 0,25% водний розчин хлоргексидину біглюкожний шматок поміщають у поліпропіленовий конат, оновлюючийого кожні 12 годин протягом 5резистентний стерильний 40мл. контейнер, у який 6 діб. доливають 1:1 10%-ний розчин диметилсульфокНедоліком такого способу отримання препарасиду, заморожують зі швидкістю 1-1,5°С/хв і зберіту є короткий термін придатності препарату, пов'ягають до клінічного застосування, а перед нанезаний з тим що в зазначених умовах збереження сенням на рану розморожують у водяній лазні при біологічно активні речовини що містяться в препатемпературі +37-+40°С до температури +4-+6°С. раті швидко руйнуються та має місце великій відВнаслідок застосування зазначеного способу соток загибелі клітин. Процеси безперервного препарат містить повний комплекс біологічно акпромивання препарату призводять до підвищення тивних речовин і має повноцінні життєздатні клітивірогідності бактеріального обсіменіння препарату. ни, тому він має замісну дію. По суті препарат потрібно готувати перед процеВ окремих варіантах застосування способу сом його застосування, що суттєво обмежує можотримання препарату з гладкого хоріона плаценту ливість його застосування тому, що перед застоз моменту пологів до відділення хоріона зберігасуванням не гарантовано наявність сировини для ють не більше 3-6 годин в ізотермічних умовах при його виробництва. температурі 20-25°С. Відомий спосіб одержання біостимулятора [см. Внаслідок застосування зазначених режимних Патент України №38604, МПК: 7 А61К35/48 A, 7 параметрів в препараті підвищується відсоток біоA01N1/00 В, дата публікації: 15.05.2001, номер логічно активних речовин та життєздатних клітин бюлетеня: 4] шляхом відмивання тканини у фізропо відношенню до необробленого нативного хорізчині, роздрібнювання і гомогенізації, після роздріона. бнювання тканину піддають дворазовому замороВ окремих варіантах застосування способу жуванню-відігріву, а після гомогенізації здійснюють отримання препарату з гладкого хоріона заморо 5 14548 6 жування здійснюють до -80°С і зберігають протябоксу плаценту промивали тричі, послідовно погом 2-3 місяців при температурі -80°С. міщаючи в 3 лотки з фізіологічному розчином і Внаслідок застосування зазначених дій забезантибіотиком (30-50ед/мол цефтриоксона), в печується можливість збереження препарату проостанньому лотку відокремлювали хоріон від платягом 2-3 місяців в холодильнику. центи й амниотичної оболонки, переносили у поВ окремих варіантах застосування способу рожній 4-й лоток, розрізали на шматочки зазначеотримання препарату з гладкого хоріона замороних в таблиці 1 розмірів, заливали фізіологічним жування здійснюють до -196°С і зберігають до 5 розчином з 15-20% концентрацією ДМСО на 20років при температурі-196°С. 30хв. для кращого проникнення кріопротектора в Внаслідок застосування зазначених дій забезтканину, потім шматочки переносили в 40мол. печується можливість збереження препарату до 5 пробірки для заморожування, доливали 10% років. ДМСО на розчині Хенкса, залишаючи незаповнеСпосіб отримання препарату з гладкого хоріоним невеликий простір для об'ємного розширення на ілюструється прикладами виготовлення препапри заморожуванні й заморожували зі швидкістю рату. 1-1,5°С у 1хв до температури, зазначеної в таблиВ таблиці 1 зазначені режими та параметри ці 1., потім, у випадку тривалого зберігання, ампувиконання дій в виконаних прикладах, в таблиці 2 ли занурювали у рідкий азот (196°С). Розморожупоказники застосованої в прикладах тканини хорівали препарат поміщаючи ампулу в она до застосування способу отримання препаратермостатовану водяну лазню (+37-+40°С) до (+4ту, а в таблиці 3 показники отриманого в прикла+6°С). дах препарату. Дослідження клітинного й білкового складу В наведених прикладах для одержання препатканини хоріона до й після застосування способу рату використовували плаценту, що залишається показало, що отриманий препарат після розморопісля пологів, зроблених шляхом кесарева