Спосіб діагностики целіакії

Спосіб діагностики целіакії шляхом дослідження крові, який відрізняється тим, що виконують імуноферментний аналіз крові з одночасним визначенням титрів високоспецифічних для целіакії антитіл та тканинної трансглутамінази до дезамінованих пептидів гліадину класів IgA та IgG, порівнюють інтенсивність забарвлення з кольором розчину, розраховують концентрацію антитіл за формулою: Корисна модель, що заявляється, стосується медицини, точніше гастроентерології, і сприяє покращенню діагностики целіакії за рахунок використання більш точного методу діагностики. Незважаючи на значний розвиток медичної науки у сфері діагностики та лікування захворювань травного каналу, проблема поліпшення й розширення діагностичних можливостей целіакії (глютенової ентеропатії) лишається актуальною в усьому світі. Целіакія - це хронічне, генетично обумовлене, аутоімунне захворювання, яке виникає як наслідок стійкого несприйняття продуктів, які містять глютен (пшеницю, жито, ячмінь, овес), уражує слизову оболонку тонкого кишечнику та призводить до розвитку її атрофії. На сьогоднішній день целіакію розглядають, як найчастіше захворювання тонкої кишки, яке уражує приблизно 1% усієї популяції [3]. Відсутність своєчасної діагностики та специфічного лікування целіакії призводить до значного погіршення якості життя пацієнтів та на 10-30% підвищує смертність. Діагностика целіакії складається з трьох основних діагностичних етапів: клінічного, лабораторного та інструментального. Враховуючи відсутність патогномонічних для целіакії клінічних ознак [12], складність, інвазивність, коштовність та психологічне неприйняття багатьма пацієнтами інструментального обстеження (капсульної ендоскопії, інтестиноскопії або верхню ендоскопію з біопсією), лабораторну діагностику вважають базисним методом дослідження [11]. Саме завдяки впровадженню у 1980-1990-хх pp. методів специфічної лабораторної діагностики, погляди на поширеність захворювання та актуальність проблеми для сучасної медицини кардинально змінилися. Стандартними лабораторними показниками, які використовуються в якості діагностичних маркерів глютенової ентеропатії є антитіла до гліадину (антигліадинові антитіла (АГА)), компонентів сполучної тканини - ендомізію (антиендомізиальні антитіла (АЕА)), ретикуліну (антиретикулінові антитіла (АРА)) та до тканинної трансглутамінази (тТГ) [4]. З них найбільш вживаними серологічними маркерами тривалий час залишалися АГА (найпростіший та найдешевший показник) та антитіла до тТГ - тТГА. Дослідження АГА є найдешевшим, неінвазивним скринінговим методом відбору пацієнтів з груп ризику наявності целіакії для подальшого обстеження (проведення верхньої ендоскопії з біопсією). Але за своєю чутливістю та специфічністю АГА значно поступаються іншим маркерам. За літературними даними [2, 5] у 1040% випадків аналіз титрів антигліадинових антитіл може давати хибно - негативний результат навіть за наявності розгорнутої клінічної картини целіакії. Так, за даними Farell, 2002, Ferreira, 1992, Lemer, 1994 чутливість АГА IgA оцінена 75-90% у Результат зразка = (одиниці ) Ступінь поглинання зразка ´ TTTG / ДPG злегка позитивний контроль, TTG / ДПГ - злегка позитивне поглинання (одиниці ) (19) UA (11) 30904 (13) U де ТТГ - концентрація тканинної трансглутамінази; ДПГ - концентрація антитіл до дезамінованих пептидів гліадину і при значенні більше, ніж 20 Од/мл діагностують целіакію. 3 30904 4 дорослих при специфічності останніх відповідно Технічний результат від впровадження 86% та 82-95%. Для АГА IgG чутливість у дітей корисної моделі буде полягати у забезпеченні складає приблизно 89% при специфічності 95,5%, найранньої та більш точної діагностики целіакії, тоді як у дорослих ці показники відповідно перш за все у тих категорій хворих (діти, пацієнти з складають 69-84% та 73-90%. Антитіла до тТГ імунодефіцитом IgA, хворі на герпетиформний тТГА - мають кращі показники специфічності (94дерматит Дюринга), в яких діагностика утруднена 98%) та чутливості (95-90%), за рахунок чого або потребує високої точності. вважаються «класичним» серологічним методом В основу корисної моделі, що заявляється, скринінгового відбору пацієнтів для подальшого покладено завдання створення способу обстеження. На жаль, і цей показник має свої діагностики целіакії в