Спосіб оцінки спонтанної хемілюмінесценції

Спосіб оцінки спонтанної хемілюмінесценції, що полягає в реєстрації спонтанної хемілюмінесценції біологічного об'єкта і графічному записі кривої спонтанної хемілюмінесценції, який відрізняється тим, що додатково визначають показник спонтанної хемілюмінесценції як відношення метричної довжини кривої спонтанної хемілюмінесценції до довжини лінії, яка з'єднує початок та кінець кривої спонтанної хемілюмінесценції танної хемілюмінесценції та встановлюють температурній режим 37°С фотоелектричного множника та кювети протягом ЗО хвилин 3 Реєструють інтенсивність випромінювання світла за певний час еталонним джерелом надслабкого світла яке має номінальне значення 5* 102квант*с 1*см 4 Вимірюють певний час фон установки з порожньою кюветою для реєстрації спонтанної хемілюмінесценції, обумовленої тепловім випромінюваним та флуктуаціями фотоелектричного множника 5 Вносять до кювети 1,5мл сироватки крові 6 Реєструють інтенсивність випромінювання світла сироваткою крові за певний час 7 Оцінюють спонтанну хемілюмінесценцію як частку зареєстрованої інтенсивності випромінювання світла по відношенню до інтенсивності випромінювання світла еталонним джерелом надслабкого світла за мінусом фонової інтенсивності випромінювання світла порожньої кювети (Серкиз Я И , Чеботарев Е Е , Барабой В А и др Хемилюминесценция крови в экспериментальной и клинической онкологии - Киев, Наукова думка, 1984-С 3 4 - 3 6 ) Суттєвими ознаками аналогу і винаходу, що збігаються, є такі 1 Реєстрація хемілюмінесценції біологічного об'єкта 2 Оцінка спонтанної хемілюмінесценції біологічного об'єкту 1 00 (О 00 48687 Однак, при використанні цього способу оцінки спонтанної хемілюмінесценції різних біологічних об'єктів одержувані дані відображаються у вигляді ряду цифр, але найбільш досконалим відображенням отриманих даних є побудова графіку, так як при такому способі реєстрації даних збільшується достовірність та відтворюваність отриманих результатів Однак при побудові графіка, який описує процес спонтанної хемілюмінесценції, що здійснюється дослідником, можуть виникнути помилки та неточності в побудові графіка та, ВІДПОВІДНО, В інтерпретації даних, що значно знижує точність проведеного дослідження Крім того, при використанні цього способу існує ряд факторів, які можуть негативно вплинути на достовірність результатів дослідження По перше, це застосування радюлюмінісцентного еталонного джерела надслабкого світла, що являє собою певну КІЛЬКІСТЬ радіоактивного ізотопу, у якому згодом відбувається зменшення активності, та, ВІДПОВІДНО, інтенсивності випромінювання світла, що вимагає введення поправочних коефіцієнтів для перерахування По друге, теплове випромінювання та флуктуації самого фотоелектричного множника не можуть не впливати на кінцевий результат вимірювання, тому що при використанні даного способу, передбачається окрема реєстрація теплового фону і ступеню флуктуації фотоелектричного множника Найбільш близьким за технічною сутністю та досягаємим результатом є спосіб оцінки спонтанної хемілюмінесценції, що полягає в наступному 1 Отримують кров або сіновіальну рідину стандартним способом 2 Вносять до кювети апарату для реєстрації спонтанної хемілюмінесценції досліджуваний об'єкт разом зі спеціальнім середовищем 3 Реєструють спонтанну хемілюмінесценцію біологічного об'єкта певний проміжок часу 4 Протягом усього дослідження реєструють графічно інтенсивність випромінювання світла біологічнім об'єктом 5 Вимірюють на отриманій кривій амплітуду спалаху спонтанної хемілюмінесценції біологічного об'єкта 6 Реєструють хемілюмінесценцію стандартного радюлюмінісцентного джерела світла СФХМ-1, сумарній СВІТЛОВІЙ потік якого становить 8,42*10*л КВЗНТ/и*4тт певний проміжок часу 7 Протягом усього контрольного дослідження реєструють графічно інтенсивність випромінювання світла стандартнім радюлюмінісцентним джерелом 8 Вимірюють на отриманій кривій амплітуду спалаху хемілюмінесценції стандартного радюлюмінісцентного джерела 9 Оцінюють спонтанну хемілюмінесценцію біологічного об'єкта по відношенню амплітуди