Спосіб одержання поліфенольного комплексу з переважно гемостатичною та діуретичною активністю

Спосіб одержання поліфенольного комплексу з переважно гемостатичною та діуретичною актив 3 20220 Завданням корисної моделі є створення способу одержання поліфенольного комплексу з переважно гемостатичною та діуретичною дією, який шляхом екстракції пагонів ожини сизої при заданих параметрах способу дозволяє одержати засіб у формі сухого екстракту з вираженою фармакологічною дією, який може бути використаний як активна діюча речовина при створенні лікарських засобів у різних лікарських формах. Поставлене завдання вирішується таким чином, що у способі одержання поліфенольного комплексу з переважно кровоспинною та діуретичною активністю, який включає екстракцію рослинної сировини 50% етанолом, упарювання, відокремлення осаду, обробку 96% етанолом, упарювання та сушк у надосадової рідини, згідно з корисною моделлю передбачено, що в якості рослинної сировини використовують пагони ожини сизої, екстракцію проводять при співвідношенні сировина і екстрагент 1:8-9, одержаний екстрагент упарюють до видалення етанолу, відокремлений осад промивають водою, а одержану водну фракцію об'єднують з надосадовою рідиною до початку стадії упарювання останньої. Ожина сиза (Rubus caesius) родини розоцвітих (Rosaceae) - відома дикоросла і культурна плодово-ягідна рослина, досить поширена в Україні. Вегетативні органи ожини містять значну кількість дубильних речовин, вітаміну С, а також органічні кислоти, токофероли, філохінони, похідні флавоноїдів, вітаміни К, Е, Р, F мінеральні речовини. Флавоноїдні сполуки здатні зменшувати проникність судинних стінок артеріол і капілярів, вітаміни Р і F - забезпечують еластичність кровоносних судин, збільшують їх стійкість. Авторами досліджено, що до складу ожини сизої входять: сума флавоноїдів у перерахунку на рутин 1,38%, дубильних речовин 7,4%, що суттєво перевершує вміст БАР у більшості лікарських рослин з кровоспинною дією, наприклад гірчака перцевого. Якщо використання пагонів ожини сизої у якості засобу з кровоспинною дією є відомим, то їх діуретична активність, виявлена авторами, не відома з доступних джерел інформації. Експериментальним шляхом було визначено співвідношення сировини до екстрагенту як 1:8-9, яке забезпечує одержання засобу з заданою фармакологічною дією і відповідає технологічним вимогам практичного здійснення заявленого способу. Менша кількість екстрагенту не дозволяє ефективно провести екстракцію і створює складнощі технологічного характеру при обробці великої кількості сировини, наприклад, закупорювання зливного отвору. Збільшення кількості екстрагенту нераціонально, тому що вичерпна екстракція сировини забезпечується заявленою кількістю екстрагента. Корисною моделлю передбачено додаткове промивання відокремленого осаду гарячою водою, що забезпечує вилучення з нього тієї частини поліфенольних сполук, які залишилися в осаді, причому, одержаний водний витяг об'єднують з надосадовою рідиною, яка містить цільовий продукт. 4 Таким чином підвищується продуктивність та економічність заявленого способу. Заявлений спосіб здійснюють наступним чином. Висушені при температурі не вище 40°С пагони ожини сизої товщиною не більше 5,0мм, заготовлені у період з липня по вересень, подрібнюють, завантажують у екстрактор і заливають 50% етанолом у співвідношенні сировина : екстрагент 1:8-9. Екстракцію проводять методом перколяції. Одержаний екстракт упарюють до видалення етанолу, відстоюють, наприклад, 2-3 години при температурі 6-10°С і відокремлюють осад від надосадової рідини шляхом фільтрації. Осад, принаймні тричі, промивають водою, бажано 60-70°С для вилучення залишків поліфенольних сполук. Одержаний після промивання водний витяг об'єднують з надосадовою рідиною і обробляють рівною кількістю 95% етанолу з метою розділення речовин білкової та полісахаридної природи. Очищений спиртово-водний екстракт упарюють до густого залишку і піддають сушці, бажано під вакуумом. Одержують гігроскопічний порошок ясно-брунатного кольору, розчинний у воді та нижчих спиртах. Ви хід - 5,03% від повітряно-сухої сировини. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. Для одержання засобу у формі сухого екстракту за заявленим способом 1,0кг подрібнених пагонів ожини сизої екстрагували у перколяторі 8 літрами 50% етанолу. Одержані витяги упарили під вакуумом до видалення спирту і водний залишок (1л), залишили на 2 години при 6°С для відстоювання. Темно-зелений смолистий осад, що випав (10,02г), відокремили і промили гарячою 70°С водою 3 рази по 50мл. Осад відкинули, а водний витяг об'єднали з надосадовою рідиною і обробили рівною кількістю (1л) 95% етанолу з метою відділення речовин білкової і полісахаридної природи. Очищений спирто-водний розчин упарили до густого водного залишку (400мл) і висушили на вакумно-ротаційному апараті. Одержали гігроскопічний порошок (50,02г) яснобрунатного кольору, розчинний у воді і нижчих спиртах. Вихід склав 5,03% від маси повітряносухої сировини. Приклад 2. Гемостатичну