Препарат людського фактора хі згортання крові та спосіб його одержання

1. Препарат человеческого фактора XI свертывания крови, отличающийся тем, что удельная активность составляет не менее 100 ед/мг белка и имеет качество, пригодное для терапии. 2. Способ получения фактора XI свертывания крови, включающий осаждение и хроматографию, отличающийся тем, что осаждение проводят методом фильтрации-адсорбции на серии фильтрующих элементов с пористостью 0,5-2,0 мкм, образованных целлюлозой и перлитами, несущими отрицательные заряды, а также небольшим количеством смолы, заряженной положительно, далее фильтр промывают буферным раствором с рН 5,5-6,5, содержащим цитрат натрия, двунат риевый фосфат, фосфат калия, хлорид натрия и двунатриевую соль ЭДТА, целевой продукт элюируют с фильтра буферным раствором в градиенте концентрации хлорида натрия 0,5-2,0 моль, при этом добавляют к раствору для элюирования 0,10,2 ед/мл антитромбина III, очищают хроматографией на катионообменной смоле, состоящей из сульфатсефарозы, при этом колонку уравновешивают в буферном растворе, содержащем цитрат натрия, хлорид натрия, лизин и аргинин, при рН 5,5-6,5, затем колонку промывают буферным раствором, содержащим цитрат натрия, двунатриевый фосфат, фосфат калия, хлорид натрия, лизин и аргинин при рН 6,1-6,9, целевой продукт элюируют в градиенте рН 7-8 и хлориде калия 0,15-0,20 моль. 3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что адсорбированный с фильтрующих элементов раствор фактора XI диализуют, концентрируют и подвергают обработке для вирусной инактивации. 4. Способ по любому из пп. 2, 3, отличающийся тем, что раствор фактора XI после элюирования стабилизируют путем прибавления 0,5-3,0 ед/мл антитромбина III и 0,5-4,0 ед/мл гепарина на 100 ед/фактора XI, затем лиофилизируют. Изобретение относится к способу получения фактора XI человеческой плазмы с очень высокой удельной активностью, предназначенного для терапевтического применения. Фактор XI, или плазменный предшественник тромбопластина, представляет собой гликопротеин, который составляет часть контактной фазы в механизме за счет своего активирующего действия на фактор IX и, с другой стороны, составляет часть фибриколитической системы за счет своего активизируещего действия на плазминоген. Недостаточность фактора XI является наследственной и выражается в виде аутосонного рецессионого признака. Эта недостаточность является редкой, но она распространена у некоторых народностей Среднего Востока. Как и для других факторов, недостаточность которых является редкой (фактор V, XII, X), очищенные терапевтические продукты полученные на основе человеческой плазмы, являются еще редкими или несуществующими, а единственная за местительная терапия осуществляется при помощи всей плазмы или всплывшей фракции криоосажденной плазмы, однако это приводит к одновременному введению бесполезных количеств других протеинов плазмы и, следовательно, к риску протекания различных вторичных существенных реакций после многократных инъекций. Очистка фактора XI в опытном масштабе могла быть осуществлена лишь с трудом и при условии использования сильных ингибиторов, что указывает на то, чтоб эта молекула является очень лабильной. Очистка была осуществлена в результате последовательности из 4 или 5 стадий новообменной и аффинной хроматографии либо исходя из плазмы (Bouma et Gtiffin, J. Bioi. Chem., 1977, 252, 6432-6437), либо исходя из тромбоцитов (Sehiffman et Yeh, Thromb, Res, 1990, 60, 87-97). Препарат бычьего фактора XI высокой чистоты также очищался, исходя из 20 литров плазмы методами осаждения и хроматографии, причем совокупность стадий была проверена примерно за 9 см О h CM 6час тест гипотензии на крысах; тест токсичности на мышах. Тесты на кроликах показывают, что продукт не является тромбогенным, потому что ДЕ5о (эффективная доза - 50) превышает 1000 Ед ФХІ/кг, тогда как тот же самый параметр составляет от 40 до 60 Ед/кг для концентрата PPSB, который, следовательно, является намного более тромбогенным и может эффективно вызывать явление тромбоза и внутрисосудистого свертывания крови, распространенного у людей при большой дозе. Концентрат не вызывает явления гипотензии, когда он вводится внутривенным путем крысам с дозой величиной 50 Ед ФХІ/кг. Это модельное животное является очень чувствительным к присутствию плазменных компонентов с вазоактивными свойствами, что доказывает отсутствие этих компонентов в концентрате фактора XI, полученном по описанному способу. Введенный внутривенным путем мышам с большой дозой (2500 Ед/кг), он не вызывает никакого летального исхода и никакого отклонения в поведении в течении периода в 7 дней. ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Бульв. Лесі Українки, 26, Київ, 01133, Україна (044) 254-42-30, 295-61-97 Підписано до друку «Д 2001 р. Формат 60x84 1/8. Обсяг 0 ч5~^обл.-вид. арк. Тираж 50 прим. Зам. ,^