сполоху кривої спонтанної хемілюмінесценції біологічного об'єкта та амплітуди кривої спонтанної хемілюмінесценції стандартного радюлюмінісцентного джерела (Мульдияров П Я , Пирязева Н А , Пирязев А П Хемилюминесценция цельной крови и цельной синовальной жидкости при ревматоидном артрите //Ревмато-логия -1992-№1 -С 16-18) Спільними суттєвими ознаками прототипу і способу, що заявляється, є 1 Реєстрація спонтанної хемілюмінесценції біологічного об'єкту 2 Графічний запис кривої спонтанної хемілюмінесценції біологічного дослідження, хворому був поставлений КЛІНІЧНИЙ діагноз - Гіпертонічна хвороба, II стадія Враховуючі часту асоціацію гіпертонічної хвороби с накопиченням продуктів перекисного окислення ЛІПІДІВ та зменшенням протекторної дії антиоксидантної системи, а також з метою оптимізацм застосовуємої протиппертензивної терапії, у хворого була проведена оцінка спонтанної хемілюмінесценції плазми крови Отримання плазми крови здійснювали загальноприйнятим способом Оцінку спонтанній хемілюмінесценції визначали як частку зареєстрованої інтенсивності випромінювання світла по відношенню до інтенсивності випромінювання світла еталонним джерелом надслабкого світла за мінусом фонової інтенсивності випромінювання світла порожньої кювети Отриманні результати оцінки спонтанної хемілюмінесценції плазми крови даним способом, показали що, рівень спонтанної хемілюмінесценції склав 1,45, що свідчило про низький рівень спонтанної хемілюмінесценції, який маже дорівнював даним практично здорових осіб (1,42) Такий метод оцінки спонтанної хемілюмінесценції, був помилковим, тому що такий показник спонтанної хемілюмінесценції більш відповідав показнику норми Однак, враховуючи що розвиток гіпертонічної хвороби супроводжується накопиченням продуктів перекисного окислення ЛІПІДІВ та зменшенням протекторної дії антиоксидантної системи, внаслідок чого повинно було в значній мірі збільшуватися рівень спонтанної хемілюмінесценції, отримані результати не достовірно відображали рівень спонтанної хемілюмінесценції в організмі дослідженої особи та стан антиоксидантної системи, що могло би привести до помилкової оцінки стану серцево-судиної системи у дослідженого Одночасно з вищезгаданим способом була проведена оцінка спонтанної хемілюмінесценції плазми крови згідно способу, що пропонується Оцінка спонтанної хемілюмінесценції плазми крови даним способом свідчила, що показник спонтанної хемілюмінісценцм склав 1,86 Така оцінка спонтанної хемілюмінесценції свідчила про більш реальне визначення процесів, які характеризують спонтанну хемілюмінісценцію у хворих на гіпертонічну хворобу та дозволила рекомендувати хворому призначення лікарскіх засобів, які спричиняють антиокисну дію з метою впливу на найбільш практично здорових осіб, 34 хворих на гіпертонічну хворобу різних стадій захворювання у ВІЦІ ВІД 17 до 73 років (середній вік склав 40,3 ± 10,9 років), з них жінок було 45,83%, ЧОЛОВІКІВ - 54,17% Після визначення у здорових осіб показник спонтанної хемілюмінісценцм склав 1,26 ± 0,98 Спосіб здійснюється слідуючим чином 1 Прогрівають апаратуру для реєстрації спонтанної хемілюмінесценції 2 Встановлюють температурній режим 37°С фотоелектричного множника та кювети протягом 10 -15 хвилин 3 Вносять до кювети апарату для реєстрації спонтанної хемілюмінесценції досліджуваний об' 48687 ЄЮ" 4 В разі потреби виходячи з внутрішніх властивостей досліджуваного об'єісгу додають до нього необхідне середовище 5 Реєструють спонтанну хемілюмінесценцію біологічного об'єісга певний проміжок часу 6 Протягом усього дослідження реєструють графічно інтенсивність випромінювання світла біологічнім об'єктом 7 Вимірюють на графіку метричну довжину кривої спонтанної хемілюмінесценції 8 Вимірюють на графіку довжину лінії, яка з'єднує початок та кінець кривої спонтанної хемілюмінесценції 9 Визначають показник спонтанної хемілюмінесценції як відношення метричної довжини кривої спонтанної хемілюмінесценції до довжини лінії, яка з'єднує початок та кінець кривої спонтанної хемілюмінесценції 10 Оцінюють спонтанну хемілюмінесценцію біологічного об'єкта Приклад Хворій