активність поліфенольного комплексу з пагонів ожини сизої, одержаного за заявленим способом, вивчали in vitro. Висновок про наявність гемостатичного ефекту робили за часом зсідання крові у порівнянні з контролем - фізіологічним розчином та препаратами порівняння. Досліди проводились за методом Альтга узена, який базується на визначенні часу появи перших ниток фібрину. Для цього на підігріте до температури 37°С предметне скло наносили каплю крові, яку брали с вушної вени морської свинки та краплю дослідного розчину. Через кожні 1520сек. голкою проводили по краплі крові, фіксуючи появу першої нитки фібрину. Дію засобу, одержаного за заявленим способом, вивчали в дозах 7, 12, 17мг/мл у порівнянні з дією препаратів порівняння - екстрактом грициків звичайних і 5% розчином амінокапронової кислоти. Результати експерименту, оброблені методом варіаційнної статистики, представлені в Таблиці 1. 5 20220 6 Таблиця 1 Вивчення гемостатичної активності екстракту, одержаного за заявленим способом Досліджені засоби Контроль (дистильована вода) Доза, мг/мл 7 12 17 50 7 12 17 Засіб, одержаний за заявленим способом Амінокапронова кислота Екстракт грициків звичайних Аналіз даних Таблиці 1 свідчить про те, що засіб, одержаний за заявленим способом, визиває активацію процесу зсідання крові та призводить до гіперкоагуляції, зменшуючи тромбіновий час. Найефективнішоюдозою за гемостатичною активністю як нового засобу, так і екстракту грициків звичайних є 7мг/кг. У цій дозі засіб, одержаний за заявленим способом, перевищує препарати порівняння - амінокапронову кислоту в 1,03 рази, грицики звичайні в 1,44 рази. Даний екстракт може бути використаний для лікування кровотеч. Приклад 3. Вивчення діуретичної активності засобу, одержаного за заявленим способом, проводили у дослідах на безпородних білих щурах обох статей 200-280г за методом Е.Б.Берхіна. Дослідних тварин було поділено на 5 груп по 6 тварин у кожній: група 1 - контрольна; групи 2-4 - тварини, що одержували засіб, одержаний за заявленим способом, у дозах 10, 20, 30мг/кг; група 5 - тварини, що одержували препарат порівняння фуросемід (ефективна доза - 20мг/кг). При вивченні водного діурезу тварин тримали на постійному харчовому раціоні при вільному доступі до води. Як їжу в цей період щурам давали лише зерна пшениці. До водного навантаження (3% від Час зсідання крові, сек. 230,00±0,64 108,00±1,02 126,00±0,86 142,00±0,63 111,70±1,08 156,00±1,38 162,00±1,16 180,00±1,19 маси тіла) тварин протягом 2-3 годин позбавляли їжі й води. Досліджувані речовини вводили перорально (внутрішньошлунково), у ви гляді водних розчинів, стабілізованих твіном-80. Одночасно проводили контрольні дослідження на тваринах з аналогічним водно-харчовим раціоном, яким замість досліджуваних речовин вводили розчинник у еквівалентній кількості. Після цього тваринам у шлунок за допомогою зонду вводили водне навантаження в кількості 3% від маси тіла щурів. Відразу ж після водного навантаження щурів поміщали в індивідуальні клітки, пристосовані для збору сечі. Кількість сечі враховували щогодини на протязі 4 годин. Кількість сечі, виділеної контрольною групою тварин, приймали за 100%. Розрахунок робили за наступною формулою: V × 100% ДА = 0 , де Vк ДА - діуретична активність в %; V0 - об'єм сечі, виділеної тваринами дослідної групи, мл; Vк - об'єм сечі, виділеної тваринами контрольної групи, мл. Результати дослідження представлені у Таблиці 2. Таблиця 2 Вивчення діуретичної активності засобу, одержаного за заявленим способом Досліджувані засоби Доза, мг/кг Контроль 10 20 30 20 Засіб, одержаний за заявленим способом Фуросемід Дані Таблиці 2 свідчать, що найбільш активну діуретичну дію має засіб, одержаний за заявленим способом, в дозі 30мг/кг, який збільшував діурез через 4 години на 47,9% у порівнянні з контролем, та на 17,7% - з фуросемідом. Найбільш перспективною дозою для подальшого вивчення засобу, одержаного за заявленим способом як діуретичного засобу є 30мг/кг. Додаткові дослідження, проведені авторами, виявили помірні протизапальну, аналгетичну та Діурез за 4 години, мл/100г (М±m) 2,88±0,8 3,53±0.55 3,30±0,71 4,26±0,51 3,75±1,14 Активність до контролю, % 100,00 122,60 114,60 147,90 130,20 жарознижуючу активності засобу, одержаного за заявленим способом. Таким чином, заявлений новий спосіб одержання з пагонів ожини сизої поліфенольного комплексу з переважно кровоспинною і діуретичною активністю та супутньою комплексною фармакологічною дією: протизапальною, аналгетичною, жарознижуючою. Засіб, одержаний за заявленим способом, є нетоксичним, без побічних дій, прида 7 20220 тним до тривалого застосування, насамперед, при профілактиці та лікуванні кровотеч різного ґенезу. Заявлений спосіб може бути здійснений в умовах стандартного фармацевтичного підприєм Комп’ютерна в ерстка М. Ломалова 8 ства, з використанням стандартного обладнання та екологічно безпечних реактивів. Спосіб передбачає використання доступної вітчизняної рослинної сировини. Підписне Тираж 26 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601