Спосіб іммобілізації ліполітичних ферментів

Спосіб іммобілізації ліполітичних ферментів, що передбачає включення ферменту в полівініло 3 17099 4 ну активність в кислому середовищі при значеннях (див. графіки Фіг.1 і Фіг.2). рН 3,0 і менше. Покриття ферментного препарату ацетилфтаВ основу корисної моделі поставлено задачу лілцелюлозою сприяє збереженню високого рівня розробити спосіб, в якому за рахунок додаткової ліполітичної активності в кислих середовищах, обробки іммобілізованого ферментного препарату моделюючих шлунковий сік. Після 2-х годинної ацетилфталілцелюлозою (АФЦ), розчиненою в інкубації при рН 1,35 і 3,0 активність становить спеціально підібраному розчині, забезпечити збі100-75%-ів від вихідної, для іммобілізованого прельшення збереження ліполітичної активності ферпарату, відповідно, 0 і 40%; нативний ферментний менту в кислому середовищі, зокрема в шлункопрепарат в цих середовищах був інактивований вому соку. (див. графік, Фіг.3). Поставлена задача вирішена в способі іммобіПри підвищеній температурі (50°С) ферментлізації ліполітичних ферментів, що передбачає ний препарат, який має плівкове покриття, зберігає включення ферменту в полівініловий спирт і настабільність. Зокрема, через 2 години інкубації ступне нанесення його на попередньо насичений ліполітична активність такого препарату становила 2%-им розчином бури активований вуглецево60,5%, в той час як активність нативного препараволокнистий матеріал із сумарним об'ємом пор ту й іммобілізованого на активованому вугільному 0,41-1,3см3/г при співвідношенні ферволокнистому матеріалі становить 38% і 48%, відмент:полівініловий спирт:матриця, що дорівнює повідно (див. графік, Фіг.4). (0,8-1,2):(0,11-0,17):(24-72) відповідно, тим, що Приклад. іммобілізований препарат додатково обробляють 1г активованого вуглецево-волокнистого ма5%-ою ацетилфталілцелюлозою, розчиненою в теріалу (АВВМ) з об'ємом пор (0,41-1,3см3/г) по суміші хлороформ:етанол: при їх співвідношенні бензолу насичували розчином 40мг бури в 2см3 1,5:1 в присутності вазелінового масла. дистильованої води і висушували при 20°С. Після Новизна способу, що заявляється, полягає в цього матеріал насичували розчином 33,4мг солітому, що іммобілізований препарат додатково обзиму в 3,5% - му розчині полівінілового спирту в робляють ацетилфталілцелюлозою, розчиненою в дистильованій воді. суміші розчинників хлороформ:етанол в присутноОтриманий препарат висушували при кімнатсті вазелінового масла. ній температурі. Ліполітична активність іммобілізоДодаткова обробка іммобілізованого ферменваного препарату - 40,79-40,7ЛО/мг. Далі іммобілітного препарату ацетилфталілцелюлозою з додазований препарат обробляли ацетилфталілванням пластифікатора дозволяє забезпечити целюлозою. Для цього 0,5г ацетилфталілплівкове покриття препарату. целюлози розчиняли в 10мл суміші хлороформ: Покриття іммобілізованого ферменту, зокрема етанол при їх співвідношенні 1,5:1 відповідно. Сусолізиму, плівкою, зокрема, ацетилфталілцелюломіш містила 0,006г вазелінового масла як пластизою призвело до 50%-го збереження ліполітичної фікатора. активності, яка не змінювалася протягом 1 року 1г іммобілізованого препарату вмістили на 1,5 зберігання препарату при 4°С (таблиця №1). хвилин в приготовану суміш, після чого висушили Зменшення ліполітичної активності іммобілізона повітрі при 20°С. Ліполітична активність отриваного препарату, покритого плівкою ацетилфтамана таким чином іммобілізованого препарату лілцелюлози, можна пояснити інгібуючим впливом перевірялася в середовищах, які моделюють шлурозчинників в процесі формування плівкового покнковий сік, при рН=1,35 і 3,0. В середовищі з риття. В таблиці №2 наведені дані, які підтверрН=1,35 препарат зберіг 100%-ву ліполітичну акджують, що збільшення часу контакту препарату з тивність. В середовищі з рН=3,0 - 75%-ву ліполітирозчинниками ацетилфталілцелюлози призводить чну активність. до зниження його активності. Для порівняння в модельні середовища з Нами виявлено, що використання вазеліноворН=1,35 і 3,0 вміщували солізим, іммобілізований го масла як пластифікатора сприяло 100%-му збена активованому вуглецево-волокнистому матеріреженню активності плівкової форми іммобілізоалі, який не піддавали додатковій обробці ацетиваного солізима. Інші пластифікатори, зокрема лфталілцелюлозою, розчиненою в суміші хлоротвін-80 і рицинова олія, зменшують активність форм: етанол (прототип). Іммобілізований за препарату на 77% і 50% відповідно (таблиця №3). прототипом препарат зберіг 40% ліполітичної акрН і термооптимуми ліполітичної активності тивності. Таким чином, додаткова обробка іммобііммобілізованого ферментного препарату (солізилізованого препарату ацетилфталілцелюлозою, му), покритого плівкою ацетилфталілцелюлози, не розчиненою .в. суміші „хлороформ:етанол. в. співвідрізняються від таких показників для нативних та відношенні. 1,5:1-в присутності вазелінового масла іммобілізованих препаратів (рН 7,0, температура забезпечує збереження 75-100%-в активності в 37°С) при розширенні в область кислих значень розчинах з рН 1,35-3,0. рН і в область високих температур відповідно 5 17099 6 Таблиця 1 Збереження ліполітичної активності іммобілізованих препаратів Фермент Ліполітична активність препарату Після іммобілізації Через 1 рік зберігання ЛО/мг білка % від вихідної ЛО/мг білка % від вихідної 1179,5±74,91 100,0 1126,4±72,8 100,0 Солізим, іммобілізований на АВВМ Солізим, іммобілізований на АВВМ, покритий плівкою АФЦ 590,1±31,2 50 589,3±27,6 100,0 Таблиця 2 Вплив розчинників* АФЦ на ліполітичну активність солізиму Тривалість контакту з розчинниками (хвилини) 0 15 30 60 Ліполітична активність іммобілізованого солізиму ЛО/мг білка % від вихідної 1179,5±74,9 100,0 589,8±25,3 50,0 294,8±22,8 25,0 147,4±11,5 12,5 * хлороформ:етанол (1,5:1) Таблиця 3 Вплив пластифікаторів на ліполітичну активність іммобілізованого на АВВМ солізиму, покритого плівкою АФЦ Пластифікатор Твін-80 Рицинова олія Вазелінове масло Ліполітична активність ЛО/мг білка 309,0±12,4 587,3±23,4 1179,5±70,5 % від вихідної 26,2 49,8 100,0 7 Комп’ютерна верстка Л. Ціхановська 17099 8 Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601