найскладніших випадках - у недоліки (його концентрація не завжди корелює зі дітей, осіб з селективним імунодефіцитом IgA, ступенем ураженням тонкої кишки, іноді навіть за хворих на герпетиформний дерматит Дюринга та наявності атрофічних змін у кишечнику показник пацієнтів в концентрація стандартних антитіл не може залишатися незмінним). корелює з ураженням тонкої кишки за рахунок Тому пошук нових, більш точних та використання найновішого методу лабораторної досконалих методів діагностики целіакії є край діагностики. актуальною проблемою сучасної медицини. Поставлена задача досягається тим, що у Найбільш близьким до способу, що відомому способі діагностики целіакії шляхом заявляється, є спосіб діагностики целіакії [13], який дослідження крові згідно корисної моделі передбачає східцеву діагностику захворювання, виконують імуноферментний аналіз крові з спираючись на можливі клінічні симптоми, одночасним визначенням титрів високо виявлення в крові специфічних антитіл (АГА, специфічних антитіл та тканинної ТТГА) з подальшим підтвердженням отриманих трансглутамінази до дезамінованих пептидів результатів за допомогою інструментального гліадину (ДПГ) класів IgA та IgG, порівнюють дослідження (відеогастродуоденоскопії з біопсією інтенсивність забарвлення з кольором слизової оболонки дванадцятипалої кишки та контрольного розчину, розраховують концентрацію морфологічним аналізом біоптатів). Цей спосіб не антитіл за формулою: Сту піньпоглинаннязра зка Резу льтат зразка = ´ TTTG / ДP G злегка позитив ний контроль забезпечує діагностики целіакії серед групи TTG / ДP G - злегка позитив не поглинання «найскладних» пацієнтів з атиповим перебігом захворювання, діагностика целіакії в яких край де утруднена внаслідок: 1) селективного (первинного ТТГ - концентрація тканинної трансглутамінази або вторинного) IgA імунодефіциту, який дає ДПГ - концентрація антитіл до дезамінованих хибно-негативні результати стандартних пептидів гліадину серологічних досліджень та не дозволяє вірогідно і при значенні більш, ніж 20Од/мл діагностують оцінити наявність активної імунної реакції, 2) целіакію. затримки імунної реакції за ураженням слизової Спосіб здійснюється наступним чином: оболонки тонкої кишки; 3) в осіб з типовим для хворому з підозрою наявності целіакії виконується глютенової ентеропатії ураженням шкіри за типом імуноферментний аналіз крові з одночасним герпетиформного дерматиту Дюринга. Останні (сумарним) визначенням титрів високо дослідження показали, що антитіла до гліадину, специфічних для целіакії антитіл та людської які виробляються у хворих на целіакію, реагують тканинної трансглутамінази до дезамінованих лише з обмеженою кількістю специфічних епітопів пептидів гліадину класів IgA та IgG. Для цього молекули гліадину [6]. Теж саме стосується очищені та виділені пептиди гліадину та нативна зв'язування дезамінованих пептидів гліадину з людська ТТГ зв'язуються з сироваткою крові тканинною трансглутаміназою. Тому необхідно пацієнта. Оцінка результату проводиться використовувати нові методи, в яких вимірюється спектрофотометрично при порівнянні концентрація антитіл та тканинної інтенсивності отриманого забарвлення з кольором трансглутасінази саме до токсичних пептидів контрольного розчину. Негативним вважається гліадину, що дозволить отримувати більш точні результат менший 20Од/мл. Позитивними результати у порівнянні зі стандартними вважають результати, які перевищують 20Од/мл. серологічними маркерами [8, 9]. Крім того, з Ознаками, які відрізняють спосіб діагностики урахуванням того, що значна кількість хворих на целіакії від попередніх є можливість відбору для целіакію має селективний імунодефіцит IgA, більш лікування осіб, діагностика целіакії в яких є край чутливим є одночасне (сумарне) визначення у утрудненою - це пацієнти з селективним сироватці крові антитіл класів IgA та IgG. імунодефіцитом IgA, діти молодшого віку, хворі на Традиційні серологічні тести не дають повною герпетиформний дерматит та пацієнти, в яких мірою інформації щодо наявності в хворого підйом титрів серологічних показників герпетиформного дерматиту Дюринга: їх затримається у порівнянні з ураженням слизової чутливість досягає лише 60-75% [7, 11]. оболонки тонкої кишки. Крім того, враховуючи Європейське товариство педіатричної високу чутливість (98,6%) та