розтиження містить усе компоненти білків і гормонів, ну. Плаценту поміщали у стерильний металевий характерних для нативного хоріона, що, як покабікс, закривали і в термостатичній тарі (+20-+25°С) зують приклади, суттєво не змінюється при зберідоставляли у лабораторію кріобанка протягом 3-6 ганні в холодильнику протягом 2 місяців, 3-х і 5-ти годин з моменту пологів. У стерильних умовах років при -196°С. Таблиця 1 Вміст диВміст Термін метилТемпе- центризберіРозмір сульфоПриратура оксона у гання шмат- ксиду у клади зберіфізіологплаків фізіологання гічному роценти гічному зчині стані № год С ед/мол мм % 1. 3,0 20 30 35х35 15 2. 6,0 25 50 50х50 20 3. 4,0 21 40 40х40 15 4. 3,0 22 50 45х45 20 5. 5,0 23 30 35х35 18 6. 6,0 24 40 40х40 15 7. 5,0 22 50 50х50 20 8. 3,020 30 35х35 15 9. 6,0 25 50 50х50 20 10. 3,0 22 30 45х45 20 11. 5,0 24 40 35х35 18 12. 4,0 20 50 40х40 20 13. 6,0 23 30 40х40 15 14. 3,0 25 50 50х50 20 15. 5,0 22 30 35х35 18 16. 6,0 25 40 50х50 15 Термін витримки просочування хв. 20 30 22 26 28 24 30 20 30 24 30 26 28 22 26 28 РозШвид- Темпеморокість ратура Термін Темпеження замо- заморо- збері- ратура до темрожу- жуван- гання у бані певання ня ратури °С/xв. 1,0 1,5 1,0 1,5 1,3 1,5 1,0 1,0 1,5 1,2 1,5 1,3 1,5 1,0 1,2 1,3 С -80 -80 -80 -80 -80 -80 -80 -196 -196 -196 -196 -196 -196 -196 -196 -196 місяців 2 3 2 3 2 3 2 36 60 44 47 56 41 36 60 52 °С 37 40 38 38 39 40 37 37 40 38 39 40 37 40 38 39 С +4 +6 +4 +6 +4 +5 +6 +4 +6 +4 +5 +6 +4 +6 +4 +5 7 14548 8 Таблиця 2 ФоликулоПрикстимулади люючий гормон Хоріоа2аа1гонічмікро-глоЕстра- Кортифето- мікроCD-34+ний гобулін федиол зол проглоклітини надортитеин булін тропин льності пмоль/ пмоль/ клітини, пмоль/л мЕД/л нг/мл нг/мл нг/мл л л x102 /мол 831 5212 72,4 5430 73,3 93,1 3757 3,1 824 5217 71,8 5390 72,3 94,8 3738 2,9 786 5206 74,8 5330 74,6 89,8 3732 2,6 812 5243 71,2 5510 73,6 86,5 3748 3,2 755 5180 68,9 5290 71,1 103 3726 2,6 799 5259 66,5 5470 71,6 84,9 3745 3,3 742 5190 70,7 5370 73,8 101 3729 2,7 780 5196 67,7 5250 73,1 99,7 3761 2,9 774 5249 73,6 5310 74,1 88,2 3735 3,0 748 5254 68,3 5490 72,1 98,2 3767 2,5 805 5233 73,0 5530 71,3 104 3754 2,8 793 5185 74,2 5270 72,6 81,6 3770 3,2 818 5201 67,1 5450 71,8 96,4 3742 3,3 767 5222 70,1 5410 74,3 91,5 3764 2,7 761 5227 75,4 5350 72,8 83,2 3751 3,0 837 5238 69,5 5390 73,1 94,8 3754 2,9 ЛютеініПролаПрогезуючий ктин стерон гормон № мЕД/л мЕД/л мЕД/л 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 10,7 9,5 11,7 11,1 9,3 10,9 9,7 11,5 10,1 12,1 10,5 11,9 10,3 9,9 11,3 10,9 371 381 383 363 386 376 368 356 391 378 366 361 388 373 358 378 14,2 8,9 16,0 13,0 13,6 15,4 12,5 10,1 14,8 10,7 11,3 16,6 11,9 8,3 9,5 10,9 Таблиця 3 ФолиЛютеікулоПрикПронізустиму-люлади ла-ктин ючий ючий горгормон мон Прогестерон Естрадиол пмоль/ пмоль/ л л № мЕД/л мЕД/л мЕД/л пмоль/л 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 9,52 8,27 10,41 10,1 8,09 9,16 8,54 9,89 8,18 10,65 9,03 9,88 8,45 8,71 9,49 8,7 345 346 356 344 351 327 338 331 332 343 325 310 329 339 315 317 13,1 8 14,7 12,2 12,2 13,2 11,3 9,4 12,7 9,9 10,3 14,4 10,2 7,7 8,4 9,3 806 782 762 803 717 727 712 756 696 725 764 729 736 743 715 744 Комп’ютерна верстка В. Мацело 5081 4982 5075 5216 4946 4811 5008 5066 4776 5201 5076 4822 4784 5169 4965 4714 Кортизол 70,2 68,2 72,5 70,4 65,4 60,5 67,8 65,6 64,7 65,5 68,6 66,8 59,7 67,3 68,6 60,5 Хоріогоаа1нічний го- фето- мікронадопроглотропин теин булін а2мікроглобулін фертильності мЕД/л нг/мл нг/мл нг/мл 5158 5012 5063 5344 4919 4868 5047 4987 4672 5270 5198 4743 4850 5193 4922 4689 69,3 67,2 70,8 71,4 66,1 63,7 69,4 69,4 65,2 69,2 67,0 65,3 63,9 71,3 66,9 63,6 89,4 89,1 86,2 84,7 96,8 76,4 95,9 95,7 78,5 95,3 98,8 73,4 86,8 88,7 76,5 83,4 3666 3573 3642 3733 3562 3430 3602 3670 3212 3578 3453 3355 3292 3575 3375 3228 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 + CD-34 клітини кліти ни x102 /мол 2,9 2,7 2,4 3,1 2,4 2,9 2,5 2,8 2,5 2,3 2,6 2,7 2,8 2,5 2,5 2,4