Штам гриба реnісіllіuм funісulоsuм тном.-продуцент токсину для боротьби з кровосисними комарами

Штам гриба Penicillium funiculosum Thorn. КМКУ № 21224 - продуцент токсину для боротьби з кровосисними комарами. Недоліком цього штату є низька стійкість бактеріального екзотоксину в навколишньому середовищі, що пов'язано з його швидкою деструкцією в воді. В основу винаходу поставлено завдання знайти штам, патогенний для кровосисних комарів, особливо роду Culex, позбавлений недоліків прототипу. Технічний результат полягає в підвищеній стійкості мікотоксину штаму в водному середовищі, виявленій властивості інгібітора розвитку, що проявляється в затримці онтогенезу водних фаз комарів. Таким вимогам відповідає штам грибів Penicillium funiculosum Thorn, (клас Deuteromycetes порядок Moniliales), виділений з личинок комарів родів Aedes і Culex, знайдених в природних лісових водоймах в околицях Києва (Пуща-Водицьке лісництво). Штам зберігається в музеї ентомопатогенних вірусів І мікроорганізмів КМКУ №21224. Отриманий штам має такі морфологічні та фізіологічні характеристики: Культурально-морфологічні ознаки. С > ю со і! 23149 Колонії на агаризованому середовищі Чапека помірно ростучі, складаються головним чином Із тонкої білої або жовтої міцеальної повсті, легко знімаються в конідіальній зоні, спороносні, тьм'яно-жовто-зелені, Інколи повстяні по всій поверхні, з обмеженим спороношенням, на зворотному боці з брунатно-оранжевим відтінком, з рясним ексудатом, у вигляді м і к р о с к о п і ч н и х краплин, з запахом виразним, приємним, КОНІДІЄНОСЦІ відходять від коротких сильно гіллястих гіф, гладенькі, біля 20-30 х 2,5-Зт зрідка 50т. Грони компактні типово двоярусні, мають тенденцію до паралельного розміщення відносно головної осі, складаються з 10-12 метуль, 8-Ю х 3~2 т , з зовнішніми метулями з і г н у т и м и , що мають тенденцію до паралельного розміщення відносно головної осі. Стеригми типово загострені в щільних пучках, 8-9 х 1,5-8 m утворені конідії в тісно відходячих ланцюжках. Конідії майже кулеподібні до еліптичних, 2,5-3 х 2-2,8 т , гладенькі, поки молоді, потім товстостінні І нерегулярно шершаві, коли дозрілі, темно-оливково-зелені в масі. ФІзіолого-біохімічні ознаки. Оптимальна температура росту - 2530°С, рН 4,5-5,2. Зберігається при температурі 4-6°С на сусловому агарі, пересів 1-2 рази в рік. Штам P.funiculosum Ідентифікований по визначнику [Пидоплечко Н.М. Пенициллы. К.: Наукова думка, - 1972. - 149 с]. Суть винаходу пояснюється таким конкретним прикладом використання штаму гриба P.funiculosum. Матеріал для обробки личинок комарів отримують шляхом вирощування штаму гриба в чашках Петрі на протязі 20 діб при 10 15 20 25 30 35 40 27°С на твердому середовищі Чапека такого складу, г/л води: Глюкоза 30,0 NaNO3 2,0 КН2РО4 1,0 MgSO4 0,5 КСІ 0,5 FeSO4 0,01 Агар 2% Грибну масу знімають з субстрату скальпелем, вміщують по одному граму в пробірки зі стерильною водою по 9 мл в кожній. Після подрібнення міцелію гриба скляною паличкою, пробірки ставлять при t + 4°С для екстракції мікотоксину. Через 48 годин грибну масу фільтрують і роблять відповідні розведення екстракту мікотоксину. доводячи його до концентрацій 0,025; 0,05; 0,1 І 0,2 мг/л. Личинок комарів вміщують в стерильні скляні посудини з розчинами вказаної концентрації. Облік проводять через 1, 3, 5 діб (таблиця). Як видно з таблиці, токсичні властивості гриба виявляються уже через одну добу. Всі личинки гинуть при максимальній концентрації через 5 діб. Біологічна активність складає через одну добу ЛК-50 - 0,0360,054 мг/л, через 5 діб - 0,023-0,033 мг/л. Токсичність штаму проявляється також в тому, що в концентраціях, які не є летальними темп розвитку комах гальмується і виліт Імаго затримується на 3-5 днів. Таким чином, штам P.funiculosum не тільки перевищує по рівню активності прототип І аналоги, про що свідчать нижчі показники ЛК-50, але є більш стійким в водному середовищі і гальмує темпи розвитку водних фаз комарів. ЦІ якості штаму обумовлені особливостями продукованого ним мікотоксину. Загибель личинок комарів Culex pipiens molestus в залежності від ступеня токсичності грибного екстракту Концентрація екстракту, мг/л Смертність личинок, % через 1 добу 0,025 0,059 0,100 0,200 Контроль (без екстракту) через 3 доби через 5 діб 31 55 58 84 1 45 76 85 97 1 50 77 88 100 7 Строки появи Імаго, діб 18 16 16 13 23149 Упорядник Замовлення 4526 Техред М.Келемеш Коректор Н. Король Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, КиТв-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, ву.Гагаріна, 101