Штам вірусу кліщового енцефаліту flavivirus encephalitidem ixodicum № 2809 для виготовлення специфічних імунобіологічних препаратів

Штам кліщового енцефаліту №2809, ізольований від кліщів Ixodes ricinus, зібраних в активному природному вогнищі цього вірусу в селі Мирча Велико-Березнівського району Закарпатської області в 1979 році, депонований в Колекції штамів арбовірусів Львівського НДІ епідеміології та гігієни МОЗ України за №67. (19) (21) u200812570 (22) 27.10.2008 (24) 12.05.2009 (46) 12.05.2009, Бюл.№ 9, 2009 р. (72) ЛОЗИНСЬКИЙ ІГОР МИКОЛАЙОВИЧ, UA, КОЗЛОВСЬКИЙ МИХАЙЛО МИХАЙЛОВИЧ, UA, БІЛЕЦЬКА ГАЛИНА ВАЦЛАВІВНА, UA, ФЕДОРУК ВОЛОДИМИР ІЛЛІЧ, UA, ДРУЛЬ ОКСАНА СТЕФАНІВНА, UA, РОГОЧИЙ ЄВГЕН ГЕОРГІЙОВИЧ, UA 3 41118 4 Таблиця 1 Характеристика штамів вірусу кліщового енцефаліту за ступенем вірулентності для білих безпородних мишей Штами 2809 Соф'їн Пан 2288 сисунки в/м 12,0 13,3 11,2 10,2 в/м 9,0 9,5 Нейровірулентність у lg LD50/0,02мл 3-тижневі п/ш І.і. в/м 8,0 1,0 7,7 8,5 8,0 8,7 0,8 7,7 дорослі п/ш 4,3 7,5 7,1 5,5 І.і. 3,4 1,0 0,9 2,2 Примітки: 1. в/м - внутрішньомозкове інфікування. 2. п/ш - підшкірне інфікування. 3.1.і. - індекс інвазивності Штам №2809 добре розмножується в перещеплюваній культурі клітин СНЕВ, викликаючи чітку деструкцію клітин на 3-4 добу. Пік накопичення інфекційної і гемаглютинуючої активності спостерігається на 4 добу. Титр по тканинній цитопатогенній дозі (ТЦД) корелює із показником інтрацеребральної активності і становить максимально 10,25 lg ТЦД50 в 0,1мл, що є вищою репродуктивною активністю в перещеплюваних клітинах лінії СНЕВ порівняно з аналогічним штамом №2288, для якого цей показник становив 9,2 lg LD50/0,1мл. Гемаглютинуюча активність пропонованого штаму при репродукції в мозку мишей становить 1:320-1:1280 в зонах рН 6,3-6,7. В реакції біологічної нейтралізації штам №2809 нейтралізується гомологічною сироваткою і сироватками до інших штамів вірусу кліщового енцефаліту. Індекс нейтралізації із гомологічною сироваткою - 4,0 lg. Із сироваткою до штаму Соф'їн він складає 2,2 lg, до штамів Абсеттаров, Пан, 2,5-2,8 lg, до штаму №2288 - 3,3 lg. Антигенні властивості штаму №2809 вивчені і в реакціях зв'язування комплементу (РЗК), гальмування гемаглютинації (РГГА) та непрямої імунофлюоресценції (РНІФ). Встановлено, що штам № 2809 володіє значно вищою антигенною активністю порівняно із штамами Соф'їн та Абсеттаров і щонайменше в 2 рази перевищує за титрами комерційний антиген кліщового енцефаліту вироб ництва Томского НПО "Віріон" (С. 81, К. 1751). Так, в перехресній РЗК при дослідженні гіперімунних сироваток та імунних асцитичних рідин безпородних білих мишей до вказаних серотипів вірусу кліщового енцефаліту з’ясовано, що антиген штаму №2809 дає титри антитіл з гомологічною імунною сироваткою 1:640, з імунними сироватками еталонних штамів Абсетаров і Пан, відповідно, - 1:80 і 1:40, місцевого штаму №2288 - 1:160. Ці результати свідчать про високу антигенну активність та чітку відмінність антигенної структури штаму №2809 вірусу кліщового енцефаліту від "східного" і "західного" його різновидностей, та в деякій мірі і від його згаданого прототипу, циркулюючого в Україні. Виражені відмінності штаму №2809 від штаму Соф"їн та №2288 виявлені і при вивченні їх фізико-хімічних властивостей. Як видно із даних таблиці 2 індекси інактивації (різниця між контрольним титром і титром після обробки) пропонованого штаму ефіром (4,8), дезоксихолатом натрію (ДХNa) (3,7), ацетоном (4,10), підвищеною до +50°С температурою (3,6) виразно відрізнялися від аналогічних показників прототипних штамів і вказують при цьому на більшу чутливість першого варіанту до дії фізико-хімічних факторів, що є позитивним моментом для виготовлення на його основі імунобіологічних препаратів. Таблиця 2 Результати вивчення фізико-хімічних властивостей штамів вірусів кліщового енцефаліту в культурі клітин СНЕВ Штами 2809 Соф'їн 2288 Контрольний титр* 10,2 8,7 9,2 Після обробки ефіром** 5,4/4,8 5,2/3,5 6,4/2,8 Після обробки ДХNa** 6,5/3,7 5,2/3,5 7,2/2,0 Після обробки ацетоном** 6,1/4,1 5,0/3,7 6,2/3,0 Примітки: 1. * - в lg ТЦД50 в 0,1мл. 2. ** - в чисельнику титр після обробки, в знаменнику індекс інактивації. Після термоінактивації** 6,6/3,6 6,1/2,6 7,4/1,8 5 41118 Порівняльне вивчення імунобіологічних властивостей штамів вірусу кліщового енцефаліту проводили шляхом визначення здатності їх стимулювати у мишей утворення ендогенного інтерферону (ІФН) та антитіл (AT) до Т-залежного антигену еритроцитів барана. Встановлено (таблиця 3), що штам №2809 володіє високою інтерфероніндукуючою активністю, хоча і дещо нижчою порівняно із штамом №2288. Динаміка інтерфероноутворення, індукованого запропонованим штамом характеризується трьома вираженими піками накопичення 6 ІФН в крові: 320-640, 160-320 та 160од/мл відповідно через 24, 72-120 годин і 10-12 днів після зараження дозою 10 ЛД50/0,2мл. Інфікування тварин нижчою у 50 разів дозою штаму №2809 (0,2 ЛД50/0,2мл) викликає у перші дні інтерфероногенезу адекватно і невисокі концентрації сироваткового ІФН (40-80од/мл), проте в подальшому на 2-му піку його активності вони досягають високих величин (160од/мл), рівнозначних, як і при введенні високої дози (10 ЛД50/0,2мл). Таблиця 3 Інтерфероніндукуюча активність штамів №№2809 та 2288 вірусу кліщового енцефаліту Штами №2809 №2288 Штами №2809 №2288 Доза в ЛД50 10 0,2 10 0,2 Доза в ЛД50 10 0,2 10 0,2 5 год. 20