С 43 років надійшов в кардіологічне відділення Запорізької обласної клінічної лікарні з скаргами на запаморочення, головний біль, "МІЛЬТІШИННЯ цяток" перед очами, дзвін у вухах, задишку при фізичному навантаженні Вважає себе хворим протягом 8 років, коли вперше, без видимої причини, було зареєстровано носову кровотечу, яка супроводжувалася підвищенням артеріального тиску до 190 та 120мм рт ст Згодом хворий неодноразово знаходився на стаціонарному лікуванні з приводу гіпертонічної хвороби, одержував амбулаторну терапію р-блокаторами і діуретинами За тиждень до надходження в клініку, після сильного псіхоемоційного потрясіння, з'явилися вищезазначені скарги на тлі високих цифр артеріального тиску (до 180 і 110мм рт ст), і хворий був госпіталізований для купіровання гіпертонічного криза та корекції проводимо! терапії Анамнез життя - без особливостей, мати хворого страждала гіпертонічною хворобою, іншої спадкової патології в родині не виявлено Пацієнт палить протягом 13 років, ІНШІ ШКІДЛИВІ звички заперечує, алергологічний анамнез не обтяжений Об'єктивно спостерігаються наступні зміни Артеріальний тиск в момент надходження 180 і 100мм рт ст на ЛІВІЙ І 185 і 110мм рт ст на правій плечових артеріях, пульс 84 ударів в хвилину, задовільних властивостей При пальпації верхівний поштовх визначається на 2 - 2,5см зовні від середньо-ключичної лінії з лівої сторони в 6 міжребір'ї, поширений, збільшений по висоті, посилений Перкуторно - розширення границь відносної серцевої тупості, аускультативно - ДІЯЛЬНІСТЬ серця правильна, посилений 1 тон на верхівці серця, в легенях дихання везикулярне, жорсткувате, в нижніх відділах з обох боків одиничні вологі дрібнобулькасті неконсонуючі хрипи Частота дихання 20 в 1 хвилину, дихання поверхневе На електрокардіограмі - ознаки гіпертрофії міокарда лівого шлуночка, порушення процесів реполярізацм в лівих грудних відведеннях При ехокардюграфічному дослідженні спостерігається збільшення кінцеводіастолічного і кінцеВОСІСТОЛІЧНОГО об'ємів лівого шлуночка, помірне зниження його скорочувальних властивостей, потовщення задньої стінки лівого шлуночка та між шлуночкової перетинки, наявна гіпертрофія міокарда лівого шлуночка (індекс маси міокарда лівого шлуночка 123г/м3) При ренгенологичному дослідженні в легенях посилений судинний малюнок, корені структурні, тяжисті, більше з правої сторони При дослідженні очного дна визначається звуження і склерозування артерій, вени повнокровні, поширені, феномен Салюса-Гуна II - III ступеня Дані інших інструментальних та лабораторних досліджень без особливостей Враховуючи скарги хворого, клінічну картину захворювання, дані об'єктивного дослідження і зважаючи на результати додаткових способів об'єкта Однак, незважаючи на те, що існує принципова можливість оцінки спонтанної хемілюмінесценції цим методом, варто помітити, що отримані результати характеризуються відносно низьким рівнем точності і вірогідності Це, насамперед, стосується застосування методики реєстрації та оцінки даних, при якій відбувається урахування лише одного параметра, а саме амплітуди швидких спалахів кривої спонтанної хемілюмінесценції Разом з тим, не аналізується такий важливий параметр спонтанної хемілюмінесценції, як невеликі по інтенсивності, але значні по КІЛЬКОСТІ НИЗЬКОІНТЄНСИВНІ спалахи кривої спонтанної хемілюмінесценції, що приводять до формування загального тренду кривої спонтанної хемілюмінесценції, що значно впливає на кінцевий результат 3 іншого боку застосування як еталону стандартного радюлюмінісцентного джерела світла вимагає внесення поправочних коефіцієнтів, тому що з часом відбувається ослаблення інтенсивності випромінювання світла стандартним джерелом, що в підсумку значною мірою погіршує точність, вірогідність, а особливо відтворюваність результатів дослідження В основу винаходу поставлено задачу удосконалення способу оцінки спонтанної хемілюмінесценції шляхом визначення показника хемілюмінесценції, що забезпечить підвищення достовірності, точності і відтворюваності результатів дослідження Поставлена задача вирішується тим, що в способі оцінки