Спосіб пулування сироваток крові великої рогатої худоби і молока корів при дослідженні на лейкоз методом імуноферментного аналізу

Спосіб діагностичного обстеження великої рогатої худоби на лейкоз методом імуноферментного аналізу, який характеризується тим, що включає об'єднання проб сироваток крові або молока в пули. (19) (21) u200810539 (22) 20.08.2008 (24) 10.11.2009 (46) 10.11.2009, Бюл.№ 21, 2009 р. (72) АБРАМОВ АРТУР ВІКТОРОВИЧ, МЕЖЕНСЬКИЙ АНДРІЙ ОЛЕКСАНДРОВИЧ, РЕЗУНЕНКО ЄВГЕН ВОЛОДИМИРОВИЧ, АЛЕКСЄЄВА ГАЛИНА БОРИСІВНА 3 200мкл) вносили по 5мкл проб молока чи сироваток крові (кінцеве розведення 1:25). Нами запроваджено внесення в лунки імунопланшету по 200мкл буферу для розведення сироватки або молока, потім за допомогою 1 канального дозатору (5-200мкл) внесення по 50мкл пулів молока чи сироваток крові (кінцеве розведення 1:25). Пули складаються із 5 зразків молока чи сироваток крові (по 10мкл від кожної тварини). У існуючих способах діагностики лейкозу ВРХ методом ІФА передбачається тестування одного зразку сироватки крові або молока в одній лунці (90 зразків на одному імунопланшеті). Нами запропоновано тестування по 5 зразків сироватки крові або молока в одній лунці (одразу 450 зразків на одному імунопланшеті), що в п'ять разів скорочує час проведення досліджень, спрощує роботу лабораторним спеціалістам, а також у 4 рази зменшує затрати державних коштів на закупівлю відповідних тест-систем і при цьому отримані результати досліджень є цілком коректними, що підтверджується низкою проведених дослідів з використанням великої кількості матеріалу як із благополучних, так і неблагополучних щодо за 45285 4 хворювання на лейкоз ВРХ тваринницьких господарств. Відомості, що підтверджують можливість здійснення корисної моделі. При проведенні роботи були використані зразки сироваток крові і молока з завідомо відомими нам показниками: 1. Позитивні (+) в РІД і ІФА на антитіла до вірусу лейкозу сироватки крові ВРХ 2. Негативні (-) в РІД і ІФА на антитіла до вірусу лейкозу сироватки крові ВРХ 3. Панель стандартних сироваток крові ВРХ, яка вміщує як негативні, так і позитивні сироватки крові з різними значеннями оптичної густини (ОГ) 4. Позитивні (+) в ІФА проби молока корів на антитіла до вірусу лейкозу ВРХ 5. Негативні (-) в ІФА проби молока корів на антитіла до вірусу лейкозу ВРХ 6. Міжнародна позитивна стандартна сироватка крові Е4 Фактичні дані, що підтверджують принципову можливість проведення об'єднання (пулування) проб сироваток крові та молока при дослідженні на лейкоз великої рогатої худоби методом ІФА, показані в наданих нижче таблицях схемах (додатки 1, 2, 3). Таблиця 1 Результати проведення лабораторних досліджень молока корів в ІФА з метою вивчення можливості їх пулування № з/п Матеріал для досліджень Рез-ти в ІФА +/- в ІФА Негативні (-) в ІФА проби молока корів (не вміщують антитіла до ВЛ ВРХ) 1 Проба молока 0,064 (-) Проби молока корів, які вміщують антитіла до ВЛ ВРХ 2 Проба молока позитивна, з мінімальним значенням ОГ 0,550 (+) 2.1 Проба молока №2 розведена пробою №1 (1:5) 0,286 (-) 2.2 Проба молока №2 розведена пробою №1 (1:10) 0,112 (-) Міжнародна стандартна сироватка крові Е4, яка вміщує антитіла до вірусу лейкозу ВРХ (National Veterinary Laboratory, Copenhagen, Denmark) 3 Розведена 1:10 стандартна сироватка крові Е4 0,942 (+) Пули (комбінації стандартної сироватки крові Е4, розведеної 1:10 з різними розведеннями проб молока, що не вміщують антитіла до вірусу лейкозу ВРХ) 4 Проба №3 + проба №1 (1:1) 0,805 (+) 5 Проба №3 + проба №1 (1:5) 0,555 (+) 6 Проба №3 + проба №1 (1:10) 0,268 (-) 7 Проба №3 + проба №1 (1:20) 0,197 (-) Середнє значення ОГ позитивного контролю (К+) в ІФА 0,545 (+) Середнє значення ОГ негативного контролю (К-) в ІФА 0,074 (-) Таблиця 2 Результати проведення лабораторних досліджень сироваток крові великої рогатої худоби (ВРХ) в ІФА з метою вивчення можливості їх пулування № з/п Матеріал для досліджень Рез-ти РІД Рез-ти ІФА Негативні в РІД і ІФА сироватки крові (не вміщують антитіла до вірусу лейкозу ВРХ) 1 Сироватка крові нативна (-) 0,060 2 Сироватка крові нативна (-) 0,054 +/- в ІФА (-) (-) 5 45285 6 Продовження таблиці 2 Позитивні (+) в РІД і ІФА сироватки крові (вміщують антитіла до вірусу лейкозу ВРХ) Сироватка крові позитивна, з мінімальним 3 (-) 0,594 (+) значенням ОГ Сироватка крові №3 розведена сироваткою 3.1 (-) 0,420 (-) крові №1 і №2 - 1:5 Сироватка крові №3 розведена сироваткою 3.2 (-) 0,221 (-) крові №1 і №2 - 1:10 Сироватка крові №3 розведена сироваткою 3.3 (-) 0,118 (-) крові №1 і №2 - 1:20 Сироватки із панелі стандартних негативних і позитивних сироваток крові для ІФА 4 Позитивні стандартні сироватки (+) 1,280 (+) 5 -------------------------//--------------------(+) 0,952 (+) 6 -------------------------//--------------------(-) 0,558 (+) 7 Негативні стандартні сироватки (-) 0,065 (-) 8 -------------------------//--------------------(-) 0,94 (-) 9 -------------------------//--------------------(-) 0,114 (-) Пули (комбінації сироваток в співвідношенні 1:5 з різними значеннями показників ОГ) 10 Сироватки крові: №4 + №1,2,7,8,9 (-) 0,728 (+) 11 Сироватки крові: №5 + №1,2,7,8,9 (-) 0,555 (+) 12 Сироватки крові: №6 + №1,2,7,8,9 (-) 0,220 (-) 13 Сироватки крові: №1,2,7,8,9 (-) 0,077 (-) Міжнародна стандартна сироватка крові Е4, яка вміщує антитіла до вірусу лейкозу ВРХ виробництва (National Veterinary Laboratory, Copenhagen, Denmark) Розведена 1:10 стандартна сироватка крові Е4 + сиро(-) 0,572 (+) ватка №1, співвідношення 1:5 (кінц. розв. 1:50) Середнє значення ОГ позитивного контролю (К+) 0,545 (+) Середнє значення ОГ негативного контролю (К-) 0,074 (-) Таблиця 3 Порівняння результатів дослідження різних сироваток крові ВРХ і їх пулів на наявність антитіл до вірусу лейкозу методами ІФА і РІД № з/п 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 Матеріал для досліджень Негативні сироватки крові ВРХ, що не вміщують антитіл до вірусу лейкозу Позитивні сироватки крові ВРХ, що вміщують антитіла до вірусу лейкозу Пули позитивних сироваток крові ВРХ з негативними сироватками (1:5) Пули позитивних сироваток крові ВРХ з негативними сироватками (1:10) Сироватки крові ВРХ, що вміщують антитіла до вірусу лейкозу Пули позитивних сироваток крові ВРХ з негативними сироватками (1:5) Пули позитивних сироваток крові ВРХ з негативними сироватками (1:10) Сироватки крові ВРХ, що вміщують антитіла до вірусу лейкозу Пули позитивних сироваток крові ВРХ з негативними сироватками (1:5) Пули позитивних сироваток крові ВРХ з негативними сироватками (1:10) Середнє значення ОГ позитивного контролю (К+) Середнє значення ОГ негативного контролю (К-) Кількість проб/пулів Рез-ти ІФА ОГ ІФА Рез-ти РІД 25 (-) 0,054-0,119 (-) 32 (+) 0,884-1,075 (+) 10 (+) 0,449-0,582 (-) 10 (+) 0,367-0,484 (-) 24 (+) 0,615-0,794 (+) 8 (+) 0,399-0,453 (-) 8 (+) 0,296-0,314 (-) 15 (+) 0,311-0,430 (-) 7 (-) 0,238-0,269 (-) 7 (-) 0,128-0,197 (-) (+) 0,285 (-) (-) 0,056 (-) 7 Комп’ютерна верстка М. Ломалова 45285 8 Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601