специфічність (97%) гастроентерології (ESPGAN) рекомендувало тесту у випадках, коли проведення біопсії не є використання точної серологічної діагностики з можливим (відсутність діагностичної бази, діти метою зменшення кількості інтестинальних біопсій молодшого віку) такий діагностичний метод [10], що також потребує пошуку та використання дозволяє уникати біопсії. Подальший контроль за більш точних неінвазивних діагностичних ефективністю лікування може проводитися за лабораторних методів. результатами динаміки антитіл та тканинної (одиниці ) ( одиниці ) 5 30904 6 трансглутамінази до пептідів гліадину за 6-12 та 24 визначенням титру антигліадинових антитіл (АГА місяці лікування. Зниження аж до повної IgA). Результат виявився негативним. У віці 2,3 нормалізації лабораторних маркерів целіакії під роки батьки дитини звернулися за консультацією впливом лікування свідчить про вірність на кафедру факультетської терапії №1 діагностики та підтверджує комплайєнс хворого. Національного медичного університету імені За літературними даними, такого способу О.О.Богомольця. Був проведений серологічний діагностики целіакії ще не відомо. аналіз крові з одночасним визначенням титрів Спосіб, що заявляється, здійснюється шляхом антитіл та людської ТТГ класів IgA та IgG до чіткого дотримання методики виконання дезамінованих пептидів гліадину та - паралельно лабораторного дослідження. імунологічний аналіз крові. Згідно імунологічному Конкретні приклади застосування аналізу у дитини встановлений селективний Приклад №1. імунодефіцит IgA, який не дозволив діагностувати Хворий А., 56 років, був обстежений з приводу целіакію на рік раніше за результатами поліморфних скарг з боку шлунково - кишкового концентрації АГА IgA. Серологічний аналіз крові тракту (нелокалізований абдомінальний біль, показав, що концентрація антитіл до виражена печія, неможливість прийняття будь дезамінованих пептидів глиадину IgA та IgG якої їжі - виражена диспепсія (постпрандиальний склала 44,6Од/мл, ТТГ IgA та IgG - 56,2Од/мл. дистрес-синдром), відсутність ефекту від Встановлений діагноз -Целіакія, типовий перебіг. традиційних гастроентерологічних призначень; Селективний IgA імунодефіцит. Дитині призначене скарги не періодичні висипи на шкірі за типом специфічне лікування - безглютенове харчування з невеликого розміру пухирців, які сверблять. На подальшим динамічним аналізом концентрації момент огляду - чоловік нормальної статури, антитіл до пептидів гліадину та ТТГ за 6 та 12 підшкірна клітковина розвинута задовільно, шкіра місяців. За перший місяць лікування мати почала та видимі слизові оболонки бліді, на шкірі відмічати, що дитина стала більш спокійною, живіт передплічь - сліди розчосів. Живіт при пальпації зменшився у розмірах, став нормалізуватися здутий, при поверхневій пальпації безболісний, стілець - спочатку він став кашкоподібний, за 6 печінка не збільшена, ділянка підшлункової залози місяців - нормалізувався повністю. Поступово без змін. За результатами традиційного дитина стала набирати вагу. За результатами серологічного аналізу - титри антигліадинових імуноферментного аналізу отримана повна антитіл та тканинної трансглутамінази (ТТГ) нормалізація показників за 7,5 місяців лікування. негативні. У біоптаті слизової оболонки Рекомендовано подальше лікування. дванадцятипалої кишки - ділянки атрофії, За останній рік у клініці кафедри гіперплазія крипт. Нами проведено факультетської терапії №1 з курсом імуноферментний аналіз з одночасним післядипломної підготовки лікарів з визначенням титрів антитіл та людської ТТГ IgA та гастроентеролгії та ендоскопії НМУ імені IgG до дезамінованих пептидів гліадину. Отримані О.О.