спонтанної хемілюмінесценції, що полягає в реєстрації спонтанної хемілюмінесценції біологічного об'єкта, графічному запису кривої спонтанної хемілюмінесценції НОВИМ є те, що додатково визначають показник спонтанної хемілюмінесценції як відношення метричної довжини кривої спонтанної хемілюмінесценції до довжини лінії, яка з'єднує початок та кінець кривої спонтанної хемілюмінесценції Причинно-наслідковий зв'язок між сукупністю ознак, що заявляються, та технічним результатом полягає в наступному у запропонованому способі передбачається розрахунок показника спонтанної хемілюмінесценції, при цьому відбувається підвищення точності і достовірності результатів дослідження, тому що здійснюється реєстрація не тільки високоштенсивних спалахів кривий спонтанної хемілюмінесценції, які свідчать про швидкі та інтенсивні реакції, у результаті яких відбувається генерація квантів світлового випромінювання та які характеризують переважно вільнорадикальні реакції, пов'язані передусім з перекисним окислюванням ЛІПІДІВ, але й невеликих за інтенсивністю, але 48687 8 ливості фотоелектричного множника приведе часто повторюваних спалахів кривої спонтанної усього лише до зміни масштабу аналізованих крихемілюмінесценції, які насамперед обумовлені вих, що ніяк не позначиться на кінцевому резульферментативними процесами, що приводять до таті дослідження Все вище наведене, повною мігенерації вільних радикалів, або через високій рірою дає підставу підсумувати, що застосування вень антиокисних реакцій, що призводять до гасінзапропонованого способу оцінки спонтанної хеміня швидких спалахів кривої спонтанної хемілюмілюмінесценції дозволить визначити необхідний несценції, тому що ланцюгові реакції параметр із високим ступенем точності, вірогідносвільнорадикального окислювання в біологічних ті і відтворюваності результатів дослідження об'єктах постійно конкурують з антиокисними механізмами, що в цілому й обумовлює їх відносно Для визначення показника норми було обстестійкий, квазістацюнарний стан, якій реєструється жено 82 людей, з них 48 патогенетичне обумовлеу вигляді кривої спонтанної хемілюмінесценції З ні процеси розвитку патологічного процесу Через іншого боку, пропонований методичний прийом 12 тижнів комплексного лікування, яке включало оцінки показника спонтанної хемілюмінесценції додаткове застосування лікарських засобів, які значною мірою підвищує відтворюваність резульзменшують рівень спонтанної хемілюмінісценцм та татів дослідження, тому що зводить цілком наніпідвищують резерви антиоксидантної системи, при вець вплив часового аспекту при реєстрації та контрольному обстеженні поряд з поліпшенням наступній ОЦІНЦІ кривої спонтанної хемілюмінесцеклінічної картини захворювання та позитивною нції, так як оцінка параметрів, які необхідні для динамікою даних інструментальних досліджень, визначення показника спонтанної хемілюмінесцеспостерігалося достовірне зменшення рівня споннції, здійснюється за однаковий проміжок часу Це танної хемілюмінесценції - показник спонтаної хедозволяє оцінювати процеси спонтанної хемілюмімілюмінісценцм на кінець курсу терапії склав 1,38 несценції як за відносно короткі проміжки часу, як Таким чином, використання способу, що пропонувикористовуються в рутинних діагностичних проється, дозволило вчасно визначити високий рівень цедурах, так і за більш тривалі часові періоди, допроцесів спонтанної хемілюмінісценцм та їхнє зазволяючи вивчати різноманітні хронобюлопчні лучення до розвитку патологічних реакцій, та приаспекти перебігу вільнорадикальних процесів У значити патогенетичне зумовлену терапію, що в пропонованому способі оцінки спонтанної хемілюпідсумку призвело до підвищення якості діагностимінесценції нівелюються технічні вимоги, до апаки, дозволило оптимізувати лікування і відвернути ратного забезпечення процесу реєстрації та оцінки появу ускладнень спонтанної хемілюмінесценції, тому що зміна чут ДП «Український інститут промислової власності» (Укрпатент) вул Сім'ї Хохлових, 15, м Київ, 04119, Україна ( 0 4 4 ) 4 5 6 - 2 0 - 90 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)216-32-71