Спосіб диференційної діагностики діабетичного гломерулосклерозу та хронічного гломерулонефриту

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для дифференциальной диагностики диабетического гломерулосклероза и хронического гломерулонефрита. Известны способы лабораторной дифференциальной диагностики диабетического гломерулосклероза и хронического гломерулонефрита по наличию у больных диабетическим гломерулосклерозом глюко-зурии и гипергликемии [Рябов СИ. Болезни почек. - Ленинград: Медицина, 1982. - С. 187-205]. Эти способы наиболее часто используются в клинической практике. Однако они обладают существенными недостатками: резкими колебаниями концентрации глюкозы в крови и в моче в зависимости от диеты и медикаментозной терапии сахарного диабета, а также прогрессивным снижением гипергликемии и глюкозурии по мере нарастания степени тяжести диабетического гломерулосклероза. Так, при низкоуглеводной диете и адекватной инсулинотерапии сахарный диабет в течение длительного времени может быть компенсированным, при этом концентрация глюкозы в крови бывает нормальной и глюкозурия отсутствует. У больных инсулинозависимым и инсулинонезависимым сахарным диабетом с развитием диабетического гломерулосклероза наблюдается уменьшение гипергликемии и уменьшение или исчезновение глюкозурии. Наиболее близок к заявляемому объекту по достигаемому результату способ дифференциальной диагностики диабетического гломерулосклероза и хронического гломерулонефрита по характерному для диабетического гломерулосклероза повышению клубочковой фильтрации [Мухин H.A., Дедов И П., Шестакова М.Б. и созвт. Функциональные почечные резервы у больных сахарным диабетом //Тер.архив,-1990.-Т.62.-№ 2,- С 107-110], которую определяют по клиренсу эндогенного креатинина а условиях белковой нагрузки. Недостатки этого способа следующие: информативность только в ранних стадиях диабетического гломерулосклероза, значительные колебания скорости клубочковой фильтрации в зависимости от степени компенсации сахарного диабета и невозможность применения его у больных с хронической почечной недостаточностью. У больных диабетическим гломерулосклерозом без нарушения функции почек метод дает низкую точность: в 25-50% случаев доп ускаются диагностические ошибки. Задача изобретения - повышение точности способа для лабораторной дифференциальной диагностики диабетического гломерулосклероза и хронического гломерулонефрита. Указанная задача достигается тем, что определяют концентрацию плазминогена в плазме крови, для чего бестромбоцитную плазму крови разводят в два раза натриево-фосфатным буфером pH 7.4; полученную смесь наносят на колонку с лизин-агарозои, биоспецифически связанный с субстратом плазминоген элюируют 0,1 М раствором эпсилон-эминокапроновой кислоты, измеряют экстинкцию элюата на спектрофотометре, рассчитывают по величине экстинкции элюата концентрацию плазминогена в плазме и при его величине 0,187 мг/л и выше диагностируют диабетический гломерулосклероз, 0,150 мг/л и менее хронический гломерулонефрит. Заявляемый способ дифференциальной диагностики диабетического гломерулосклероза и хронического гломерулонефрита осуществляется следующим образом: К 1 мл цитратной плазмы крови, лишенной тромбоцитов центрифугированием при 3000 об/мин в течение 15 мин, прибавляют 1 мл 0,05М нэтриевофосфа тного буфера, pH 7,4. Полученную смесь наносят на колонку, заполненную 3 мл застывшей лизин-агарозы. Затем плазминоген, биоспецифически связанный с субстратом, элюируется 0,1 М раствором эпсилон-аминокапроновой кислоты (учитываются три первые порции элюата по 3 мл каждая), На спектрофотометре СФ-46 измеряют экстинкцию каждой порции при длине волны 280 и 320 нм (Е320 " по-п равка на мутность). Концентрацию плазминогена рассчитывают по формуле: где Е = Е280-Е 320 " разница величин экстинкции, измеренных при длине волны 280 нм и 320 нм; 17,0 коэффициент экстинкции 1% раствора плазминогена при pH 7,4 и длине волны 280 нм; V1 - объем взятой для анализа плазмы; V2 - объем спектрофотометрируемого раствора в л. У здоровых лиц доверительный интервал концентрации плазминогена в бестромбоцитной плазме составляет 0,120-0,150 мг/л. Точность способа: ошибка в двух параллельных определениях не превышает ±3,3%. Примеры, подтверждающие возможность использования изобретения с получением положительного эффекта при использовании всей совокупности признаков изобретения, указанных в его формуле. Пример 1. Больная 3., 31 г, (история болезни № 4926). Диагноз: -инсулинзависимый сахарный диабет, тяжелая форма, фаза субкомпенсации, диабетический гломерулосклероз, нефротический синдром. Скорость клубочковой фильтрации по эндогенному креатинину в условиях белковой нагрузки 88 мл/мин, суточная глюкозурия 12 г. Концентрацию плазминогена определяли следующим образом: к 1 мл цитратной плазмы прибавили 1 мл 0,05 М натриево-фосфатного буфера, pH 7,4, полученную смесь нанесли на колонку, заполненную 3 мл застывшей лизин-агарозы, биоспецифически связанный с субстратом плазминоген элюировали тремя порциями по 3 мл 0,1 М раствора эпсилон-аминокапроновой кислоты, на спектрофотометре измерили экстинкцию каждой порции при длине волны 280 и 320 нм, полученные величины экстинкции использовали для расчета концентрации плазминогена: мг/л, на основании чего диагностирован диабетический гломерулосклероз. В данном примере диагноз подтвержден совокупностью клинических и лабораторных данных. Скорость клубочковой фильтрации по эндогенному креатинину нормальна, тогда как концентрация плазминогена в плазме крови повышена. Это подтверждает большую точность заявляемого метода по сравнению с прототипом. Пример 2. Больная Н., 17 лет (история болезни N5 1417). Диагноз. Инсулинзависимый сахарный диабет, тяжелая форма, фаза декомпенсации, диабетический гломерулосклероз, мочевой синдром. Суточная глюкозурия 25 г, скорость клубочковой фильтрации по клиренсу эндогенного креатинина в условиях белковой нагрузки 144 мл/мин. Концентрация плазминогена в бестромбоцитной плазме, определенная выше заявленным способом: 1 мл бестромбоцитной плазмы, развели 1 мл 0,05 М натриево-фосфатного буфера pH 7,4, смесь нанесли на колонку с лизин-агарозой, связанный с субстратом плазминоген элюировали 0,1 М раствором эпсилон-аминокапроновой кислоты, после спектрофотометрирования трех порций элюата получили величины экстинкции, которые использовали для расчета концентрации плазминогена: мг/л, на основании чего диагностирован диабетический гломерулосклероз. В данном примере диагноз подтвержден всейсовокупностью клинических и лабораторных данных. Показано совпадение повышения концентрации плазминогена (заявленный способ), скорости клубочковой фильтрации по клиренсу креатинина в условиях белковой нагрузки (прототип) и глюкозурии (аналог). Это подтверждает возможность диагностики диабетического гломерулосклероза с помощью заявляемого способа. Пример 3. Больной К., 43 года (история болезни № 2278). Диагноз. Хронический гломерулонефрит, мочевой синдром. Скорость клубочковой фильтрации по эндогенному креатинину в условиях белковой нагрузки 115 мл/мин, суточная глюкозурия О. Концентрация плазминогена, определенная заявляемым выше способом: 1 мл бестромбоцитной плазмы развели 1 мл 0,05 М натриево-фосфатного буфера pH 7,4, смесь нанесли на колонку с лизин-агарозой, связанной с субстратом плазминоген элюировали 0,1 М раствором эпсилон-аминокапроновой кислоты, после спектрофотометрирования трех- порций элюата получили величины экстинкции, которые использовали для расчета концентрации плазминогена: В приводимом примере диагноз хронического гломерулонефрита подтвержден совокупностью клинических и лабораторных данных. Концентрация плазминогена в плазме крови (заявленный способ) нормальна, что характерно для хронического гломерулонефрита, но не для диабетического гломерулосклероза. Скорость клубочковой фильтрации по эндогенному креатинину (прототип) нормальна, глюкозурия отсутствует, что также характерно для хронического гломерулонефрита, но не для диабетического гломерулосклероза. Это подтверждает возможность дифференциальной диагностики хронического гломерулонефрита и диабетического гломерулосклероза с помощью заявляемого способа. Примера. Больной К., 36 лет (история болезни № 1214). Диагноз. Инсулиннезависимый сахарный диабет, тяжелая форма, стадия декомпенсации. Конкурирующий диагноз. Хронический гломерулонефрит, мочевой синдром. Диагноз мембранозно-пролиферативной формы хронического гломерулонефрита подтвержден пункционной биопсией почки. Суточная глюкозурия 38 г/л, скорость клубочковой-фильтрации 137 мл/мин. Концентрация плазминогена в плазме, определенная заявляемым выше способом: к 1 мл бестромбоцитной плазмы прибавили 1 мл 0,05 М натриево-фосфатного буфера pH 7,4, смесь нанесли на колонку с лизинагарозой, связанной с субстратом плазминоген элюировали 0,1 М раствором эпсилон-аминокапроновой кислоты, после спектрофотометрирования трех порций элюата получили величины экстинкции, которые использовали для расчета концентрации плазминогена: Приводимый пример демонстрирует сложность дифференциальной диагностики в случае одновременного наличия у больного сахарного диабета (без диабетического гломерулосклероза) и хронического гломерулонефрита. Ни скорость клубочковой фильтрации (прототип), ни величина' суточной глюкозурии (аналог) не позволили диагностировать хронический гломерулонефрит. В то же время нормальная концентрация плазминогена (заявляемый способ) позволила отрицать наличие диабетического гломерулосклероза и свидетельствовала в пользу хронического гломерулонефрита, диагноз которого подтвержден пункционной биопсией почки. Данный пример демонстрирует возможность дифференциальной диагностики диабетического гломерулосклероза и хронического гломерулонефрита с помощью заявляемого способа. Для проверки дифференциально-диагностической ценности заявляемого способа проведены исследования у 30 здоровых лиц, 19 больных диабетическим гломерулоскле-розом и 15 больных хроническим гломерулонефритом без хронической почечной недостаточности. M±tm-доверительные интервалы при уровне значимости Р=0,001. Параметр t - коэффициент, указывающий на вероятность того, что полученная величина ошибки выборки будет не больше действительной ошибки, допущенной вследствие несплошного характера наблюдения [Сепет-лиев Д. Статистические методы в научных медицинских исследованиях. - М.: Медицина, 1968]. t0, t1 - критерии СТЬЮДЕНТА для сравнения средних величин [Лакин Г. Биометрия. -М.: Высшая школа, 1980]. Различия достоверны при Р