Богомольця було проведено наступні показники - 67Од/мл та 56,4Од/мл імуноферментний аналіз з визначенням титрів відповідно. Заключний діагноз: целіакія, атиповий антитіл до дезамінованих пептидів гліадину IgA та перебіг, герпетиформний дерматит. Хворому IgG 122 пацієнтам, людської ТТГ / пептиди призначено лікування - сувора безглютенова дієта гліадина IgA та IgG - 276 особам. З них за з повним виключенням з раціону усіх продуктів, які результатами першого аналізу виявлено 4 хворих містять глютен. За 3 місяці хворий почав відмічати на целіакію; за результатами другого - 8 хворих. В зменшення частоти виникнення висипів на шкірі, усіх осіб було проведено морфологічний аналіз покращився стан з боку травного каналу біоптатів слизової оболонки дванадцятипалої (зменшилася вираженість диспепсії). Повторний кишки, який дозволив виявити типові зміни та аналіз за 6 місяців показав зниження концентрацій верифікувати наявність целіакії. серологічних маркерів целіакії удвічі. За 12 місяців Таким чином, нами доведена користь показники нормалізувалися повністю, висипів на запропонованого способу діагностики целіакії. шкірі більше не виникало, гастроентерологічний Імуноферментний аналіз з одночасним стан пацієнта задовільний. визначенням титрів антитіл та людської ТТГ IgA та Хворому рекомендовано подальше лікування IgG до дезамінованих пептидів гліадину є високо протягом усього життя з контролем серологічних чутливим, точним та інформативним показників один раз на рік. діагностичним маркером глютенової ентеропатії. Приклад №2. Отримання позитивних результатів дозволяє Хвора Д., 2,3 років, з 6 місяців (після введення діагностувати целіакію у найскладніших випадках перших прикормів) почалися болі у животі, діарея в осіб з селективним IgA імунодефіцитом, у дітей 6-9 разів на добу, поліфекалія, збільшення молодшого віку, за наявності герпетиформного окружності та виражене здуття живота, підвищене дерматиту Дюринга та уникати біопсії у тому разі, газоутворення, виражена психоемоційна коли її виконати неможливо. лабільність. Дитина почала відставати у розвитку Спосіб діагностики целіакії, що заявляється, (приєднався дефіцит маси тіла, поступово - росту). забезпечує покращення діагностики у Неодноразово лікувалася з приводу дизбактеріозу, найскладніших випадках (в осіб з селективним IgA призначалися ферментні препарати, але імунодефіцитом, у дітей молодшого віку, за вираженого ефекту не відмічалося. У віці 1 року наявності герпетиформного дерматиту Дюринга) вперше виникла підозра на наявність целіакії. та сприяєтиме покращенню якості, збільшенню Дитині був проведений серологічний аналіз крові з 7 30904 тривалості життя пацієнтів та є фактором профілактики розвитку тяжких ускладнень. Література 1. Beutner EH, et al.: Sensitivity and Specificity of IgA-class antiendomysial antibodies for dermatitus herpetiformis and findings relevant to their pathogenic significance. Journal of the American Academy of Dermatology -1986-15:P.464-473. 2. Catassi C; G. Fanciulli; A. R. D'Appello et al. Antiendomysium versus Antigliadin Antibodies in Screening the General Population for Coeliac Disease // Am. J. Gastroenterol.- 2000- 95: 7: P. 732 736 3. Celiac disease. WGO-OMGE: Practice guidelines// World Gastroenterology News - Vol.10, 2005. - Suppl.l- P. 1-8. 4. Joseph A Murray The widening spectrum of celiac disease // American Journal of Clinical Nutrition, Vol. 69, No. 3, Р.354-365. 5. Marsh MN. Gluten, major histocompatibility complex, and the small intestine. A molecular and immunobiological approach to the spectrum of gluten sensitivity ("coeliac sprue")// Gastroenterology - 1992 -102: P. 330-354. 6. Osman AA et al. B-Cell epitopes of gliadin//Clin. Exp. Immunol. -2000-121:P.248-254. 7. Porter WM et al. Tissue Transglutaminase Antibodies in Dermatitis Herpetiformis // Correspondence. Gastroenterology - 1999 - 117: P.749-750, 8. Prince HE Evaluations of the INOVA Diagnostics Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Kits for Measuring Serum Immunoglobulins G (IgG) and IgA to Deamidated Glidin Peptides // Clinical and Vaccine Immunology -2006-13, P.150-151, 9. Schwertz E, et al. Serologic assay based on gliadin-related nonapeptides as a highly sensitive and specific diagnostic aid in celiac disease // Clinical Chemistry -2004- 50: P.2370-2375, 10. Working Group of European Society of Paediatric Gastroenterology and Nutrition. Revised criteria for diagnosis of coeliac disease // Arch Dis Child -1990-65:P.909-911, 11. Губська О.Ю., Купчик Л.М. Вивчення концентрації антитіл до тканинної трансглутамінази у сироватці крові гастроентерологічних пацієнтів в діагностиці целіакії // Медична хімія.- 2005 - Т. 7 -№1-С.72-74 12. Парфенов А.И., Крумс Л.М. Современная концепция целиакии / РМЖ 2004; вып.2 13. В.Г.Передерій, О.Ю.Губська, Ступак A.M. Деклараційний патент Спосіб ступінчастої діагностики целіакії: - Заявл. 23.03.2005; Опубл. 15.08.2005, бюл.№8. 8